枳实药材乙醇提取物的化学成分研究

邓可众 苌美燕 宗琪 熊英

中图分类号 R284.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）04-0458-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.04.07

摘 要 目的：研究枳实药材乙醇提取物的化学成分。方法：采用硅胶柱、开放ODS柱、制备液相色谱、HW-40F凝胶柱、大孔树脂柱对枳实药材乙醇提取物进行分离纯化，根据理化性质和波谱（质谱、氢谱、碳谱）数据分析鉴定化合物结构。结果：从枳实药材乙醇提取物中分离得到8个化合物，分别鉴定为Rimboxo （1）、胸苷（2）、尿嘧啶（3）、环-（亮氨酸1-异亮氨酸2-丙氨酸3-苏氨酸4-甘氨酸5-苏氨酸6-苯丙氨酸7）（4）、环-（亮氨酸1-亮氨酸2-脯氨酸3-酪氨酸4-甘氨酸5-丝氨酸6-脯氨酸7） （5）、水合橙皮内酯-β-D-葡萄糖苷（6）、伞形花内酯（7）、里那醇苷（8）。结论：化合物1、2、3、8为首次从柑橘属植物中分离得到，化合物4、5、6为首次从枳实药材中分离得到，该研究为枳实药材质量评价奠定了一定基础。

关键词 枳实；化学成分；结构鉴定；乙醇提取物；柑橘属

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the chemical constituents of ethanol extract from Cirtus aurantium. METHODS： The ethanol extract of C. aurantium was isolated and purified by silica gel column， open ODS column， preparation liquid chromatography， HW-40F gel column and macroporous resin column. The structure of compounds was analyzed and identified according to physicochemical properties and spectral data （mass spectrum， hydrogen spectrum， carbon spectrum）. RESULTS： Eight compounds were isolated from ethanol extract of C. aurantium， i.e. Rimboxo （1），Thymidine （2），Uracil （3），Cyclo-（Leu1-Ile2-Ala3-Thr4-Gly5-Thr6-Phe7） （4），Cyclo-（Leu1-Leu2-Pro3-Tyr4-Gly5-Ser6-Pro7） （5），Meranzin hydrate-β-D-glucoside （6），Umbelliferone （7），Linaloyl glucoside （8）. CONCLUSIONS： Compound 1， 2， 3， 8 are isolated from Citrus L. for the first time， compound 4， 5， 6 were isolated from C. aurantium for the first time. The study lays the foundation for quality evaluation of C. aurantium.

KEYWORDS Cirtus aurantium； Chemical constituent； Structural identification； Ethanol extract； Citrus L.

常用理气中药枳实主产于江西新干、樟树等地，经产地及市场资源调查发现，绝大多数枳实药材来源于芸香科柑橘属植物酸橙（Citrus aurantium L.）的干燥幼果。相关文献报道，酸橙含有多种活性成分，果实中的香豆素类、黄酮类成分均对胃肠道功能具有调节作用[1-2]；此外，多甲氧基黄酮、柠檬苦素类成分还具有抗肿瘤活性[3]。本研究对枳实药材进行化学成分研究，以期为酸橙幼果的进一步开发利用提供参考。

1 材料

1.1 仪器

Avance HD型600 MHz 核磁共振仪（德国Bruker公司，四甲基硅烷为内标）； 2489 Alliance Separations Module 型高效液相色谱仪（美国 Waters公司）；X-4型数字显微熔点测定仪（北京泰克仪器有限责任公司）；VG-Autospec-300型质谱仪、1100 LC/MSD Trap SL型质谱仪（美国Agilent公司）；ODS-AQ型色谱柱（日本YMC公司）；R-210型旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）；ZF-1型三用紫外分析仪（上海宝山顾村电光仪器厂）；Exceed-E-UP型实验室超纯水机（成都艾柯有限公司）；BSZ-40型自動部分收集器（上海沪西分析仪器厂有限公司）。

1.2 试剂

硅胶 [100～200目（拌样）、200～300目（装柱），青岛海洋化工有限公司]；开放ODS柱填料（50 μm，加拿大Silicycle公司）；HW-40凝胶（30～60 μm，日本Tosoh公司）；制备液相色谱柱填料（5 μm，日本YMC公司）；大孔树脂（0.3～1.2 mm，日本Mitsubishi Chemical公司）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯；水为纯化水。

1.3 药材

试验药材均由笔者于2013年购自江西省樟树药材市场，经笔者鉴定为真品。

2 提取与分离

取药材50 kg，粉碎，依次以95%、70%乙醇溶液渗漉提取，提取液减压回收，得乙醇提取物浸膏；将上述浸膏以水分散，依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得各部位萃取液。其中，乙酸乙酯萃取液减压回收，得乙醇乙酯部位浸膏；正丁醇萃取液减压回收，得正丁醇部位浸膏。

