白头翁粗皂苷对AA肉鸡血清抗氧化能力的影响

李 静， 苏 庆， 李立顺， 时维静， 贺绍君， 刘德义

(安徽科技学院 动物科学学院，安徽 凤阳 233100)

白头翁为毛茛科多年生白头翁属植物。始载于《神农本草经》，主要分布在东北、华北等地的山岗、荒坡及田野间[1]。白头翁可清热解毒、凉血止痢、燥湿杀虫，是防治腹泻的药[2]。还可用于治疗细菌性痢疾、阿米巴痢疾等[3]。白头翁具有抗肿瘤、增强免疫功能、抗炎、抗病原微生物、抗寄生虫、保肝及治疗内毒素血症等作用[4-5]。白头翁皂苷是白头翁的主要活性成分[6]，白头翁皂苷在体外对P-388细胞的生长抑制率为53.7%[7]，能抑制绿脓杆菌、痢疾杆菌、枯草杆菌、伤寒杆菌等的生长[8]。目前对白头翁主成分的研究只限23-羟基白桦酸和拟原白头翁素等少数几种[9]。本试验通过在AA肉鸡的饮水里添加白头翁粗皂苷提取液，测定肉鸡血清的抗氧化指标，研究白头翁粗皂苷对肉鸡血清抗氧化能力的影响，为临床用药提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物分组

1日龄AA肉鸡72只，随机分成对照组和试验组，每组2个重复，每个重复18只，在安徽科技学院附属兽医院动物房内进行立体层叠式笼养，随机分为试验组和对照组。自由采食和饮水，自然光照，保持良好的通风和温度控制，并按常规进行肉鸡的免疫接种。在1日龄时，在开口液中添加5 g腹泻清；在5日龄时，在开口液中添加10 g腹泻清；在7日龄时，进行新城疫疫苗(IV系)(生产批号：20110822，广西丽原生物股份有限公司)1.5倍剂量滴鼻点眼，颈部皮下注射0.5 mL免疫；在14日龄时，进行传染性法氏囊炎疫苗(法倍灵)(生产批号：20110906)2倍剂量滴鼻点眼免疫；在15日龄用白头翁粗皂苷提取液(由安徽科技学院时维静教授提供)连续3 d给药。试验组每日饮含0.5%药液水3 600 mL，饮完后给予清水。在18日龄时，进行新城疫疫苗(IV系)4倍剂量饮水免疫。基础日粮组成(表1)。

表1 基础日粮组成

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器 PX-8600型电热恒温水槽(上海三发科学仪器有限公司)、DL-5型低速离心机(湖南湘仪)、7230G型可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)。

1.2.2 白头翁粗皂苷提取液 取白头翁100 g，粉碎成粗粉，放于索式提取器中，以乙醚回流脱脂药粉，晾干加95%的乙醇600 mL，回流6 h，过滤。药渣用200 mL 95%乙醇分两次洗涤，合并滤液，减压浓缩至最小体积，加入过量丙酮，即析出白色粉质，再使其溶于40 mL热乙醇中，放置析出白色饴状物，使所得白色沉淀溶于甲醇，过滤，将滤液添加到丙酮-乙醚(体积比为1∶1)的混合溶剂中，滤集白色物质，低温干燥，磨细，即得白头翁总皂苷，再制备提取液。

1.2.3 试剂 过氧化氢酶(CAT)可见光试剂盒(生产批号：2011125)、超氧化物歧化酶(SOD)可见光试剂盒(批号：2011125)、丙二醛(MDA)可见光试剂盒(生产批号：2011125)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)可见光试剂盒(生产批号：2011125)，以上试剂盒均由南京建成生物工程研究所生产。生理盐水，冰醋酸(AR,国药集团)等。

1.3 血清采集与处理

在25、29、33日龄每组选6只屠宰，2个重复采血，以3 000 r/min的离心10 min，装入已编号的瓶中，于超低温冰柜中保存待测。

1.4 测定指标与方法

超氧化物歧化酶(SOD)活性采用黄嘌呤氧化酶法；谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活性采用DTNB法；过氧化氢酶(CAT)活性采用可见光法；丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法。

