复方中草药对肉鸡血液生理生化指标及抗氧化功能的影响

宣晶晶， 周先建， 孙 启， 李玉巧, 周金星, 金光明， 李升和， 靳二辉

(安徽科技学院 动物科学学院，安徽 凤阳 233100)

中草药是我国独特的卫生医药资源，源于天然植物，具有来源广、毒副作用小、几乎无残留及不易产生耐药性等独特优点，逐渐在畜禽养殖生产中被广泛应用。研究发现，中草药作为一种植物，本身不仅含有丰富的营养物质，而且所具有的多种生物活性成分，对动物机体诸多生理功能产生重要影响，如增强畜禽的免疫功能、提高生产性能，并改善肉品质[1]。薛剑研究表明，日粮中添加不同粒度的黄芪粉可对肉鸡生长发育及免疫功能产生明显影响，且随着黄芪粉粒度变小，肉鸡体质量、血清抗NDV抗体效价、免疫器官指数均有明显提高[2]。高艳敏等研究发现，日粮中添加1.0%的由黄芪、甘草等组成的复方中草药可显著降低桂香鸡肌肉的滴水损失率，增加肌肉中肌苷酸、谷氨酸、甘氨酸的含量，进而改善肌肉脂肪酸的含量和比例[3]。夏春丽等研究显示，饮水添加不同剂量的当归补血汤可显著提高肉鸡脾脏和法氏囊脏器指数，并增强红细胞免疫和体液免疫功能[4]。

以上研究充分证实，黄芪、甘草、当归等中草药对动物生产性能、免疫功能和肌肉品质可产生明显有益影响。我国中草药种类繁多，且不同中草药组成的组方由于药效的相互作用，对动物机体生理功能产生的影响并不相同，这为养殖生产中中草药制剂的研发和应用提供了良好的基础。为此，本试验按照清热解毒、滋阴益气、扶本固正的原则，选择具有清热解毒、益气养血及促进消化功效的黄芪、当归、甘草等中草药，组成复方中草药组方，研究其不同剂量对肉鸡血液生理生化指标及抗氧化功能的影响，旨在为中草药饲料添加剂在肉鸡生产中的应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物与饲养管理

试验选用健康1日龄AA(Arbor Acres)肉鸡400羽(雌雄各半)，购自安徽万嘉禽业科技发展有限公司，饲养于安徽省定远县宏远肉鸡养殖合作社。肉鸡进雏前,鸡舍熏蒸消毒，采用网上平养，粉料饲喂，环境湿度维持在65%左右，前3 d控制温度在33±1 ℃，以后随着肉鸡的日龄增长逐渐降低，直至24 ℃，并保持此温度到42日龄，给予24 h光照制度，自由采食和饮水。常规免疫程序接种新城疫和法氏囊疫苗。饲养管理参考肉鸡饲养管理要求进行，每天记录温度和相对湿度。

1.2 中草药组方及主要成分

黄芪、当归、甘草、枸杞、金银花、熟地、淫羊藿和女贞子是本试验所用复方中草药的主要中药材，购于亳州市中药材大市场。经烘干后去除杂质，然后采用中药粉碎机充分粉碎，最后按比例混合待用。

1.3 试验设计

试验采用单因素试验设计，400羽刚出壳的AA肉鸡称重后，按照公母各半和体重相近原则,被分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组，每组5个重复，每个重复20羽，对照组饲喂玉米-豆粕型基础日粮，基础日粮根据NRC(1994)推荐的肉仔鸡营养标准配制，试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别在基础日粮中添加0.5%、1.0%和1.5%的复方中草药，试验期42 d。

1.4 样品采集与处理

分别在21和42日龄，从每组中随机抽取20羽(雌雄各10羽)，共80羽肉鸡，禁食12 h以上，称重后分别采用肝素钠抗凝真空采血管和分离胶真空促凝分离采血管从翅下静脉采血1 mL和5 mL血液。颈动脉放血致死。

1.5 血液生理生化指标的测定

肝素钠抗凝真空采血管采集的1 mL血液样品立即用兽用全自动血液细胞分析仪(BC-2800Vet)测定血液生理指标。将采集的血液样品在室温静置2 h后，于4 ℃条件下3 000 r/min离心15 min，分离血清，一部分经全自动血清生化分析仪(上海科华卓越360)测定血清生化指标，一部分-70 ℃保存待用。

