正交试验优化养心安神颗粒提取工艺

曹丽萍 梁奇 李曙光 谢月 张子龙 杨光义

摘要：目的 优化养心安神颗粒提取工艺。方法 以挥发油得率为指标，采用单因素试验考察加水量、浸泡时间、提取时间对挥发油得率的影响；以加水量、提取时间、提取次数为考察因素，以提取液中芍药苷和总固形物含量为综合评价指标，采用正交试验设计优化养心安神颗粒的提取工艺。结果 最佳提取工艺为：桂枝、防风、佛手加8倍量水，蒸馏6 h提取挥发油；其余药味加8倍量水煎煮1 h，提取2次。结论 该提取工艺合理可行，并能较好保证制剂质量。

关键词：养心安神颗粒；挥发油；芍药苷；总固形物；高效液相色谱法；正交试验；提取工艺

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.07.019

中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2018）07-0079-04

Abstract： Objective To optimize the extraction technology for Yangxin Anshen Granules. Methods With yield of volatile oil as index， single factor tests were adopted to investigate effects of water， soaking time and distillation time on extraction technology of volatile oil. Using water amount， extraction time and extraction times as factors， the contents of paeoniflorin and total solid as indexes， orthogonal test was employed to optimize the extraction technology of Yangxin Anshen Granules. Results The optimical extraction technology conditions were as follows： Cinnamomi Ramulus， Saposhkoviae Radix， and Citri Sarcodactylis Fructus were extracted to get volatile oil with eight-folds amount water of herbs for 6 hours； other herbs were boiled with eight-folds amount water of herbs and extrancted for two times， 1 h each time. Conclusion This extraction process is reasonable and practical， and can well guarantee the quality of preparation.

Keywords： Yangxin Anshen Granules； volatile oil； paeoniflorin； total solid； HPLC； orthogonal test； extraction technology

養心安神汤为深圳市宝安区中医院临床应用多年的经验方，由白芍、大枣、麸炒白术、防风、桂枝、煅龙骨等14味中药组成，具有养心安神、调和营卫的功效，用于治疗睡眠不安、多汗等证。由于颗粒剂具有携带和使用方便、稳定性好等优点，故将其改剂型为养心安神颗粒。本研究在原汤剂水提工艺基础上对提取工艺进行优化，初步确定其制备工艺为：桂枝、佛手、防风采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，挥发油备用，蒸馏后的水溶液备用；白芍等其余11味药加水煎煮，煎煮液与上述蒸馏后的水溶液合并，合并后的药液经纯化后制粒，将挥发油喷入颗粒中，混匀，即得。本研究以挥发油得率为指标，采用单因素试验优选挥发油提取工艺条件，以加水量、提取次数、提取时间为影响因素，以芍药苷和总固形物含量为评价指标，采用正交试验优化水提取工艺，为养心安神颗粒的进一步研究与生产提供依据。

1 仪器与试药

LC-20AT高效液相色谱仪，日本岛津公司；Sartori?s BP 211D型电子分析天平，德国Sartorius公司；101-1BS电热恒温鼓风干燥箱，上海博泰公司。

芍药苷对照品，中国食品药品检定研究院，批号110736-201539，纯度96.4%；水为超纯水，乙腈为色谱纯，德国默克公司；其他试剂均为分析纯；白芍、大枣、麸炒白术、防风、桂枝、煅龙骨、煅牡蛎、山萸肉、醋五味子、浮小麦、灯芯草、合欢皮、佛手、甘草饮片，深圳市宏顺昌药业有限公司提供，经深圳市中医院药检室鉴定均符合2015年版《中华人民共和国药典》标准。

2 方法与结果

2.1 单因素试验优化挥发油提取工艺

采用单因素试验，以挥发油得率为指标，对加水量、浸泡时间、提取时间进行优选。经预试验，所得挥发油比重<1.0，按挥发油测定法（2015年版《中华人民共和国药典》四部通则2204）甲法提取挥发油。

2.1.1 加水量考察

按处方比例称取桂枝、防风、佛手饮片，每份1150 g，分别加入6、8、10、12倍量水，浸泡1 h，蒸馏提取挥发油8 h，测定挥发油量，计算挥发油提取率，结果见表1。可见，加8倍量水的挥发油提取率接近最大值，同时考虑大生产和成本等因素，确定加8倍量水提取挥发油。

2.1.2 浸泡时间考察

按处方比例称取桂枝、防风、佛手饮片，每份1150 g，加入10倍量水，浸泡0、0.5、1、2 h，提取挥发油8 h，测定挥发油量，计算挥发油提取率，结果见表2。可见，随着浸泡时间的延长，挥发油提取率无明显增加，考虑大生产和成本等因素，选择不浸泡，直接提取。

2.1.3 提取时间考察

按处方比例称取桂枝、防风、佛手饮片，每份1150 g，分别加入8倍量水，每隔1 h记录挥发油体积，计算挥发油得率，结果见表3。可见，提取时间对挥发油收率有明显影响，随着时间的延长，挥发油提取率明显增加，但提取6 h与8～10 h比较，挥发油提取率相差不大，同时考虑大生产和成本等因素，确定挥发油提取时间为6 h。

