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反相高效液相色谱法测定福多司坦片的含量*

2018-09-27杨思芸崔健毓袁浩宇

中国药业 2018年19期
关键词:容量瓶供试流动

易 红 ,杨思芸,王 鹏,崔健毓,袁浩宇

(1.核工业四一六医院,四川 成都 610051; 2.四川省南充市中心医院·川北医学院第二临床医学院,四川 南充 637000)

福多司坦为黏液溶解剂,是具有司坦基本骨架的半胱氨酸衍生物,由日本三菱制药和S.S制药在20世纪80年代末研制出。其通过抑制气管中杯状细胞的过度形成和岩藻黏蛋白的产生,从而减少黏液分泌并降低痰液的黏性,还可以增加呼吸道黏膜的浆液分泌来稀释痰液,并具有抗炎作用,适用于支气管哮喘、慢性支气管炎、支气管扩张症、肺结核、尘肺症、肺气肿、非典型分枝杆菌感染、弥漫性细支气管炎等慢性呼吸系统疾病的祛痰[1],临床应用较广泛。本研究中建立了测定福多司坦含量的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

2010C型高效液相色谱仪,LC-Solution型色谱工作站(日本岛津公司);PB-10型pH计,BS224S型电子天平(德国Sartorius公司)。

1.2 试药

福多司坦对照品(含量为99.9%,上海江莱生物科

技有限公司);福多司坦片(自制制剂,规格为每片0.2 g,

批号分别为 150301,150302,150303)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:大连依利特Hypersil BDS C18柱 (200 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:0.02 mol/L 戊烷磺酸钠溶液(磷酸调 pH 为 2.2 ±0.1)-乙腈(94∶6);流速:1.0 mL/min;检测波长:210 nm;柱温:30 ℃;进样量:20 μL。理论板数按福多司坦峰计算不小于4 000,且和相邻杂质峰的分离度大于或等于1.5。

2.2 溶液制备

供试品溶液:取福多司坦片10片,研细,称取适量(约200 mg),精密称定,置100 mL容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液1 mL,置10 mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,即得。

对照品溶液:取福多司坦对照品20 mg,精密称定,置100 mL容量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,制成1 mL含福多司坦0.2 mg的溶液。

空白辅料溶液:按处方比例称取200 mg主药对应的空白辅料,按供试品溶液制备方法制备,即得。

2.3 方法学考察

空白干扰试验:将2.2项下3种溶液各吸取20 μL注入色谱仪,测定并记录,结果见图1。福多司坦的保留时间约为7.0 min,与其他杂质峰的分离度符合要求,空白流动相和辅料不干扰福多司坦的测定。

破坏性试验:取3份福多司坦片,每份10片,研磨,取细粉,分别置100 mL容量瓶,待检。1)酸解试验,加0.1 mol/mL 盐酸 10 mL,室温放置 2 h后,用 0.1 mol/mL氢氧化钠中和至中性;2)碱解试验,加0.1 mol/mL氢氧化钠10 mL,室温放置2 h后,用0.1 mol/mL盐酸中和至中性;3)氧化试验,加30%H2O25 mL,室温放置2 h;4)高温试验,取本品10片,在60℃下放置5 d;5)强光试验,取本品10片,在强光[照射度为(4 500±500)lx]下照射5 d。随后将分别处理后的样品定容,并按2.2项下方法制备供试品溶液,依法测定。色谱图见图2。

图1 高效液相色谱图

图2 破坏性试验色谱图

线性关系考察:取福多司坦对照品50 mg,精密称定,置50 mL容量瓶中,加流动相溶解并定容,作为贮备液。将贮备液制成质量浓度为 50.0,100.0,150.0,200.0,300.0 μg/mL 的溶液,分别注入色谱仪。以峰面积(A)对质量浓度(C,μg/mL)进行线性回归,得线性回归方程A=34 050C+5 247.2,r=0.999 9(n=5)。结果表明,福多司坦质量浓度在 50.0 ~300.0 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。按信噪比(S/N)为3和10,测得福多司坦的检出限和定量限分别为0.2 μg/mL和 1 μg/mL。

精密度试验:将同一对照品溶液注入色谱仪,结果峰面积的RSD为0.46%(n=6),表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一批样品(批号为150301),按2.2项下方法平行制备供试品溶液6份,按外标法测定含量。结果福多司坦的平均百分含量为99.23%,RSD为0.62%(n=6),表明方法重复性良好。

加样回收试验:于空白辅料中,按照处方量的80%,100%,120%加入对照品,用流动相稀释制成低、中、高质量浓度(160.0,200.0,240.0 μg/mL)的溶液,每个质量浓度平行制备3份,照2.2项下方法分别精密吸取20 μL进样,计算回收率。结果见表1。

表1 福多司坦加样回收试验结果(n=3)

稳定性试验:将供试品(批号为150301)溶液置4℃进样池中,分别于0~10 h每2 h分析1次。结果峰面积的RSD为 0.44% (n=5),表明在 10 h内 4℃环境中供试品溶液较稳定。

2.4 样品含量测定

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 μL,注入色谱仪,记录峰面积,以外标法计算样品中福多司坦的含量。结果3批样品的标示百分含量分别为99.34% ,99.57%,100.01%。

3 讨论

福多司坦不仅具有较好黏液溶解作用,还具有一定的抗炎作用,并同抗生素有一定协同作用,有利于疾病的治疗[2-4]。

目前,测定福多司坦的方法主要有HPLC法[5-7]、荧光分光光度法[8]和液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法[9],参考文献[10-11],建立了RP-HPLC法测定福多司坦片中福多司坦的含量。福多司坦为半胱氨酸衍生物,结构中无共轭体系。50.0 μg/mL的福多司坦对照品溶液在200~400 nm波长范围内进行紫外扫描,图谱中只有末端吸收,因而检测波长选定为210 nm。

福多司坦结构中含有氨基和羧基2种官能团,极性较大,在C18柱中进行分析时保留时间很短,有学者直接以水为流动相[12-13],考虑到对色谱柱的保护并参考文献[11],在流动相中加入离子对试剂戊烷磺酸钠,调节流动相的pH,以增加福多司坦在C18柱上的吸附保留。当流动相为0.02 mol/L戊烷磺酸钠溶液(磷酸调pH 为 2.2 ±0.1)-乙腈(94∶6)时,福多司坦的保留时间合适,对称性和分离度均符合要求,因此确定为流动相。

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