取乙醇乙酯部位浸膏适量，经硅胶柱，以二氯甲烷-甲醇（1 ∶ 0、49 ∶ 1、19 ∶ 1、9 ∶ 1、8 ∶ 2、7 ∶ 3、5 ∶ 5、0 ∶ 1，V/V）梯度洗脱，经薄层色谱层析检查后合并，得146个流分。其中，第133个流分经开放ODS柱，以水-甲醇（1 ∶ 0、49 ∶ 1、19 ∶ 1、9 ∶ 1、8 ∶ 2、6 ∶ 4、5 ∶ 5、4 ∶ 6、3 ∶ 7、0 ∶ 1，V/V）梯度洗脱，经薄层色谱层析检查后合并，得22个流分（Fr.1A～ Fr.22A）。其中，流分Fr.1A经制备液相色谱，以甲醇-水（1 ∶ 9，V/V）等度洗脱，得化合物2（3.6 mg）；流分Fr.5A和Fr.6A合并后经HW-40凝胶柱，以甲醇等度洗脱，得化合物3（5.8 mg）；流分Fr.11A、Fr.13A和Fr.17A分别经制备液相色谱、HW-40凝胶柱纯化，得化合物4（45 mg）、5（9 mg）、7（13 mg）和8（64.2 mg）。

正丁醇部位浸膏经大孔树脂柱，以30%乙醇溶液等度洗脱，所得洗脱部分经开放ODS柱，以水-甲醇（1 ∶ 0、49 ∶ 1、19 ∶ 1、9 ∶ 1、8 ∶ 2、6 ∶ 4、5 ∶ 5、4 ∶ 6、3 ∶ 7、0 ∶ 1，V/V）梯度洗脱，得22个流分（Fr.1B～Fr.22B）。其中，流分Fr.22B和Fr.3B分别经制备液相色谱，分别以甲醇-水（4.5 ∶ 5.5，V/V）和甲醇-水（3.5 ∶ 6.5，V/V）等度洗脱，得化合物1（3.9 mg）和6（4.0 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色油状物，分子式为C8H12O4。电喷雾质谱（ESI-MS）：m/z 173[M+H]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：3.66（4H，m，H-2，H-2′ ，H-3，H-3′ ），3.60（4H，dd，J=4.8，11.4 Hz，H-1a，H-1a′ ，H-4a，H-4a′ ），3.53（4H，dd，J=6.0，11.4 Hz，H-1b，H-1b′ ，H-4b，H-4b′ ）。13C- NMR（CD3OD，150 MHz）δ：73.8（C-2，C-2′ ，C-3，C-3′ ），64.4（C-1，C-1′ ，C-4，C-4′ ）。与文献[4]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为Rimboxo。

化合物2：白色粉末，分子式为C10H14N2O5；熔点（mp）：183～185 ℃。ESI-MS ： m/z 241[M-H]-。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.81（1H，s，H-3），6.28（1H，t，J=6.6 Hz，H-1′ ），4.40（1H，m，H-3′ ），3.91（1H，m，H-4′ ），3.79（1H，dd，J=3.0，12.0 Hz，H-5′ a），3.74（1H，dd，J=3.6，12.0 Hz，H-5′ b），2.25（2H，m，H-2′ ），1.88（3H，s，H-5）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：166.5（C-1），152.4（C-2），138.2（C-3），111.5（C-4），88.8（C-4′ ），86.2（C-1′ ），72.2（C-3′ ），62.8（C-5′ ），41.3（C-2′ ），12.5（εC-2）。與文献[5]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为胸苷（Thymidine）。

化合物3：淡红色粉末，分子式为C4H4N2O2；mp：320～322 ℃。ESI-MS：m/z 113.4[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，600 MHz）δ：7.38（1H，d，J=7.6 Hz，H-6），5.44（1H，d，J=7.6 Hz，H-5）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：164.4（C-4），151.5（C-2），142.2（C-6），100.2（C-5）。与文献[6]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为尿嘧啶（Uracil）。

