脑宁胶囊的质量标准研究

(徐州生物工程职业技术学院生物工程系，江苏徐州，221006)

脑宁胶囊经治疗血管性头疼的临床验方脑宁汤改制而成，由赤芍，川芎，水蛭，白芷，藁本，红花，细辛，白附子八味中药组成，具有活血化瘀、通络止痛的功效[1]。本制剂在完成组方中各药材的提取工艺和制备工艺研究的基础上，采用TLC法对该制剂进行定性鉴别，HPLC法进行含量测定，建立脑宁胶囊合理可行的质量控制标准，可为该制剂的现代化生产提供理论依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LCl0A—VP高效液相色谱仪(日本岛津)；DZF-6120恒温干燥箱(中新医疗器械有限公司)；FA20413电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；ZF-2型紫外分析仪(上海安灵分析仪器有限公司)。

1.2 试药

甲醇(色谱纯，北京化工厂)；三氯甲烷、乙酸乙酯、甲酸(分析纯，北京化工厂)；石油醚、乙醚(分析纯，青岛海洋化工厂)；芍药苷(对照品，中国药品生物制品研究院)。

本试验中所使用得药材均符合《中国药典》(2015版)的相关规定，药材购于亳州贺林饮片厂。

2 方法与结果

2.1 性状

通过对三批脑宁胶囊样品性状的观察，可确定脑宁胶囊的性状为：本品为胶囊，内容物为棕褐色粉末；气略香，味苦、微辛、凉。

2.2 鉴别

2.2.1 供试品溶液的制备

精密称取脑宁胶囊的内容物约1g，置于锥形瓶(具塞)内，加入50mL的甲醇振摇混匀,锥形瓶密塞，浸泡24h,超声提取30min,放冷至室温，过滤并弃取初滤液，精密移取续滤液20mL，将移取的续滤液经中性的氧化铝柱用20mL的甲醇洗脱，将洗脱液置于水浴上挥干甲醇，挥干甲醇所得残渣加入乙醇溶解，并定容至10mL,然后用0.45um微孔滤膜将上述溶液过滤，弃去初滤液，将续滤液作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备

精密称定芍药苷对照品适量，用无水乙醇将精密称定的芍药苷对照品配置成浓度为2mg /mL的乙醇溶液，将上述溶液作为实验的对照品溶液。

2.2.3 阴性样品溶液的制备

取缺少赤芍的样品0.5g，置于具塞锥型瓶中，加入乙醇25mL，按照样品的制备方法依法制得阴性对照品溶液。

2.2.4 薄层层析条件

薄层板采用硅胶G板，点样量为10uL，将点样后的薄层板在三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一甲酸(40∶5∶10∶0.2)的展开剂中展开后，将薄层板取出待薄层板晾干后，用5%的香草醛硫酸溶液作为显色剂均匀喷洒在薄层板表面[2]，再将薄层板加热直到薄层板上出现清晰的斑点。经观察供试品色谱中出现了与对照品色谱相同蓝紫色颜色的斑点，并且出现的斑点距点样原点的距离相同。

2.3 检查

2.3.1 水分

取脑宁胶囊内容物适量，按照《中华人民共和国药典》(2015版)四部测定水分含量(%)。结果见表1。

表1 样品的水分检查结果

2.3.2 装量差异

依《中华人民共和国药典》(2015版)四部中关于胶囊剂的装量差异的检查方法取三批脑宁胶囊各20粒检查装量差异，根据重量差异结果表明：三批样品均未超出10%的重量差异限度，符合重量差异的限度要求。

2.3.3 崩解时限

依《中华人民共和国药典》(2015版)中关于崩解时限检查中关于胶囊剂崩解时限的检查方法取脑宁胶囊6粒测定，应在30min内全部崩解。结果见表2。

2.3.4 砷盐的检查

分别从三批脑宁胶囊样品中，称取胶囊内容物粉末1g，加入氢氧化钙1g混匀，用少量的水将上述粉末调成糊状，用小火加热使上述糊状物干燥后缓缓至炭化，在500-600℃温度下慢慢灼烧使样品至完全灰化后放冷至室温，在上述样品中分别加入蒸馏水5 mL，盐酸5mL，溶解，将溶液转移至比色管中。按照砷盐检查法《中华人民共和国药典》(2015版)四部附录中砷盐检查第一法进行检查，结果表明三批的供试品溶液的颜色均浅于对照品的颜色，结果符合相关规定，检查结果见表3。

表2 崩解时限检查结果：时间(min)

表3 三批样品砷盐的检查结果

2.3.5 微生物限度检查

取三批脑宁胶囊，各取脑宁胶囊内容物10g,依《中华人民共和国药典》(2015版)四部中微生物限度检查法，对脑宁胶囊内容物的细菌、霉菌、大肠杆菌及活螨进行测定，测定结果均符合微生物限度的相关要求，结果见表4。

