淫羊藿提取工艺优化研究

张建博 王合群 郭捷 李小磊 贾保险

摘 要：作为保健食品原料，淫羊藿具有补肾益精、强壮筋骨等功效，应用醇提法提取的淫羊藿苷是重要的功效成分。本文通过正交实验设计，考察淫羊藿中淫羊藿苷的最佳提取工艺，确定最佳的醇提工艺参数为乙醇体积分数为50%，料液比为1∶10，提取时间为2h，提取温度为60℃，提取次数为2次。将按照最优工艺提取出的淫羊藿苷與淫羊藿苷标准品做薄层色谱对照，条带清晰可辨，可以用于淫羊藿保健食品功效成分的快速检测。

关键词：淫羊藿苷；醇提法；正交实验；液相色谱；薄层色谱

中图分类号：TQ461 文献标识码：A 文章编号：1003-5168（2018）17-0150-03

Study on the Optimization of Extraction Process of Epimedium

ZHANG Jianbo WANG Hequn GUO Jie LI Xiaolei JIA Baoxian

Abstract： As a raw material for health food， Epimedium has the functions of tonifying kidney and essence， strengthening bones and muscles， and so on. In this paper， the optimum extraction process of icariin in Epimedium was investigated by orthogonal design. The optimum extraction process parameters of Epimedium were as follows： the ethanol volume fraction was 50%， the ratio of material to liquid was 1∶10， the extraction time was 2 hours， the extraction temperature was 60℃， and the extraction times were two times. The extraction of icariin according to the optimal process was clear and distinguishable by TLC compared with icariin standard. It could be used for rapid detection of the efficacy components of Epimedium.

Keywords： icariin；ethanol extraction；orthogonal test；liquid chromatography；TLC

当今社会，人们的生活水平不断提高，大家对自身健康的重视程度也日益增强。西方医药虽然具有见效快、成分明确的优点，但伴随的往往是药效持久性差和副作用。因此，传统祖国医学、中西医结合的理论越来越受到广大群众的认可和欢迎。一些药食同源、食药两用的功能性植物也受到大家的广泛关注，分离植物含有的活性化合物，确认其保健功能，并将其进一步开发成具有中医药特色的功能性食品，是目前食品和保健食品科学的一个重要研究方向。

淫羊藿作为一种功能性的保健食品原料，富含有蛋白质、氨基酸、黄酮类化合物、多糖、生物碱、木脂素和微量元素等多种营养成分和活性物质，味辛甘性温，走肝肾二经，为补命门、益精气、强筋骨、补肾壮阳之药[1]。其中，淫羊藿所含的淫羊藿苷是主要的功效成分，具有增强机体免疫功能、加强性腺分泌、促进骨细胞生长、抗衰老和促进内分泌机能等作用[2]。因此，淫羊藿苷的提取和在保健食品、功能食品中的组方应用成为近年来研究的热点。

本文通过正交实验设计，考查淫羊藿中淫羊藿苷的最佳提取工艺，从而指导生产应用，提高提取效率并节约成本。考查工艺参数为乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取温度和提取次数。

1 实验仪器和试剂

实验仪器为液相色谱仪、恒温电炉、圆底烧瓶、冷凝管、超声波清洗机、三角瓶、容量瓶、量筒和移液管。试剂为95%乙醇、无水乙醇（分析纯）、乙腈和超纯水。

2 实验材料

淫羊藿叶购自贵州，产地为贵州黔南；淫羊藿苷对照品由中国药品生物制品检定所出品。

3 实验方法

3.1 单因素实验

3.1.1 实验（一）。研究不同的乙醇体积分数（40%、50%、60%和70%）对淫羊藿苷提取率的影响，对比醇提法和水提法的提取率[3]。料液比（质量体积比）为1∶20，提取时间为1h，提取温度为60℃，提取次数为1次。

实验结果表明（见图1），乙醇体积分数为50%，淫羊藿苷的提取率最高，乙醇体积分数大于60%，淫羊藿苷的提取率反而降低。这主要是因为乙醇体积分数不同，对淫羊藿中淫羊藿苷化合物的溶出率差别较大，随着乙醇体积分数的升高，一些脂溶性物质溶出增加，反而会影响淫羊藿苷的浸出，所以选用5O%乙醇为最佳溶剂。