1.5 数据处理

试验所有数据用SPSS 17.0进行单因素方差分析，用LSD法作多重比较，试验数据用“平均数±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 白头翁粗皂苷对肉鸡血清SOD活力的影响

由表2可知，在25、29、33日龄时试验组与对照组的肉鸡血清SOD活力差异均不显著(P>0.05)。

注：同列数据肩标*表示差异显著(P<0．05)，下同。

Note: The shoulder-marked * in the same column represents a significant difference (P<0.05), the same below.

2.2 白头翁粗皂苷对肉鸡血清CAT活力的影响

由表3可知，在25日龄时，试验组的CAT活力显著低于对照组(P<0.05)；在29、33日龄时，试验组与对照组的肉鸡血清CAT活力差异不显著(P>0.05)。

表3 白头翁粗皂苷对肉鸡血清CAT活力的影响(单位：U/mL)

2.3 白头翁粗皂苷对肉鸡血清MDA含量的影响

由表4可知，在25、29、33日龄时，试验组与对照组的肉鸡血清MDA含量差异均不显著(P>0.05)。

表4 白头翁粗皂苷对肉鸡血清MDA含量的影响(单位：nmol/mL)

2.4 白头翁粗皂苷对肉鸡血清GSH-Px活力的影响

由表5可知，在25、29日龄时，试验组肉鸡血清GSH-Px活力显著低于对照组(P<0.05)，在33日龄时，试验组肉鸡血清GSH-Px活力显著高于对照组(P<0.05)。

表5 白头翁粗皂苷对肉鸡血清GSH-Px活力的影响(单位：U/mL)

3 结论与讨论

动物机体在正常新陈代谢的过程中，活性氧自由基的产生和消除始终保持着动态平衡[10]。SOD、GSH-Px、CAT是机体内重要的抗氧化酶。MDA是脂质过氧化物(LPO)氧化形成的终产物，机体内MDA的水平可直接反映LPO的水平，即显示机体脂质受活性氧自由基攻击的损害程度[11]。本课题组已有研究发现白头翁及白头翁皂苷对鸡增重、免疫器官功能有一定的促进作用，对鸡中性粒细胞的吞噬率有极显著的增强作用，白头翁及其皂苷作为免疫增强剂，具有很好的研究价值与应用前景。刘忠平等[12]研究发现白头翁水提物具有抗诱变和抗氧化作用，可使小鼠血清SOD活性及血清总抗氧化能力提高，其机制可能与消除自由基、中断或终止自由基的氧化反应，增强机体的总抗氧化能力有关。在本次试验中，对照组中肉鸡血清SOD活力呈升高趋势，而试验组在25日龄时肉鸡血清SOD活力略高于对照组，但在29、33日龄时均略低于对照组，差异不显著(P>0.05)；试验组中肉鸡血清CAT活力呈升高趋势，但在25、29日龄时，试验组肉鸡血清CAT活力低于对照组且在25日龄时差异显著(P<0.05)，在33日龄时，试验组肉鸡血清CAT活力略高于对照组，差异不显著(P>0.05)；在25、29、33日龄时，试验组与对照组肉鸡血清MDA含量均升高，且在25日龄时试验组略高于对照组，差异不显著(P>0.05)；在25、29日龄时，试验组肉鸡血清GSH-Px活力低于对照组，而在33日龄时，试验组高于对照组，试验组与对照组差异显(P<0.05)。

综上所述，本次试验结果表明，白头翁粗皂苷对肉鸡血清有一定的抗氧化能力。但在试验中，对不同日龄肉鸡血清的相关指标进行测定，差异大，无明显趋势和规律。结果可能与肉鸡不同日龄发育状况不同、中药在体内的代谢以及中药的双向调节等有关，有待进一步研究。