表4 微生物限度检查结果

2.4 含量测定

2.4.1 色谱条件

日本岛津LCl0A—VP高效液相色谱仪，Shimadzu CLASS．VP色谱工作站，

紫外检测器SPD一10AVP，KQ-250B型超声波清洗仪(功率250w,频率40kHZ)，流动相为甲醇-水(1∶3)[3]，流速为1.0ml·min-1，检测波长为230nm，柱温为室温。

2.4.2 供试品溶液的制备

取脑宁胶囊的内容物，研细，精密称取约1.0g，并放于锥形瓶中，加入甲醇10mL，浸泡4小时后，超声提取30min，取出、放至室温，过滤，收集滤液并在水浴60℃蒸干，残渣中再加入加流动相5mL，超声处理10min，放冷，过滤，收集滤液并加流动相适量并加至刻度处，定容至10mL，高速离心(r>1500转/分)10min后，放置10min,取上清液，将上述上清液用0.45um的滤膜过滤，弃去初滤液，收集续滤液适量即为实验的供试品溶液。

2.4.3 对照品溶液的制备

精密称取经在五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的约1.5mg芍药苷对照品，放置于25mL容量瓶中，加适量的流动相溶解后，在加入使其至刻度，即得浓度为60μg/mL的芍药苷对照品溶液。

2.4.4 线性范围及标准曲线的绘制

称取芍药苷对照品5.6mg，需精密称定，并置于25mL的容量瓶中，加入甲醇溶液(甲醇∶水=1∶3)溶解芍药苷并稀释至容量瓶的刻度。分别精密吸取上述对照品溶液1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL，转移至10mL的容量瓶中，在以上容量瓶中分别加入甲醇溶液(甲醇∶水=1∶3)，稀释至刻度，制备得到不同浓度的芍药苷标准溶液[4]。用进样器吸取上述溶液适量，分别进样20μL并注入液相色谱仪，在波长230nm，流速1.0mL·min-1，流动相采用甲醇-水(1∶3)分别对上述样品进行测定，对得到的系列数据，用吸收峰的峰面积作为纵坐标，以配置的芍药苷的浓度作为横坐标。绘制芍药苷的标准曲线，得到回归方程为y=2E+06x+7144,r2=0.998,r=0.99998。结果表明芍药苷进样量在0.4 ug～3.5 ug之间和峰面积具有良好的线性关系。结果见表5。

表5 标准曲线结果

2.4.5 精密度试验

精密称取2.2mg的芍药苷对照品，用少量加甲醇溶液(甲醇∶水=1∶3)溶解后，转移在25mL的容量瓶中，再补足加甲醇溶液(甲醇∶水=1∶3)至刻度。用进样器精密吸取20μL的稀释液连续进样5次，通过分析峰面积，计算其精密度，平均值为3135551，RSD为0.13%，结果表明精密度良好，测定方法比较可靠。

2.4.6 稳定性试验

精密称取2.2mg的芍药苷对照品，用少量加甲醇溶液(甲醇∶水=1∶3)溶解后，转移在25mL的容量瓶中，再补足加甲醇溶液(甲醇∶水=1∶3)至刻度。制备成对照品溶液,分别于0、6、12、24、48h后进样20μL，测得峰面积平均值为，RSD值为0.07%，表明系统至少在48小时内稳定。

2.4.7 重复性试验

精密称取同一批号的脑宁胶囊样品(20170301)内容物约0.5g,分别称取5份，并精密称定后，并按照含量测定项下的方法进行提取和测定，结果见表6。

表6 重复性测定数据表

试验结果分析显示：采用本方法测定脑宁胶囊含量重复性较好，RSD为0.82%。

2.4.7 回收率试验

精密称取同一批脑宁胶囊(批号20170301)的样品约0.30g,分别添加芍药苷对照品溶液(浓度4.53mg/ml)各1mL，按供试品溶液制备方法，制备成加样回收的供试液，并依法测定，脑宁胶囊内容物的五份样品平均回收率为100.44%，RSD为0.97%，回收率较高，此方法可靠。

2.4.8 供试品含量测定

取脑宁胶囊3批，按含量测定项下操作，结果见表7。

由以上数据分析可得，平均含量为10.28mg/粒，所取三批脑宁胶囊样品含量测定按降幅20%来计算含量限定值，每粒重按0.5g计算，则每粒脑宁胶囊中芍药苷的含量应不低于8.22mg。

表7 供试品含量测定数据表

3 结论

(1) 在赤芍的鉴定中以芍药苷为对照品，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸按照40∶5∶10∶0.2的比例混合后的混合溶液作为展开剂，分离效果较好，无阴性干扰。

(2)建立了HPLC法测定脑宁胶囊中芍药苷的含量，按照要求采用了方法学考察表明，该种方法能够控制脑宁胶囊的含量，且精密度、重现性、稳定性均为良好，能够满足实际质量控制的要求。

(3)按照胶囊剂通则对三批中试样品进行了砷盐、水分检查、溶出度检查、微生物检查等均符合规定，说明制备工艺可靠，该制剂质量可控性良好。