2.1.4 挥发油提取工艺验证试验

称取桂枝、防风、佛手饮片共3份，每份1150 g，加8倍量水，蒸馏回流提取6 h，挥发油提取率分别为0.067%、0.065%、0.065%，平均0.065%，RSD=0.25%，表明该提取工艺稳定、可行。

2.2 芍药苷含量测定

除桂枝、防风、佛手外，白芍等其余11味药加水煎煮，煎煮液浓缩至500 mL，作为供试品贮备液，供芍药苷含量测定和总固形物测定用。

2.2.1 色谱条件及系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85）为流动相，检测波长为230 nm。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000。色谱图见图1。

2.2.2 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含109.3 ?g芍药苷的对照品贮备液，分别精密量取对照品贮备液1、2、4、6、8、10 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成系列对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备

精密量取正交试验各供试品贮备液2 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.2.4 线性关系考察

取系列对照品溶液，按上述条件分别进样10 ?L，测得峰面积。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得标准曲线回归方程为Y=12 515.048 2X-6681.463 0，r=0.999 9，结果表明芍药苷在10.93～109.3 ?g/mL范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度试验

取芍药苷对照品溶液连续进样6次，每次10 ?L，测定峰面积，RSD=0.52%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验

按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，分别于放置0、2、4、8、12 h进样测定芍药苷峰面积，结果RSD=0.76%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.2.7 重复性试验

取同一供试品贮备液6份，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样，测定芍药苷含量。结果供试品贮备液中芍药苷平均含量为256.7 ?g/mL，RSD=0.77%，表明重复性良好。

2.2.8 加样回收率试验

取已知芍药苷含量（256.7 ?g/mL）的贮备药液，共9份，每份1 mL，分别加对照品溶液（109.3 ?g/mL）2 mL，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定峰面积，结果芍药苷平均回收率为99.7%，RSD=1.4%，见表4。

2.2.9 含量测定

精密量取对照品溶液、供试品溶液各10 ?L，按“2.2.1”项下色谱条件进样，测定药液中芍药苷含量。

2.3 总固形物测定

精密量取供试品贮备液100 mL，置干燥至恒重的蒸发皿，浓缩至干，于105 ℃干燥至恒重，得干膏，计算总固形物。

2.4 正交试验优化水提工艺

2.4.1 试验设计及结果

采用正交试验优化白芍等11味药的水提工艺。以加水量、提取次数、提取时间为影响因素，每个因素设3个水平，选用L9（34）正交表，试验安排及结果见表5～表7。

由极差R可知，提取次数对芍药苷提取量的影响最大，各因素影响大小顺序为：提取次数（C）>加水量（A）>提取时间（B）。方差分析表明，因素C（提取次数）对试验结果有显著影响（P<0.05），因素A（加水量）和因素B（提取时间）对试验结果无显著影响（P<0.10）。故选择提取工艺为A1B1C2，即：提取2次，每次加8倍量水，每次提取1 h。

2.4.2 水提工艺验证试验

取上述饮片共6份，按优选的提取工艺，即每次加8倍量水煎煮1 h，共煎煮2次，过滤，合并滤液，浓缩至250 mL，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定芍药苷含量，按“2.3”项下方法测定总固形物，结果芍药苷平均121.0 mg，总固形物平均25.3 g，见表8。表明按优选的工艺进行提取，芍药苷和总固形物含量接近最大值，该工艺合理可行。

3 讨论

白芍为方中君药，具有养血、敛阴止汗的功效[1]，其发挥药效的物质基础是单萜及其苷类、三萜类和多糖等化合物，主要有效成分是芍药苷，具有抗自由基损伤、抑制细胞内钙超载和抗神经毒性等活性，能降低血液黏度、抗血小板聚集，保护神经等[2-6]。

方中佛手、桂枝、防风均含有挥发油活性成分[7]。夏伦祝等[8]通过不同方法提取防风挥发油，出油率为0.77%～5.23%。赵兴杰等[9]提取佛手挥发油，得率为0.3%～1.19%。桂枝挥发油含量为0.2%～0.9%，其主要成分为桂皮醛，桂枝对大鼠中枢神经系统具有镇静和抗焦虑作用，桂皮醛可缩短大鼠睡眠潜伏期，增加睡眠持续时间[10]；防风挥发油协同色原酮等其他成分發挥解热、镇静、镇痛、抗炎等作用[11]；佛手挥发油具有止咳平喘祛痰、抗氧化、免疫调节等作用[12]。故本研究在原汤剂的基础上增加挥发油的提取，减少有效成分的损失。

芍药苷药效具有代表性，故选为主要指标，综合评分权重定为60%[13-15]。总固形物中其他成分对本方功效共同发挥作用，故设定总固形物权重为40%。

本研究通过芍药苷及总固形物含量进行综合评价，采用L9（34）正交试验优化养心安神颗粒提取工艺，较好地保证了制剂质量。最终确定的提取工艺为：桂枝、佛手、防风加8倍量水，提取6 h，蒸馏后的水溶液另器收集；白芍等其余11味加水煎煮3次，每次加8倍量水，每次1 h。驗证试验表明该工艺稳定可行，为养心安神颗粒的研制和生产提供了依据。

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（收稿日期：2018-01-25）

（修回日期：2018-03-06；编辑：陈静）