阴道涂片对确定SD大鼠妊娠的应用价值研究

罗涛　向雪静　王中华

【摘要】目的 探讨阴道涂片对确定SD大鼠妊娠的应用价值，为基础医学研究提供一种更加简便、准确地鉴定大鼠妊娠时间的方法。方法 将40只雌性大鼠和20只雄性大鼠，按照2：1的比例进行合笼，次日晨对40只合笼雌鼠进行阴道涂片，显微镜下观察记录，并分析。结果 镜下发现大量精子可确定该雌鼠已受孕，若在镜下未发现精子可将该鼠继续合笼饲养，次日再查。结论 对确定大鼠妊娠的时间，阴道涂片是一种准确率很高的方法，此法在提高实验动物妊娠模型建立的准确性方面具有实际意义。

【关键词】阴道涂片；SD大鼠；妊娠

【中图分类号】R332 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2018.11..02

SD大鼠是国内最常用医学实验动物之一，大鼠8周即性成熟，妊娠期为19～21天，为全年多动情性动物。现如今，很多医学动物实验，都需要用到大鼠孕鼠模型。所以，如何准确判断雌鼠受孕，并知晓其怀孕天数，对实验结果的准确性起着关键性的作用。

1 实验材料

实验动物：未交配SD大鼠共60只，雌性40只，体重（230±10）g，雄性20只，体重（300±10）g。由昆明医科大学医学实验动物中心提供，清洁级。

饲养条件：室内，室温，自然光照，普通清洁级鼠饲料自由采食饲养，自由饮用自来水。

所需仪器：普通光学显微镜，消毒棉签，洁净玻片，生理盐水。

2 方法

2.1 饲养合笼

60只SD大鼠适应性饲养一周，雌雄分笼饲养，期间注意观察大鼠的活动规律和饮食状况。按照雌雄2∶1的比例进行合笼，一般合笼时间为傍晚8点，正常供给饲料和水。于次日早晨8点进行雌鼠的阴道涂片检查。

2.2 阴道涂片

取待检查的雌鼠置于另一空笼子铁丝盖上，拇指、食指和中指捏住其尾巴，轻轻向后翻起尾巴，露出阴道口，用沾有生理盐水的小棉支在阴道口处稍停留，以让雌鼠适应，轻轻插入大鼠阴道并且缓慢转动，慢慢将小棉支抽出，将小棉支上的黏液均匀涂在载玻片上，肉眼观察并镜检（10×10倍）。

2.3 记录并统计

对每只雌鼠的涂片进行记录，并采用SPSS 17.0统计软件统计，采用x2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

验中fisher精确概率法检验。

3 结 果

如果大鼠交配成功，阴道涂片下可以观察到精子。普通光学显微镜100倍下观察，若发现镜下有呈长条形，头端稍膨大、呈钩状物质（如图1），则可判定雌鼠已交配受孕。

观察第一次的合笼交配，阴道涂片结果显示17只雌鼠镜下观察到有精子，占比42.5%，7只处于动情前期，6只处于动情期，4只处于动情后期，有6只大鼠阴道脱落细胞无特殊变化。把镜下未观察到有精子的雌鼠再进行第二次合笼后，陰道涂片发现，镜下观察到5只有精子，占比21.7%。再进行第三次合笼后，涂片显示镜下有1只查出精子，占比5.5%。本实验中发现，凡是阴道涂片发现精子的均为妊娠大鼠。经过统计，有差异性（P<0.05）。说明该方法确定妊娠的准确性很高，几乎为100%。

4 讨 论

医学动物实验是科学研究中必不可少了，各种大鼠模型的制作对于我们的基础医学研究至关重要。快速准确的制备孕鼠模型及清晰知晓大鼠孕龄是保证实验顺利进行的前提条件。目前检测大鼠受孕方法主要有两种：阴栓检查法和阴道涂片法[1，2]。阴栓检查法就是在大鼠交配后查看雌鼠阴道是否有分泌物。但是，查找阴栓过程比较困难，如果观察时间过早，阴栓可能还未形成。如果观察时间过晚，可能存在液化和脱落的情况[3]，一旦阴栓脱落，掉入鼠笼垫料中，很难被找到。所以就造成结果的不准确性。而阴道涂片的操作过程快速、准确。不仅为医学实验动物模型的制作节约了时间，也保证了实验模型的准确性。

通过实验结果，我们发现，大鼠初次合笼交配后，受孕率为42.5%。反复第二次合笼后检查受孕率为21.7%，第三次合笼后检查的受孕率只有5.5%。这个结果显示，雌鼠再检查出没有受孕后，是可以反复合笼尝试的，但是随着合笼的次数越多，受孕率越低。我们分析，多次反复的对同一只雌鼠进行阴道涂片，阴道刺激过多，或因操作过程中旋转太猛，都可能会伤到阴道壁，造成受孕率越来越低，甚至出现不孕的结果。

综上所述，采用阴道涂片法确定大鼠妊娠，具有快速、准确、简便、实用等优点。保证了实验模型的准确性，不仅减少了模型制作时间，也降低了因实验模型的不准确而产生的成本。所以，阴道涂片对确定SD大鼠妊娠的应用具有重要的价值。

参考文献

[1] 李凤奎.实验动物与动物实验方法学[M].郑州大学出版社.2007.392-393.

[2] 何秋明，肖尚杰，夏惠敏.大鼠阴道图片的观察[J].广州医学院学报，2007，35（4）：54-56.

[3] 张 森，王 新，韦旭斌，等.大鼠发情周期各阶段的阴道细胞变化观察[J].动物医学进展，2006，27（2）：69-72.

本文编辑：吴宏艳