西藏部分地区羔羊球虫感染现状调查

夏晨阳，刘建枝，宋天增，翁浩博，卓 嘎，单曲拉姆，石 斌，唐文强

（1.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，拉萨 850009；2.西藏那曲地区畜牧兽医技术推广总站，那曲 852000；3.西藏日喀则动物疫病预防控制中心，日喀则 857000）

羊球虫病（coccidiosis）是由孢子虫纲（Sporozoasida）真球虫目（Eucoccidiorida）艾美耳科（Eimeriidae）艾美尔属（Eimeria）的多种球虫寄生于山羊或绵羊肠黏膜上皮细胞内引起的一种常见的原虫性疾病［1］。球虫呈世界性分布［2］，羔羊主要表现为下痢、消瘦、贫血、发育不良为特征的疾病，绵羊球虫病病原共有16种［3］。青年羊和成年羊多为亚临床感染，不表现临床症状，但会导致生长发育迟缓和繁殖性能下降，羊肉、羊奶、羊毛（绒）、羊肠衣及皮革的产量和品质均降低，给养羊业造成了巨大的经济损失，严重阻碍了小反刍动物养殖业的健康发展。西藏是我国五大牧区之一，羔羊球虫病危害严重，为了解球虫感染状况，笔者等于2016年6—9月对西藏日喀则白朗县、康马县、亚东县，那曲地区那曲县，山南地区乃东县及阿里地区日土县的绵山羊球虫种类及感染现状进行了调查，以便为更好地控制该病提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 粪样

共随机采集西藏日喀则白朗县44只、康马县50只、亚东县50只，那曲地区那曲县31只，山南地区乃东县40只，共计215只绵羊的粪便。采集阿里地区日土县48只白绒山羊粪便。每只约10 g，密封于塑料袋中，置4℃冰箱内待检。

1.2 卵囊的分离与培养

每份粪样取1 g，用饱和食盐水漂浮法镜检。将有球虫卵囊的阳性粪样每份再取5 g，置干净的烧杯内加少许饱和食盐水，用玻璃棒捣碎，将粪便转入烧杯中，加入自来水并不断搅拌至糊状，静置10 min再次搅拌，倒入20目筛子中（如果粪样较多，可分多次过滤），不断搅拌使滤液依次通过50目、100目粪筛，20目筛子中要间隔加入300 mL自来水，50目、100目粪筛分别加200 mL和100 mL，最后收集滤液。分装于50 mL带盖离心管，3 000 r/min离心10 min；取沉淀加50 mL饱和食盐水搅拌均匀，1 500 r/min离心10 min；取上清5倍体积稀释，分装于50 mL带盖离心管内，3 000 r/min离心10 min；取沉淀镜检，2.5%重铬酸钾28℃培养48～72 h，每隔3～5小时吹打1次。

卵囊孢子化完成的时间、内外残体的有无，参照文献［4］、图谱作出种类鉴定，并记数球虫数量，计算感染率。

1.3 球虫形态学鉴定

于光学显微镜下观察孢子化卵囊大小、颜色、形态结构等特征，根据Eckert J等［4］介绍的方法进行球虫种类鉴定。

2 结果

2.1 球虫感染情况

2.1.1 绵羊球虫感染情况 经饱和盐溶液漂浮法检查，215份粪便样本中185份发现有球虫卵囊，总感染率86.05%，各县球虫感染率分别为乃东县87.50%（35/40）、那曲县 87.10%（27/31）、白朗县 81.82%（36/44）、康马县88.00%（44/50）、亚东县 86.00%（43/50）。

2.1.2 山羊球虫感染情况 经饱和盐溶液漂浮法检查，日土县48份粪便样本中40份发现有球虫卵囊，羊球虫感染率 83.33%（40/48）。

2.2 球虫种类及各种球虫感染率

2.2.1 绵羊球虫种类、感染率及其分布 对185份阳性样品采用Eckert J等［4］方法进行球虫卵囊收集与培养，鉴定绵羊球虫8种，具体种类、感染率及其分布见表1。致病性最强的阿撒他艾美耳球虫（E.ahsata）感染率达30.23%，且各地均有分布。