同时对比水提法，水提淫羊藿苷含量仅为5O%醇提的21.2%。可见，醇提工艺明显优于水提工艺。

3.1.2 实验（二）。研究不同料液比（1∶5、1∶10、1∶20、1∶30，质量体积比）对淫羊藿苷提取率的影响。乙醇体积分数为50%，提取时间为1h，提取温度为60℃，提取次数为1次。

实验结果表明（见图2），料液比为1∶20时，淫羊藿苷提取率最高，但与料液比1∶10相比提取率相差不大，而增加醇提液即乙醇的用量会相应增加提取和回收成本，因此考虑经济性因素，生产上采用料液比1∶10为最佳。

3.1.3 实验（三）。研究不同的提取时间（1、2h和3h）对淫羊藿苷提取率的影响。乙醇体积分数为50%，料液比为1∶10，提取温度为60℃，提取次数为1次。

实验结果表明（见表3），提取時间达到2h后，淫羊藿苷提取率趋于稳定，2h与3h的差别不大，出于经济性考虑，采用2h的提取时间即可[4]。

3.1.4 实验（四）。研究不同的提取温度（50、60℃和70℃）对淫羊藿苷提取率的影响。乙醇体积分数为50%，料液比为1∶10，提取时间为2h，提取次数为1次。

实验结果表明（见图4），提取温度为50℃时，因温度偏低提取不彻底，提取率较低，提取温度为60℃时，提取率较高，但提取温度达到70℃时提取率下降，主要是因为温度较高会对淫羊藿苷造成分解破坏。所以最合适的提取温度是60℃。

3.1.5 实验（五）。研究提取次数（1、2、3次和4次）对淫羊藿苷提取率的影响。乙醇体积分数为50%，料液比为1∶10，提取时间为2h，提取温度为60℃。

实验结果表明（见图5），随着提取次数的增多，提取率不断提高，但提取次数增多会增加时间投入，加大提取成本，综合考虑，生产采用提取2次的工艺。

3.2 正交试验

根据单因素实验结果，设计L15（35）正交试验[5]，因素与水平如表1所示。

影响因素大小为提取时间>提取次数>乙醇体积分数>提取温度>料液比。综合考虑提取效率和提取成本，最佳的提取工艺为A1B1C2D2E2，乙醇体积分数为50%，料液比为1∶10，提取时间为2h，提取温度为60℃，提取次数为2次。

3.3 薄层色谱分析

按照最优工艺提取出的淫羊藿苷与淫羊藿苷标准品做薄层色谱对照，分别用甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，吸取溶液各10μL，点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水（10∶1∶1∶1）为展开剂，展开后取出晾干，然后喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视[6]，显出相同的橙色荧光斑点。结果见图6。

如图6所示，醇提法获得的淫羊藿苷纯度、浓度均较高，可以用于淫羊藿保健食品功效成分的快速检测[7]。

4 结论

通过实验可以得出：醇提法明显高于水提法的提取率，最佳工艺为乙醇体积分数50%，料液比1∶10，提取时间为2h，提取温度为60℃，提取次数2次。按照最优工艺提取出的淫羊藿苷纯度较高，通过与淫羊藿苷标准品做薄层色谱对照，条带清晰。该方法获得的淫羊藿苷提取物用于保健食品，既可以控制生产成本，产生较好的经济效益，还可以保证功效成分用量充足，同时在食品抽样检测时可以顺利通过成分鉴别。

参考文献：

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典[M].2015版.广州：广东科技出版社，2015.

[2]叶丽卡，陈济民.淫羊藿的药理学研究进展[J].中国中药杂志，2001（5）：293-295.

[3]葛淑兰，田景振.淫羊藿的提取纯化工艺优选[J].中华临床医药杂志，2004（1）：40-41.

[4]李冬雪，杜守颖.淫羊藿提取浓缩干燥过程中的淫羊藿苷含量变化[J].河北中医，2011 （4）：587-588.

[5]胡道德，顾磊，姚慧娟.均匀设计法优化淫羊藿中淫羊藿苷提取工艺的研究[J].中国医院药学杂志，2009（10）：799-802.

[6]王旭东，姚晨，鲁方平.淫羊藿提取物中淫羊藿苷含量的HPLC测定[J].中草药，2003（34）：717-718.

[7]贺石麟，牛景霞，倪艳.淫羊藿中淫羊藿苷和总黄酮的闪式提取工艺[J].中国实验方剂学杂志，2011（8）：38-40.