反相高效液相色谱法测定福多司坦片的含量*

易 红 ，杨思芸，王 鹏，崔健毓，袁浩宇

（1.核工业四一六医院，四川 成都 610051； 2.四川省南充市中心医院·川北医学院第二临床医学院，四川 南充 637000）

福多司坦为黏液溶解剂，是具有司坦基本骨架的半胱氨酸衍生物，由日本三菱制药和S.S制药在20世纪80年代末研制出。其通过抑制气管中杯状细胞的过度形成和岩藻黏蛋白的产生，从而减少黏液分泌并降低痰液的黏性，还可以增加呼吸道黏膜的浆液分泌来稀释痰液，并具有抗炎作用，适用于支气管哮喘、慢性支气管炎、支气管扩张症、肺结核、尘肺症、肺气肿、非典型分枝杆菌感染、弥漫性细支气管炎等慢性呼吸系统疾病的祛痰[1]，临床应用较广泛。本研究中建立了测定福多司坦含量的反相高效液相色谱（RP－HPLC）法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

2010C型高效液相色谱仪，LC－Solution型色谱工作站（日本岛津公司）；PB－10型pH计，BS224S型电子天平（德国Sartorius公司）。

1.2 试药

福多司坦对照品（含量为99.9%，上海江莱生物科

技有限公司）；福多司坦片（自制制剂，规格为每片0.2 g，

批号分别为 150301，150302，150303）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：大连依利特Hypersil BDS C18柱 （200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.02 mol/L 戊烷磺酸钠溶液（磷酸调 pH 为 2.2 ±0.1）－乙腈（94∶6）；流速：1.0 mL/min；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μL。理论板数按福多司坦峰计算不小于4 000，且和相邻杂质峰的分离度大于或等于1.5。

2.2 溶液制备

供试品溶液：取福多司坦片10片，研细，称取适量（约200 mg），精密称定，置100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液1 mL，置10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液：取福多司坦对照品20 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成1 mL含福多司坦0.2 mg的溶液。

空白辅料溶液：按处方比例称取200 mg主药对应的空白辅料，按供试品溶液制备方法制备，即得。

2.3 方法学考察

空白干扰试验：将2.2项下3种溶液各吸取20 μL注入色谱仪，测定并记录，结果见图1。福多司坦的保留时间约为7.0 min，与其他杂质峰的分离度符合要求，空白流动相和辅料不干扰福多司坦的测定。

破坏性试验：取3份福多司坦片，每份10片，研磨，取细粉，分别置100 mL容量瓶，待检。1）酸解试验，加0.1 mol/mL 盐酸 10 mL，室温放置 2 h后，用 0.1 mol/mL氢氧化钠中和至中性；2）碱解试验，加0.1 mol/mL氢氧化钠10 mL，室温放置2 h后，用0.1 mol/mL盐酸中和至中性；3）氧化试验，加30%H2O25 mL，室温放置2 h；4）高温试验，取本品10片，在60℃下放置5 d；5）强光试验，取本品10片，在强光[照射度为（4 500±500）lx]下照射5 d。随后将分别处理后的样品定容，并按2.2项下方法制备供试品溶液，依法测定。色谱图见图2。

图1 高效液相色谱图

图2 破坏性试验色谱图

线性关系考察：取福多司坦对照品50 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加流动相溶解并定容，作为贮备液。将贮备液制成质量浓度为 50.0，100.0，150.0，200.0，300.0 μg/mL 的溶液，分别注入色谱仪。以峰面积（A）对质量浓度（C，μg/mL）进行线性回归，得线性回归方程A=34 050C+5 247.2，r=0.999 9（n=5）。结果表明，福多司坦质量浓度在 50.0 ～300.0 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。按信噪比（S/N）为3和10，测得福多司坦的检出限和定量限分别为0.2 μg/mL和 1 μg/mL。

精密度试验：将同一对照品溶液注入色谱仪，结果峰面积的RSD为0.46%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品（批号为150301），按2.2项下方法平行制备供试品溶液6份，按外标法测定含量。结果福多司坦的平均百分含量为99.23%，RSD为0.62%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：于空白辅料中，按照处方量的80%，100%，120%加入对照品，用流动相稀释制成低、中、高质量浓度（160.0，200.0，240.0 μg/mL）的溶液，每个质量浓度平行制备3份，照2.2项下方法分别精密吸取20 μL进样，计算回收率。结果见表1。

表1 福多司坦加样回收试验结果（n=3）

稳定性试验：将供试品（批号为150301）溶液置4℃进样池中，分别于0～10 h每2 h分析1次。结果峰面积的RSD为 0.44% （n=5），表明在 10 h内 4℃环境中供试品溶液较稳定。

2.4 样品含量测定

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL，注入色谱仪，记录峰面积，以外标法计算样品中福多司坦的含量。结果3批样品的标示百分含量分别为99.34% ，99.57%，100.01%。

3 讨论

福多司坦不仅具有较好黏液溶解作用，还具有一定的抗炎作用，并同抗生素有一定协同作用，有利于疾病的治疗[2－4]。

目前，测定福多司坦的方法主要有HPLC法[5－7]、荧光分光光度法[8]和液相色谱－质谱联用（LC－MS/MS）法[9]，参考文献[10－11]，建立了RP－HPLC法测定福多司坦片中福多司坦的含量。福多司坦为半胱氨酸衍生物，结构中无共轭体系。50.0 μg/mL的福多司坦对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行紫外扫描，图谱中只有末端吸收，因而检测波长选定为210 nm。

福多司坦结构中含有氨基和羧基2种官能团，极性较大，在C18柱中进行分析时保留时间很短，有学者直接以水为流动相[12－13]，考虑到对色谱柱的保护并参考文献[11]，在流动相中加入离子对试剂戊烷磺酸钠，调节流动相的pH，以增加福多司坦在C18柱上的吸附保留。当流动相为0.02 mol/L戊烷磺酸钠溶液（磷酸调pH 为 2.2 ±0.1）－乙腈（94∶6）时，福多司坦的保留时间合适，对称性和分离度均符合要求，因此确定为流动相。