2.2.2 山羊球虫种类、感染率及其分布 对40份阳性粪便样品采用Eckert等［4］方法进行球虫卵囊收集与培养，鉴定山羊球虫7种，具体种类、感染率见表2。致病性最强的雅氏艾美尔球虫（E.ninakohlyakimovae）感染率达27.08%，潜在危害严重。

2.3 球虫混合感染情况

2.3.1 绵羊混合感染情况 鉴定的185份阳性粪便样本中有185份感染2种以上球虫，混合感染率100.00%，最多可混合感染7种球虫，多数为3～5种；感染3种、4种和5种球虫的羊占球虫阳性羊的比例分别为24.32%（45/185）、48.65%（90/185）和 19.46%（36/185）；感染 6种和7种球虫的羊占球虫阳性羊的比例分别为5.95%（11/185）和 1.62%（3/185）。

表1 绵羊球虫种类、感染率及其分布

表2 山羊球虫种类、感染率及其分布

2.3.2 山羊混合感染情况 鉴定的40份阳性粪便样本中有40份感染2种以上球虫，混合感染率100.00%，最多可混合感染6种球虫，多数为3～5种；感染3种、4种和5种球虫的羊占球虫阳性羊的比例分别为10.00%（4/40）、27.50%（11/40）和 57.50%（23/40）；感染 6 种球虫的羊占球虫阳性羊的比例为5.00%（2/40）。

2.4 球虫的形态结构特征

2.4.1 绵羊球虫形态特征 颗粒艾美耳球虫（E.granulosa）：坛状，后部宽大，有较大的极帽、卵膜孔，黄棕色，有卵囊残体、孢子囊残体，22～35 μm×17～25 μm，孢子化时间 3～4 d。

绵羊艾美耳球虫（E.ovinoidalis）：椭圆形，卵膜孔不明显，白色或浅黄色，无卵囊残体，有孢子囊残体，17～25 μm×13～20 μm，孢子化时间 1～3 d。

小艾美耳球虫（E.parva）：球形或亚球形，无极帽、卵膜孔，无色，无卵囊残体，孢子囊残体附着一些沉着颗粒，13～22 μm×11～13 μm，孢子化时间 1～3 d。

阿撒他艾美耳球虫（E.ahsata）：卵圆形，极帽明显，黄棕色，无卵囊残体，有孢子囊残体，29～37μm×17～28μm，孢子化时间2～3 d。

温布里吉艾美耳球虫（E.weybridgensis）：宽椭圆形或亚圆形，卵膜孔有或无极帽，无卵囊残体或孢子囊残体，17～30 μm×14～19 μm，孢子化时间 1～3 d。

浮氏艾美尔球虫（E.faurei）：卵形，淡黄棕色，无卵囊残体或孢子囊残体，28～37 μm×21～27 μm，孢子化时间 1～3 d。

2.4.2 山羊球虫形态特征 艾丽艾美耳球虫（E.alijevi）：卵形或椭圆形，无色或淡黄色，卵膜孔模糊，无卵囊残体，有孢子囊残体，15～23 μm×12～22 μm，孢子化时间1～5 d。

阿氏艾美耳球虫（E.arloingi）：椭圆形，胞壁厚，无卵囊残体，有孢子囊残体，17～42 μm×13～27 μm，孢子化时间 1～2 d。

约奇艾美耳球虫（E.jolchijevi）：卵形或椭圆形，淡黄色，无卵囊残体，有孢子囊残体，26～37 μm×18～26 μm，孢子化时间2～4 d。

柯氏艾美耳球虫（E.christenseni）：卵形，胞壁厚，无色或淡黄色，无卵囊残体，有孢子囊残体，34～41 μm×23～28 μm，孢子化时间 6 d。

山羊艾美耳球虫（E.caprina）：椭圆形，深褐色至褐黄色，无卵囊残体，有孢子囊残体，27～40 μm×19～26 μm，孢子化时间2～3 d。

雅氏艾美耳球虫（E.ninakohlyakimovae）：椭圆形，胞壁薄，无色，无卵膜孔或卵膜孔模糊，无卵囊残体，有孢子囊残体，20～22 μm×14～16 μm，孢子化时间 1～4 d。

