原因不明复发性流产患者外周血T淋巴细胞表型分析

尹建蓝　陈慧

[摘要] 目的 从原因不明复发性流产患者的外周血T淋巴细胞表型分析其可能发病机制。方法 方便选择2014年1月—2016年12月就诊的因不明原因导致复发性流产的患者共40例，随机收集同期自愿要求终止妊娠的健康早孕妇女70名，检测两组外周血清淋巴免疫表型分布差异。结果 ①URSA组CD4+ CD8+比例（1.59±0.61）%、CD4+CD8-/CD3+T细胞比率（52.3±6.4）%明显高于正常组（1.31±0.52）%、（49.1±5.4）%（t1=2.55，P1=0.012； t2=2.79，P2=0.001）。②与正常早孕组相比，URSA组CD4+HLA-DR+/CD4+比率差异无统计学意义（t=0.60，P=0.552）；而CD3+HLA-DR+/CD3+[（24.8±6.2）% vs （20.4±5.7）%]、CD8+HLA-DR+/CD8+ [（35.6±10.1）% vs （24.9±9.1）%]比率明显增加，差异有统计学意义（t1=3.77，P1=0.000；t2=5.70，P2=0.000）。结论 CD4+ CD8+细胞比例增加、外周血T淋巴细胞的活化可能是导致URSA发病的免疫基础，活化T细胞表型可考虑作为URSA检测得辅助诊断指标。

[关键词] 复发性流产；淋巴细胞；诊断

[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2018）04（c）-0042-03

Analysis of Peripheral Blood T Lymphocyte Phenotype of Patients with Unexplained Recurrent Abortion

YIN Jian-lan1， CHEN Hui2

1.Department of Obstetrics， Dongguan Maternal and Infant Healthcare Hospital， Dongguan， Guangdong Province， 523112 China；2.Department of Obstetrics， Second Affiliated Hospital of Zhongshan University， Guangzhou，Guangdong Province， 510120 China

[Abstract] Objective To analyze the possible onset mechanism of peripheral blood T lymphocyte phenotype of patients with unexplained recurrent abortion. Methods 40 cases of patients with unexplained recurrent abortion diagnosed in our hospital from January 2014 to December 2016 were selected， 70 cases of healthy women with early pregnancy who volunteered to terminate the pregnancy at the same period were collected， and the difference in the distribution of peripheral blood T lymphocyte phenotype was tested. Results The CD4+ CD8+ ratio and CD4+CD8-/CD3+T cell ratio in the URSA group were obviously higher than those in the normal group[（1.59±0.61）%， （52.3±6.4）% vs （1.31±0.52）%， （49.1±5.4）%] （t1=2.55，P1=0.012；t2=2.79，P2=0.001）， and the difference in the CD4+HLA-DR+/CD4+ ratio between the two groups was not obvious（t=0.60， P=0.552）， and the CD3+HLA-DR+/CD3+ ratio and CD8+HLA-DR+/CD8+ ratio obviously increased，[（24.8±6.2）% vs（20.4±5.7）%]， [（35.6±10.1）% vs （24.9±9.1）%]， and the differences were statistically significant （t1=3.77，P1=0.000；t2=5.70，P2=0.000）. Conclusion The increase of CD4+ CD8+ cell and activation of peripheral blood T lymphocyte phenotype may the immune basis of the URSA onset， and the activation of T cell phenotype can be considered as the adjunctive diagnosis index of URSA test.

[Key words] Recurrent abortion； Lymphocyte； Diagnosis

復发性流产（RecurrentspontaneousAbortion，RSA）发病率在育龄妇女中约2%～3%，多指相同的性伴侣发生2次或2次以上的自然流产现象[1]。RSA的病因复杂，近半数RSA患者无法通过现有的临床诊断方法进行识别且治疗效果并不理想，又称不明原因反复自然流产（URSA）[2]。URSA易复发，严重影响妇女身体健康。寻找原因不明复发性流产发病机制，对于该病诊治及后续疾病进展有重要意义，早期研究显示[3]，T淋巴细胞亚群紊乱可能与本病相关，该文由此提出对2014年1月—2016年12月间该该院接收治疗的40例URSA患者外周血T淋巴细胞表型进行分析，以找寻其可能发病机制，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取40例于该院接受治疗的URSA患者作为研究对象，入选标准：经超声检查后初步判断孕卵枯萎或者胚胎停止发育，胎儿心脏无跳动或者未发现原始胚胎；根据医院RSA筛查的临床路径进行病因筛查，符合URSA诊断标准[3]。选择与URSA组同期的健康早孕并自愿终止妊娠的孕妇70名作为正常对照组，剔除存在染色体异常、内分泌失调、生殖道感染、自身免疫性疾病史及不良妊娠（自然流产、死胎、死产等）孕产史患者，所有孕妇在7～12周实施人工流产，术前B超检查，可见心脏跳动，胚芽，确保胚胎发育正常，排除：①手术实施前出现腹痛、阴道出血等提示先兆流产体征孕妇；②服用甾体激素类药物；③放置宫内节育器。所有患者均获知情同意并经院伦理委员会批准进行该次研究。统计两组患者年龄、体重、流产次数等一般资料，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

