气相色谱法测定腌制大蒜中二烯丙基三硫醚和二烯丙基二硫醚

2018-09-12张志军张方圆王李平汤逊尤林泽鹏李雪莹

山东化工 2018年16期

张志军，张方圆，王李平，林晨，汤逊尤，方丽，林泽鹏，李雪莹

(中国广州分析测试中心，广东省分析测试技术公共实验室，广东广州 510070)

大蒜素是天然广谱抗生素药物，具有消炎、防癌抗病毒、抑制血小板凝聚、降血压、降血脂等多种生物学功能[1-2]。大蒜素不但具有很好的药用价值，其在动物养殖业也很好的经济效益，已经受到广大研究者的关注[3]。大蒜素是大蒜中有效活性成分的总称，其中二烯丙基三硫醚(DATS)和二烯丙基二硫醚(DADS)是最重要的两种功效成分[4]。新鲜的大蒜中含有大量的蒜氨酸，当受到物理机械破碎后，大蒜中的蒜氨酸酶被激活，催化蒜氨酸分解为大蒜素[6]。腌制大蒜风味独特，除了含有丰富大蒜素和大量的蛋白质外，还含有丰富的钙质，磷，铁元素和硒、锗等微量元素[7]，为大众所喜爱。本文采用气相色谱法测定腌制大蒜中二烯丙基三硫醚和二烯丙基二硫醚含量，经过方法学考察验证，气相色谱法测定腌制大蒜中大蒜素含量，结果准确、稳定，重现性好。

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

DATS标准品(中国食品药品检定研究院，含量为94.2%)，DADS标准品(中国食品药品检定研究院，含量为90.0%)，无水乙醇(色谱纯，广州化学试剂厂)，正己烷(色谱纯，广州化学试剂厂)，实验所用试剂均为分析纯。Aglient7820A气相色谱仪配备FID检测器(Aglient)；毛细管色谱柱：DB-1701 (30 m 0.25 mm 0.25 m)。XW-80A旋涡混合器(上海琪特分析仪器有限公司)；超声波水浴(fisherbrand，FB15067)。

1.2 样品处理

腌制大蒜9种(100g，购于市场)，将腌制大蒜去皮，取可食用部分，用匀浆机粉碎制成蒜泥。准确称取样品5g于100mL具塞锥形瓶中，加入10.00mL蒸馏水，涡旋1 min，加入10%NaOH溶液2滴，加塞并用封口膜缠绕确保锥形瓶密闭状态，于(60 5)℃恒温水浴中反应1h。向试样中准确加入20.00 mL乙醇，加塞，振摇后于(60 5)℃超声波水浴中超声提取60 min。趁热将提取液过滤，待滤液冷却后，移取15.00 mL于25 mL具塞比色管中，加入5.00 mL正己烷，振摇萃取2 min，静止分层，取上清液供气相色谱仪测定，以正己烷做空白对照。

1.3 结果计算

(1)

式中：W——样品中DATS或DADS的含量(mg/kg)；

A样品——样品的峰面积；

A标——标准品的峰面积；

C标——标准品浓度，μg/mL；

m样品——样品质量，g；

2——试样质量换算系数。

2 结果和讨论

2.1 色谱条件

大蒜素是挥发油性物质，性质不稳定，易挥发和分解[8]。因此，采用气相色谱法测定时，进样口和检测器的温度对方法的准确性有重要影响，温度过低时会导致气化不彻底，而温度过高会使大蒜素分解。经实验确定色谱条件为：样口温度160 ℃，检测器温度160 ℃，以He为载气，恒流流速2.0 mL/min；升温程序：初始温度为60 ℃，保持0min，以15 ℃/min升至160 ℃，保持3min，然后以60℃/min升至260 ℃保持3 min；分流比为10 1，进样体积1.0 L。在该色谱条件下，DATS和DADS分离度能满足定量要求，标准溶液谱图见图1。

图1 DATS和DADS的气相色谱图

2.2 线性范围和检出限

将DATS标准品配制成浓度为8.335 mg/mL、4.167 mg/mL、1.667 mg/mL、833.5 μg/mL和416.8 μg/mL的系列标准溶液，将DADS标准品配制成浓度为5.132 mg/mL、2.566 mg/mL、1.026 mg/mL、513.2 μg/mL、256.6 μg/mL的系列标准溶液。按照2.1确定的色谱条件，每个浓度的标准溶液平行测定3次，取平均值，与对应的浓度进行线性拟合，分别得到DATS和DADS的标准工作曲线。结果表明DATS和在416.8 μg/mL～8.335 mg/mL浓度范围内呈良好的线性，DADS在256.6 μg/mL ～5.132 mg/mL浓度范围内呈良好的线性，如图2所示。当取样量为5.00 g，定容体积为5.00 mL，稀释倍数为2时，以3倍信噪比(S/N=3)确定DATS和DADS的检出限分别为0.0055 mg/kg和0.0051 mg/kg。