家山羊艾美耳球虫（E.hirci）：略卵圆形，浅黄色，无卵囊残体，孢子囊卵圆形，有孢子囊残体，18～23 μm×14～19 μm，孢子化时间 2～3 d。

3 讨论

卫九健等［5］报道，河南及重庆、安徽部分地区山羊共鉴定出12种艾美耳球虫，优势虫种为阿氏、艾丽、家山羊克氏艾美耳；鲍鸣等［6］报道，安徽凤台县山羊鉴定出10种艾美耳球虫，优势虫种为雅氏、阿氏、浮氏和小型艾美耳球虫；汪明等［7］报道，北京、河北地区绵羊球虫总感染率87.8%，共鉴定出10种球虫，主要流行的虫种为小型艾美耳球虫（58.65%）、艾美耳球虫（53.5%）、阿撒他艾美耳球虫（50.65%）和巴库艾美耳球虫（49.65%），混合虫种感染为普遍现象；史万贵等［8］对甘肃30个县1 476只绵羊球虫感染情况进行了调查，总感染率90.31%，共发现艾美尔属球虫9种；李春花等［9］对青海祁连县默勒镇96只绵羊进行了球虫感染情况和种类调查研究，结果显示总感染率70.8%，其中1岁羊感染率83.3%，2岁羊感染率76.7%，成年羊感染率46.7%，多为 2～5 种球虫混和感染；阎晓菲等［10］对新疆乌鲁木齐绵羊球虫感染季节动态变化进行了调查，结果表明，绵羊全年总感染率71.38%，其中夏季感染率65.28%，秋季感染率78.24%，冬季感染率62.18%，春季感染率81.58%，羔羊感染率最高，经形态学鉴定共发现7种绵羊球虫。Balicka等［11］调查波兰110只山羊群球虫感染情况，结果共检出9种艾美耳球虫，羔羊和成年羊球虫感染率分别为100%和81%，有50%羔羊出现临床症状。王利明等［12］调查发现，新疆库车县绵羊球虫总感染率100%，共鉴定出5种球虫。蒋维东等［13］调查发现，新疆和田某规模化养殖场和田羊和策勒黑羊球虫的总感染率50.90%。此结果与王利明等［12］在库车县调查结果相差较大，说明不同地区，羊球虫感染情况存在较大差异。有关西藏地区球虫研究较少。夏晨阳等［14］2013年5月—2014年4月对西藏尼木县山羊球虫进行了系统研究，研究结果显示，山羊球虫年平均感染率91.16%，感染率存在季节性，夏季感染率低（70.00%～86.67%），春秋冬季感染率高（90.00%～100%），在山羊体内发现感染有致病性强的球虫9种。

本次调查结果显示，西藏上述地区绵羊球虫平均感染率86.05%，阿里地区日土县山羊球虫感染率83.33%，总体平均感染率85.55%，各地均有绵山羊感染致病力强的球虫虫种。本次调查主要集中于6—9月份，绵、山羊球虫感染率与刘建枝等［14］调查尼木县夏季期间山羊球虫感染率结果基本一致。全国各地不同地区的绵、山羊球虫感染率不尽相同，感染种类也不尽相同，可能与各地自然生态环境等诸多因素相关，本文报道的绵羊羔羊球虫感染情况与李春花等［9］的报道相近。

笔者调查走访了西藏各地农牧民及基层兽防组织，发现截至目前项目区内绵、山羊从未做过任何球虫防治工作，因此，致病力强的球虫种类在西藏项目区内春季产羔季节羔羊死亡过程中是否扮演重要角色，仍有待深入研究。