子宫颈鳞状细胞癌及鳞状上皮内病变中RGC32的表达及临床意义

田杰 周东华 平静 秦艳 刘小燕 陈莹 范菊花

佛山市妇幼保健院病理科（广东佛山 528000）

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于乳腺癌，近些年来呈现年轻化趋势，严重威胁着女性的身体健康［1-2］。RGC⁃32是一种新发现的补体激活基因，参与了细胞的周期调控、细胞增殖、组织细胞分化等多种生理作用［3］。研究发现RGC⁃32在肿瘤中的作用明显，是肿瘤发生相关基因［4-5］。而RGC32在宫颈鳞状细胞癌中的表达情况及作用尚未见报道。本研究采用免疫组化的方法检测RGC⁃32在正常宫颈、宫颈鳞状上皮内病变及SCC中的表达，并且分析RGC32表达与宫颈鳞状细胞癌临床特征的关系，并初步探讨RGC⁃32在宫颈癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料分别收集佛山市妇幼保健院病理科2015年1月至2016年12月手术切除或活检的蜡块标本，正常宫颈、LSIL、HSIL各30例，SCC 40例，正常宫颈年龄25～78岁，中位年龄47岁，宫颈LSIL年龄20～60岁，中位年龄32岁，宫颈HSIL年龄21～69岁，中位年龄38岁，宫颈SCC年龄22～80岁，中位年龄50岁；宫颈癌根据国际妇产科联盟（international federation of gynecology obstetrical，FIGO）临床分期：Ⅰ期10例、Ⅱ期21例、Ⅲ期6例、Ⅳ期3例，分化等级，高分化16例，中分化13例，低分化11例。所有标本均由2位资深病理专家共同阅片确诊，所有标本均未行化疗、放疗及生物治疗。

1.2 方法标本经过4%中性甲醛固定，石蜡包埋4μm切片，然后采用免疫组化S⁃P法检测RGC32的表达，兔抗人RGC32多抗购自Santa Cruz公司，设立RGC32强阳性者为阳性对照，PBS缓冲液为阴性对照。

1.3 结果判读RGC32阳性表现为细胞浆棕黄色染色物，染色评分标准：（1）按切片中细胞显色有无及深浅评分：无显色为0分；浅黄色为1分；黄色为2分；棕黄色为3分。（2）根据显色癌细胞的比例记分：＜25%为1分；25%～50%为2分；＞50%为3分。每例肿瘤的阳性强度=（1）×（2），＞ 2分则视为阳性，否则判定为阴性。

1.4 统计学方法计数资料采用率或百分比表示，率的比较采用Pearsonχ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。所有数据应用SPSS20.0软件进行统计学分析。

2 结果

2.1 RGC32蛋白在不同宫颈组织中的表达RGC32蛋白主要表达于细胞浆，呈棕黄色颗粒，RGC32蛋白在正常宫颈组织、LSIL、HSIL和SCC中的表达阳性率分别为16.7%、26.7%、66.7%、75.0%（图1），通过Pearson χ2检验，RGC32在正常宫颈、宫颈上皮内病变及SCC组织中的阳性率逐渐升高，且差异具有统计学意义（P＜0.01），宫颈SCC及HSIL中RGC32的阳性率显著高于LSIL及正常宫颈（P＜0.05），RGC32在SCC及HSIL中的表达差异无显著性（P=0.492），LSIL及正常宫颈中的表达差异无显著性（P=0.440）（表1）。

图1 RGC32在不同宫颈组织中的表达情况（×40）Fig.1 Expression of RGC32 in different cervical tissues（× 40）

表1 RGC32蛋白在不同宫颈组织中的表达率Tab.1 Rateof expression in differentcervical tissues例（%）

2.2 RGC32表达与宫颈鳞状细胞癌临床病理特征的关系为探讨RGC32表达与宫颈鳞状细胞癌的临床病理特征，笔者将患者按年龄、肿瘤FIGO分期，组织学分级以及是否有淋巴结转移进行分组，通过分析发现，RGC32在年龄＜50岁及年龄≥50岁两组表达阳性率分别为72.2%，77.3%，FIGOⅠ+Ⅱ期为77.4%，Ⅲ+Ⅳ期66.7%，组织学分级中高中分化组为82.8%，低分化为54.5%，RGC32蛋白表达阳性率在有淋巴结转移组高达88.0%，而无淋巴结转移组RGC32表达阳性率仅为53.3%，两者差异具有统计学意义（P=0.014）。见表2。

表2 宫颈鳞状细胞癌组织中RGC32的表达与临床病理特征的关系Tab.2 The relationship between the expression of RGC32 and clinical characteristics in cervical squamous cell carcinoma

3 讨论

RGC⁃32是由Badea在鼠的少突胶质细胞中发现的一种补体激活基因；人类RGC⁃32基因定位于13q14.11，全长1 126个bp，编码137个氨基酸，有5个外显子和4个内含子［5］。目前发现RGC⁃32在胎盘、骨骼肌，肾脏、胰腺、肝脏及大动脉内皮细胞等正常组织细胞中表达，而在心脏、脑组织低表达，肺组织细胞未见表达。研究发现在正常情况下RGC⁃32在细胞周期调控、细胞增殖、组织细胞分化、补体介导的炎症反应、细胞修复及系统性硬化等过程中起着非常重要的作用［6-8］。

近年来，RGC32在肿瘤中的作用研究较多，笔者曾发现在结直肠癌细胞株中RGC32过表达促进肿瘤细胞迁移和侵袭，可能与RGC32导致细胞骨架改变有关［9］，WANG 等［10］研究发现RGC32在结直肠癌组织中高表达并且与患者预后相关，体内外实验均证实RGC32高表达促进结直肠癌肿瘤细胞增殖和侵袭，并且发现其机制是通过激活Smad/sip1信号通路促进结直肠癌细胞发生EMT。XU等［11］研究发现RGC32在肺腺癌组织中表达明显上调，肺癌细胞株A549细胞中RGC32基因表达降低后，细胞增殖活力明显降低，并且发现RGC32受 TGF⁃β1 信号通路调控。ESKANDARI⁃NASAB等［12］研究发现在乳腺癌组织中RGC32高表达，并且发现RGC32的启动子发生甲基化。

本研究发现RGC32在正常宫颈仅有少量表达，而在宫颈上皮内病变及SCC组织中的阳性率逐渐升高，且差异具有统计学意义（P＜0.01），宫颈鳞状细胞癌及高度鳞状上皮内病变中RGC32的阳性率显著高于低度鳞状上皮内病变及正常宫颈（P＜0.05）。低度鳞状上皮内病变并发癌或将来发生癌的风险低，高度鳞状上皮内病变具有显著的进展为浸润性癌的风险，是癌前病变，RGC32在癌前病变及SCC中的表达显著高于非癌前病变，提示RGC32可能参与了正常宫颈到癌前病变再到鳞状细胞癌的发生、发展演变过程。其次，笔者发现RGC⁃32在有淋巴结转移组表达水平显著高于无淋巴结转移组（P=0.014），提示RGC32可能在宫颈癌的淋巴结转移过程起重要作用。

本研究与既往研究大致相符，发现RGC32在肿瘤发生、发展中起到重要作用，并且发现其可能参与了宫颈鳞状细胞癌的转移。本研究具有局限性：仅采用了免疫组化方法检测RGC32蛋白的表达，而对RGC32的基因水平的未进行检测，并且未进行作用机制的探讨，不能进行因果的说明。下一步拟检测RGC32的基因表达情况以及探讨其在肿瘤中的作用机制。