1.6 抗氧化功能指标测定

肉鸡血清经-70 ℃保存后，室温溶解，分别采用超氧化物歧化酶(SOD)(Cat No：A001-3)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)(Cat No：A005)、总抗氧化能力(T-AOC)(Cat No：A015)和丙二醛(MDA)(Cat No：A003-2)检测试剂盒测定血清抗氧化酶活性、总抗氧化能力及MDA含量，抗氧化试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.7 数据处理与分析

试验数据用SPSS 22.0软件进行One-way ANOVA分析，并采用LSD法进行多重比较，结果以“平均数±标准差”表示。以P<0.05作为差异显著性判断的标准。

2 结果与分析

2.1 肉鸡血液生理指标

由表1可见，21日龄时，试验Ⅱ组肉鸡红细胞数量与对照组、试验Ⅰ组和Ⅲ组相比分别升高45.74%、57.32%和62.07%(P<0.05)，而试验Ⅰ组和Ⅲ组肉鸡红细胞数量与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。试验Ⅱ组肉鸡白细胞数量与对照组相比也升高9.01%(P<0.05)。试验Ⅲ组肉鸡血小板数量与对照组和试验Ⅰ组相比分别降低41.18%和44.44%(P<0.05)。试验Ⅱ组肉鸡血红蛋白含量与对照组、试验Ⅰ组和Ⅲ组相比分别升高31.52%、27.84%和34.13%(P<0.05)；但试验Ⅰ组和Ⅲ组肉鸡血红蛋白含量与对照组相比无显著变化(P>0.05)。42日龄时，试验Ⅰ组和Ⅱ组肉鸡白细胞数量与对照组相比分别升高12.83%和11.97%(P<0.05)，但试验Ⅲ组肉鸡白细胞数量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。试验Ⅰ组和Ⅱ组肉鸡血红蛋白含量与对照组相比分别升高13.77%和14.18%(P<0.05)，但与试验Ⅲ组相比无显著差异(P>0.05)。

表1 复方中草药对肉鸡主要血液生理指标的影响

注:同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下同

Note:In the same row, mean data with the different superscripts mean significant difference (P>0.05). The same below.

2.2 肉鸡血清生化指标

由表2可知,21日龄时,试验Ⅰ组和Ⅱ组肉鸡血清TP含量与对照组相比分别升高28.73%和33.02%(P<0.05),与试验Ⅲ组相比分别升高19.71%和23.70%(P>0.05)。试验Ⅱ组肉鸡血清GLO含量与对照组、试验Ⅰ组和Ⅲ组相比分别升高48.01%、17.83%和23.85%(P<0.05);且试验Ⅰ组和Ⅲ组肉鸡血清GLO含量与对照组相比也升高25.61%和19.51%(P<0.05)。试验Ⅱ组肉鸡血清白蛋白/球蛋白比例(A/G)与对照组和试验Ⅰ组相比分别降低20.74%和11.57%(P<0.05);试验Ⅰ组肉鸡血清A/G与对照组相比也显著降低10.37%(P<0.05)。试验Ⅲ组肉鸡血清TC含量与对照组和试验Ⅱ组相比分别升高29.58%和36.90%(P<0.05)。试验各组肉鸡血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和白蛋白(ALB)含量相比均无显著差异(P>0.05)。42日龄时,试验Ⅱ组肉鸡血清TP含量与对照组和试验Ⅲ组相比分别升高19.77%和21.63%(P<0.05),但与试验Ⅰ组相比无显著差异(P>0.05)。试验Ⅱ组肉鸡血清TC含量与对照组相比降低19.49%(P<0.05),但与试验Ⅰ组和Ⅲ组相比均无显著差异(P>0.05)。

表2 复方中草药对肉鸡血清生化指标的影响

2.3 肉鸡血清抗氧化功能

由图1可知,21日龄时,试验Ⅱ组肉鸡血清GSH-Px含量与对照组和试验Ⅰ组相比分别升高18.35%和18.03%(P<0.05),但试验Ⅰ组和Ⅲ组肉鸡血清GSH-Px含量与对照组相比均无显著差异(P>0.05)。试验Ⅱ组肉鸡血清T-AOC活性与对照组相比升高22.61%(P<0.05);但试验Ⅰ组肉鸡血清T-AOC活性与试验Ⅲ组相比无显著差异(P>0.05)。试验Ⅱ组肉鸡血清MDA含量与对照组、试验Ⅰ组和Ⅲ组相比分别降低29.31%、19.51%和24.02%(P<0.05)。试验各组肉鸡血清超氧化物歧化酶(SOD)活性相比均无显著变化(P>0.05)。