1.2 方法

URSA组患者于入院时、正常早孕组孕妇则于行人工流产术当天抽取外周静脉血2 mL，取专用试管按检测细胞组编号后，分别吸取外周血样品50 μL于对应试管中，将10 μL BDTritestCD4FITC/CD8PE/CD3 PerCP与5 μL Anti-HLA- DRA PC抗体加入流式管底部标记T细胞各亚群及其活化。同时设置同型对照管（全血+相应的单色荧光克隆抗体）；避光反应15 min后吸取溶血素500 μL加入其中，之后PBS洗涤离心留取沉淀物，使用流式细胞仪进行检测，通过CELLQuest软件分析散点图中各淋巴细胞亚群的比例及相关结果。

1.3 统计方法

所得数据均录入后通过SPSS 18.0统计学软件进行分析，计量数据采用均数±标准差（x±s）表示，符合正态分布的数据行t检验，不符合正态分布的数据采用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 外周血T淋巴细胞免疫表型

两组中CD3+T细胞比例、CD4-CD8+/CD3+细胞比率均差异无统计学意义（P>0.05），URSA组CD4+ CD8+比例、CD4+CD8-/CD3+T细胞比率明显高于正常组（P<0.01），见表 2。

2.2 外周血活化T淋巴细胞表型分析

与正常早孕组相比，URSA组CD4+HLA-DR+/CD4+比率差异无统计学意义（P>0.05）；而CD3+HLA-DR+/CD3+[（24.8±6.2）% vs （20.4±5.7）%]、CD8+HLA-DR+/CD8+[（35.6±10.1）% vs （24.9±9.1）%]比率明显增加，差异有统计学意义（t1=3.77，P1=0.000；t2=5.70，P2=0.000），见表3。

3 讨论

外周血中最主要的淋巴细胞即为T淋巴细胞，其在免疫刺激、调节以及免疫反应中均起着重要作用，故而在免疫治疗过程中常以T细胞亚群的改变作为衡量疗效的重要观察指标。黄艳星[4]经过研究发现RSA患者的蜕膜组织中CD8+细胞逐渐降低，进而使得CD4+/CD8+的比值呈现出明显升高的趋势，为CD8+T细胞在妊娠过程中重要性提供了一定依据；CD4+T细胞主要介导细胞免疫[5]，该细胞的数量逐渐增多或者功能亢进都会使母体的细胞免疫功能逐渐增加，对胚胎发生较强的免疫排斥反应，引起流产发生[6]，该文结果显示，URSA组CD4+ CD8+比例（1.59±0.61）%、CD4+CD8-/CD3+T细胞比率（52.3±6.4）%明显高于正常组（1.31±0.52）%、（49.1±5.4）%（P<0.01），与上述结论基本一致。

淋巴细胞发挥免疫反应前需经历的一个关键环节即为细胞活化，主要是静止T淋巴细胞受到刺激后增殖活化，形成效应细胞，表现为细胞因子的分泌及细胞因子受体和粘附分子在细胞表面的表达[7]。淋巴细胞的活化或抑制状态可通过特定的细胞表面分子标记物表示。人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）系统是一群与人的免疫应答相关联的基因簇，目前有研究发现，在同种异体免疫中，增加的部分父亲一方的人类白细胞抗原会对抗父方细胞毒抗体（APCA）、混合淋巴细胞反应封闭抗体（MLR-Bf）及抗独特型抗体（Ab2）产生抑制作用，而上述抗体却在正常妊娠中发挥重要作用，若出现表达低下或缺失就可引发URSA[8]。赵花等[2]研究结果标明，URSA组CD3+HLA-DR+[（25.68 ± 9.09）% vs （19.13±7.91）%]、CD8+HLA-DR+T[（34.37 ± 11.91）% vs （24.14±11.71）%]淋巴细胞均较正常组明显增加（P<0.05），该文结果显示与正常组相比，URSA组CD3+HLA-DR+/CD3+[（24.8±6.2）%vs（20.4±5.7）%]、CD8+HLA-DR+/CD8+ [（35.6± 10.1）%vs（24.9±9.1）%]比率明显增加（P<0.05），而CD4+T细胞活化比例则无明显变化（P>0.05），与上述结果基本一致，故而推测URSA患者CD3+T、CD8+T细胞过度活化可能是其致病的免疫基础，有望成为URSA的辅助诊断及病情监测指标。

[参考文献]

[1] 梅珊珊，谭建平，陈慧，等.CD4+CD25+highT细胞和Foxp3在不明原因复发性自然流产中的作用[J].中山大学学报， 2010， 31（4）： 461-466.

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[8] 张莹， 乔福元， 曾万江，等. 人类白细胞抗原分型在淋巴细胞主动免疫治疗不明原因复发性流产中的价值研究[J]. 中国实用妇科与产科杂志，2016（6）：583-587.

（收稿日期：2018-01-23）