化合物4：白色粉末，化学式为C34H53N7O9；mp：261～ 264 ℃。快原子轰击电离质谱（FAB-MS）：m/z 704[M+H]+，591[M+H-Leu]+，120[Ph-CH2-CH=NH2]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.25（5H，m，Phe7-Ar），4.80（1H，d，J=6.0 Hz，Phe7-αHb），4.53（1H，br. s，Leu1-αH），4.48（1H，m，Thr4-αH），4.45（1H，m，Thr6-βH），4.36（1H，d，J=3.0 Hz，Thr6-αH），4.13（1H，d，J=16.2 Hz，Gly5-αH），4.03（1H，s，Ala3-αH），4.01（1H，d，J=7.2 Hz，Thr4-βH），3.90（1H，d，J=7.8 Hz，Ile2-αH），3.48（1H，d，J=16.2 Hz，Gly5-αHa），3.24（1H，dd，J=13.8，6.0 Hz，Phe7-βHa），3.02（1H，dd，J=13.8，6.6 Hz，Phe7-βHb），1.86（1H，m，Ile2- βH），1.65（2H，m，Leu1-βH），1.57（1H，m，Ile2-γHb），1.56（1H，m，Leu1-γH），1.53（2H，d，J=7.2 Hz，Ala3-βCH3），1.26（1H，m，Ile2-γHa），1.16（3H，d，J=6.6 Hz，Thr6-γCH3），1.08（3H，d，J=6.6 Hz，Thr4-γCH3），0.99（6H，d，J=6.6 Hz，Leu1-CH3），0.94（6H，m，Ile2-CH3）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：175.8（Ala3-CO），174.5（Leu1-CO），173.7（Phe7-CO），173.3（Thr6-CO），173.3（Thr4-CO），172.7（Ile2-CO），171.7（Gly5-CO），138.3（Phe7-γC），130.8（Phe7-εCH），129.6（Phe7-δCH），127.8（Phe7-ζCH），70.0（Thr6-βCH），67.7（Thr4-βCH），60.7（Thr6-αCH），60.5（Thr4-αCH），60.4（Ile2-αCH），55.9（Phe7-αCH），52.8（Leu1-αCH），52.2（Ala3-αCH），44.1（Gly5-αCH2），41.5（Leu1-βCH2），37.7（Phe7-βCH2），37.1（Ile2-βCH），27.0（Ile2-γCH），26.1（Leu1-γCH），23.6（Leu1-δCH3），21.4（Leu1-εCH3），20.3（Thr6-γCH3），20.1（Thr4-γCH3），16.6（Ala3-βCH3），15.7（Ile2-γCH3），11.3（Ile2-δCH3）。与文献[7]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为环-（亮氨酸1-异亮氨酸2-丙氨酸3-苏氨酸4-甘氨酸5-苏氨酸6-苯丙氨酸7）[Cyclo-（Leu1-Ile2- Ala3-Thr4-Gly5-Thr6-Phe7）]。

化合物5：白色粉末，分子式为：C36H53N7O9；mp：185～188 ℃。FAB-MS： m/z 728[M+H]+，615[M+H-Leu]+，502[M+H-Leu-Leu]+，70[CH2-CH2-NH=CH- CH2]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.06（2H，d，J=8.3 Hz，Tyr4-δH），6.72（2H，d，J=8.3 Hz，Tyr4-εH），4.66（1H，m，Tyr4-αH），4.58（1H，m，Gly5-αHa），4.39（1H，m，Ser6-αH），4.22（1H，m，Pro3-αH），4.18（1H，m，Pro7-αH），4.03（1H，m，Ser6- βHa），3.99（1H，m，Leu1-αH），3.94（1H，m，Leu2-αH），3.65（1H，m，Gly5-αHb），3.62（1H，m，Ser6-βHb），3.55（2H，m，Pro3-δH），2.96（2H，m，Pro7-δH），2.42（1H，m，Tyr4-βHa），2.29（1H，m，Pro7-γHb），2.20（1H，m，Tyr4-βHb），2.09（1H，m，Pro3-βHa），2.02（1H，m，Pro7-βHa），1.97（1H，m，Pro3- γHa），1.85（1H，m，Pro3-βHb），1.81（1H，m，Pro7-βHb），1.68（1H，m，Leu1-γH），1.65（1H，m，Leu2-γH），1.58（2H，m，Leu1-βH），1.35（1H，m，Pro3-γHb），1.01（2H，m，Leu2- βH），1.00（1H，m，Pro7-γHa），0.95（3H，d，J=6.6 Hz，Leu1-δCH3），0.93（3H，d，J=6.6 Hz，Leu2-δCH3），0.92（3H，d，J =6.6 Hz，Leu1-δCH3），0.86（3H，d，J=6.6 Hz，Leu2-δCH3）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：173.0（Pro3-CO），172.9（Pro7-CO），172.6（Leu1-CO），172.2（Leu2-CO），170.8（Ser6-CO），170.7（Tyr4-CO），169.4（Gly5-CO），156.3（Tyr4-ζC），129.8（Tyr4-δCH），126.4（Tyr4-γC），115.0（Tyr4-εCH），61.1（Ser6-βCH2），61.1（Pro3-αCH），59.7（Pro7-αCH），58.0（Leu1-αCH），57.8（Leu2-αCH），52.9（Ser6-αCH），49.3（Tyr4-αCH），48.2（Pro3-δCH2），46.6（Pro7-δCH2），41.6（Leu1-βCH2），40.4（Leu2-βCH2），39.2（Gly5-αCH2），35.7（Tyr4-βCH2），31.1（Pro3-βCH2），28.1（Pro7-βCH2），24.8（Pro3-γCH2），24.3（Leu2-γCH），24.2（Leu1-γCH），22.5（Leu1-δCH3），22.2（Leu2-δCH3），21.9（Leu1-εCH3），21.5（Pro7-γCH2），19.9（Leu2-εCH3）。与文献[7]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为环-（亮氨酸1-亮氨酸2-脯氨酸3-酪氨酸4-甘氨酸5-丝氨酸6-脯氨酸7）[Cyclo-（Leu1-Leu2-Pro3-Tyr4- Gly5-Ser6-Pro7）]。