42日龄时,试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和Ⅲ组肉鸡血清SOD活性与对照组相比分别升高7.63%、7.13%和6.63%(P<0.05)。试验Ⅱ组肉鸡血清T-AOC活性与对照组相比也升高32.71%(P<0.05)。试验各组肉鸡血清GSH-Px和MDA含量相比均无显著变化(P>0.05)。

图1 复方中草药对肉鸡血清抗氧化功能的影响

3 结论与讨论

3.1 复方中草药对肉鸡血液生理生化指标的影响

血液是动物机体循环系统的主要组成部分，在机体正常生理功能的维持中起着至关重要作用[5]。血液由有形的血细胞和无形的血浆两部分组成，其中血细胞可分为红细胞、白细胞和血小板三大类，这些细胞数量和形态的变化可以直接反映血液的气体运输、免疫、凝血和造血功能[6]。红细胞及其所含的血红蛋白是O2和CO2的载体，主要功能是气体运输；血小板是骨髓成熟的巨核细胞胞浆脱落而产生，主要生理功能是参与动物机体的止血和凝血；白细胞是人医临床上血常规检查的重要指标，通常被称为非特异性免疫细胞，其根据胞质内是否有颗粒及颗粒的染色特性可分为嗜中性粒白细胞、嗜酸性粒白细胞、嗜碱性粒白细胞、单核细胞和淋巴细胞，这些细胞在机体中担负着吞噬异物、抵御病原体侵入、维持机体免疫功能的作用[5]。研究发现，许多中草药组方、单一中草药及其提取物对畜禽血细胞数量可产生明显影响。曹授俊等研究报道，日粮中添加1.0%和2.0%的由党参、茯苓、黄芪等组成的复方中药饲料添加剂可显著升高断奶仔猪红细胞和白细胞的数量及血红蛋白的含量，降低血小板的数量，进而改善仔猪的造血功能[7]。甄玉国等研究显示，日粮中添加400和800 mg/kg的黄芪多糖可显著增加断奶仔猪红细胞、白细胞和淋巴细胞数量，进而增强仔猪的免疫功能[8]。本研究也发现日粮中添加1.0%的由黄芪、当归、甘草等组成的复方中草药可显著增加21日龄肉鸡红细胞数量、21和42日龄肉鸡白细胞数量和血红蛋白含量，而添加1.5%的复方中草药制剂可显著降低21和42日龄肉鸡血小板数量，表明日粮中添加1.0%的复方中草药制剂可增强肉鸡的气体运输功能和免疫功能，而添加1.5%的复方中草药制剂则可降低肉鸡的凝血功能。

血浆是血液中的无形成分，主要功能是运输组织器官所产生的维持机体生命活动所需要的物质及代谢废物，机体组织器官所产生的物质绝大部分需要通过血浆运输才能到达相应部位，进而发挥相应功能。因此，血浆中各种物质含量的变化可以直接反映不同器官的生理状态。血浆中ALT、AST、TP、ALB和GLO主要是由肝细胞所产生的，其含量变化可以反映肝脏的功能状态，而TG和TC是检测血脂水平的主要指标[9]。研究发现，日粮中添加不同中草药复方可明显影响畜禽的血清生化指标。高士争等对育肥猪的研究发现，日粮中添加适量的由黄芪、当归、白芍等组成的复方中草药可显著增加生长前期和中期血清TP、GLO和TG的含量，进而促进育肥猪的生长，并改善胴体品质[10]。姜贺对林下鸡的研究显示，日粮中添加适量的由黄芪粉、刺五加粉和松针粉组成的复合制剂可显著提高林下鸡血清总蛋白的含量，降低胆固醇和三酰甘油的含量及谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性，进而提高肉鸡的生长性能，改善肉鸡肉质性状[11]。本研究也发现，日粮中添加0.5%的由黄芪、当归、甘草等组成的复方中草药可显著升高21日龄肉鸡血清TP和GLO含量，添加1.0%的复方中草药制剂可显著升高21日龄肉鸡血清TP和GLO含量及和42日龄肉鸡血清TP含量，降低42日龄肉鸡血清TC含量，表明日粮中添加1.0%的复方中草药制剂可改善肉鸡血清生化指标。分析本研究所用复方中草药制剂对肉鸡血液生理生化指标所产生的影响，可以认为是试验所用中草药组方中的黄芪、当归、枸杞等改善肝细胞的结构，增强肝细胞的蛋白质合成功能和抗氧化功能，进而为血细胞的产生提供充足的营养物质[12-13]。

3.2 复方中草药对肉鸡血清抗氧化功能的影响

动物机体的免疫功能与抗氧化功能有着密切关系，抗氧化能力的增强能够为免疫细胞的增殖和分化提供良好的环境，进而促进免疫组织的生长发育，增强免疫功能[14]。免疫细胞的生长、分化和凋亡等细胞内事件受到多种应激因子的影响，其中氧自由基(ROS)诱导的氧化应激在这些事件中起着关键的调节作用[15]。ROS是细胞进行正常有氧呼吸和氧化还原反应中所产生的一种游离氧分子，也是对细胞内的抗氧化系统产生直接影响的诱导因子。极低浓度的ROS可以作为第二信使调节某些信号转导途径的激活，而过多的ROS则能够破坏细胞的主要结构，引起细胞氧化损伤[16]。在一般情况下，ROS的产生与细胞本身的抗氧化能力之间存在动态平衡，细胞抗氧化能力的增强能够抑制ROS的产生，阻止细胞凋亡的发生，促进细胞增殖[17-18]。细胞抗氧化能力主要依赖于细胞内抗氧化酶的活性和含量。SOD和GSH-Px是细胞内主要抗氧化酶，两者活性和含量的高低直接影响细胞的抗氧化能力。T-AOC是衡量动物机体抗氧化系统功能状况的综合性指标，它的高低可以代表机体抗氧化酶系统和非酶系统性能的状况及各抗氧化成分之间的协同作用、代偿作用及依赖作用[19]。MDA 是膜脂过氧化最重要的产物之一[20]，其能够破坏细胞膜的完整性，加剧细胞膜的损伤，影响细胞膜的正常功能，因此也被作为机体抗氧化状况的反映指标。MDA 含量越低，细胞膜脂质过氧化程度越弱，暗示机体抗氧化能力越强[21-22]。许多研究报道，日粮中添加中草药或者中草药组方可以增强畜禽机体的抗氧化功能，进而提高机体的免疫水平。孙启等研究发现，日粮中添加1.0%的由黄芪、枸杞等组成的复方中草药制剂可显著升高胸肌GSH-Px含量，降低MDA含量，进而提高肌肉抗氧化能力[23]。胡永灵等对牛的研究显示，日粮中添加50～150 g/d由王不留行、山药、何首乌等组成的复方中草药制剂可显著增加血清GSH-Px和CAT基因水平，降低淋巴细胞凋亡率，进而增强机体抗氧化功能和免疫功能[24]。龚卫忠等研究显示，日粮中添加0.5%的由黄芪、麦芽、穿心莲等组成的复方中草药超微粉可以显著提高肉鸡血清中SOD和T-AOC活性，降低MDA含量，增强肉鸡抗氧化功能[25]。本研究也发现，日粮中添加1.0%的由黄芪、当归、甘草等组成的复方中草药可以显著增加21日龄肉鸡血清GSH-Px含量、42日龄肉鸡SOD活性以及21和42日龄肉鸡T-AOC活性，降低21日龄肉鸡血清MDA含量，这表明补充1.0%的复方中草药可明显增强21和42日龄肉鸡抗氧能力。分析其主要原因是：试验所用的中草药组方中黄芪、枸杞等所含的黄芪多糖、枸杞多糖等有效成分能够通过激活细胞内的信号通路，进而提高抗氧化酶的活性[26]，清除细胞内过多的ROS，增强肉鸡血清抗氧化功能[27-28]。

综合以上结果，日粮中添加1.0%的由黄芪、当归、甘草等组成的复方中草药可明显升高肉鸡红细胞和白细胞数量，血红蛋白、血清总蛋白、球蛋白和GSH-Px的含量及SOD和T-AOC活性，降低血清MDA含量，表明适量添加复方中草药制剂可改善肉鸡血液生理生化指标，增强抗氧化功能。