化合物6：淡黃色粉末，分子式为C21H28O10，mp：210～213 ℃。ESI-MS： m/z 458[M+NH4]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.91（1H，d，J=9.0 Hz，H-4），7.52（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），7.07（1H，d，J=8.4 Hz，H-6），6.26（1H，d，J=9.0 Hz，H-3），4.59（1H，d，J=7.2 Hz，H-1′′ ），3.97（3H，s，7-OCH3），1.43（3H，s，14-CH3），1.41（3H，s，15-CH3）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：163.8（C-2），162.5（C-7），154.7（C-10），146.39（C-4），128.4（C-5），117.2（C-9），114.4（C-8），113.1（C-3），109.0（C-6），98.7（C-1′ ），81.9（C-13），78.1（C-3′ ），78.1（C-5′ ），77.7（C-12），75.2（C-2′ ），71.7（C-4′ ），62.7（C-6′ ），56.7（7-OCH3），26.2（C-11），23.7（C-14），22.7（C-15）。与文献[8]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为水合橙皮内酯-β-D-葡萄糖苷（Meranzin hydrate-β-D- glucoside）。

化合物7：无色针状结晶，分子式为C9H6O3；365 nm波长处显亮蓝色荧光；mp： 231～233 ℃。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.84（1H，d，J=9.6 Hz，H-4），7.43（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），6.77（1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6），6.69（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.15（1H，d，J=9.6 Hz，H-3）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：162.3（C-7），161.8（C-2），155.8（C-9），144.6（C-4），129.2（C-5），113.1（C-6），111.7（C-3），110.9（C-10），102.0（C-8）。与文献[9]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为伞形花内酯（Umbelliferone）。

化合物8：无色胶状物，分子式为C16H28O6。ESI- MS： m/z 317[M+H]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：5.93（1H，dd，J=17.4，10.6 Hz，H-2），5.23（1H，dd，J=17.4，1.2 Hz，H-1a），5.19（1H，d，J=10.6，1.2 Hz，H-1b），5.10（1H，m，H-6），4.35（1H，d，J=7.8 Hz，H-1′ ），3.80（1H，dd，J=12.0，2.4 Hz，H-6′ a），3.63（1H，dd，J=12.0，6.0 Hz，H-6′ b），3.33～3.14（4H，m，H-2′ ，H-3′ ，H-4′ ，H-5′ ），2.07（2H，m，H-5），1.66（3H，s，H-9），1.59（3H，s，H-8），1.61～1.57（2H，m，H-4），1.38（3H，s，H-10）。13C-NMR（CD3OD，150 MHz）δ：144.5（C-2），132.1（C-7），125.7（C-6），115.8（C-1），99.5（C-1′ ），81.4（C-3），78.3（C-3′ ），77.6（C-5′ ），75.2（C-2′ ），71.7（C-4′ ），62.8（C-6′ ），42.6（C-4），25.8（C-9），23.6（C-5），23.2（C-8），17.7（C-10）。与文献[10]对照，其波谱数据基本一致，可确定该化合物为里那醇苷（Linaloyl glucoside）

4 讨论

本试验从枳实药材中分离鉴定了5个杂环类化合物，即Rimboxo、胸苷、尿嘧啶、环-（亮氨酸1-异亮氨酸2-丙氨酸3-苏氨酸4-甘氨酸5-苏氨酸6-苯丙氨酸7）、环-（亮氨酸1-亮氨酸2-脯氨酸3-酪氨酸4-甘氨酸5-丝氨酸6-脯氨酸7）；2个香豆素类化合物，即水合橙皮内酯-β-D-葡萄糖苷、伞形花内酯；1个单萜苷类化合物，即里那醇苷。其中，化合物1、2、3、8为首次从柑橘属植物中分离得到，化合物4、5、6为首次从枳实药材中分离得到；Rimboxo为二噁烷类化合物，二噁烷和单萜苷为首次从柑橘属植物中分离得到。本研究为枳实药材的质量评价奠定了一定的基础。

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（收稿日期：2017-04-30 修回日期：2017-06-26）

（编辑：张 静）