核酸检测与酶联免疫法对无偿献血者血液中HBV HIV梅毒的检测效果分析

湛玉武

作者单位：516003 广东 惠州，惠州市中心血站

近年来，通过输血而患各种传染病患者的数量明显增加，血液中含有的病毒，如乙型肝炎病毒(HBV)、梅毒及艾滋病病毒(HIV)等，可通过输血而导致受血者感染[1]。导致这种情况发生的主要原因是在采血时没有检测到血液中的病毒。血液病毒通常应用酶联免疫法进行检测，但该方法具有一定的局限性，多种外界因素可影响其检测结果[2]。因此，对无偿献血者的血液采取抗体和(或)抗原检测，并选取合适的检测方法对控制疾病的传播具有非常重要的意义[3]。强化血液抗原和抗体检测是血液筛查中关键的一步，可以有效防止因输血而导致的病毒感染[4]。本研究对2015年5月—2017年9月我站采集的21 500份血液标本的检测数据进行回顾性分析，探讨核酸检测和酶联免疫法在无偿献血者血液病毒HBV、HIV和梅毒检测中的效果。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 21 500份血液样本中，男性供血者12 862例、女性供血者8 638例；年龄20～35岁，平均(25.8±3.4)岁。在5～8 ℃环境下，将所有血液样本放置于5 mL和7 mL真空抗凝管中，5 mL真空抗凝管血液样本血浆分离时间≤3 h，然后进行核酸检测；7 mL真空抗凝管血液样本血浆分离时间≤24 h，予以酶联免疫法检测。在血液采集72 h内完成两种检测。

1.2 仪器与试剂 仪器包括自动加样机(瑞士哈密顿公司生产)、全自动酶联免疫分析仪(瑞士哈密顿公司生产)、核酸提取仪(华益美生物科技有限公司)、PCR仪(上海赛默科技生物发展有限公司生产)；试剂包括HIV试剂、HBV试剂及梅毒试剂(由上海科华生物技术有限公司提供)。

1.3 检测方法

1.3.1 酶联免疫检测法 将7 mL真空抗凝管血液样本在室温下(20～29 ℃)按照试剂操作说明书进行处理。首先以3 000转/min的速度离心约20 min，随后保存在2～8 ℃冰箱中。血液样本离心结束后，用全自动加样仪进行加样。最后使用全自动酶联免疫分析仪进行分析，并记录最终的检测结果。为保证血液样本的准确性，可以对其进行二次确诊，确诊标准：阳性为波长A值＜1，反之为阴性。

1.3.2 核酸检测法 对5 mL真空抗凝管血液样本在室温下(22～29 ℃)以3 000转/min的速度离心约20 min，随后保存在2～8 ℃冰箱中。常规检查血液样本，如果检查结果未发现异常，且符合检验标准后将其放置在样品条架上，并依据一级分配试剂程序按照说明书对其进行常规操作，具体如下：将600 μL结合液、50 μL磁珠加入到A号96孔深孔板中，将100 μL洗脱液及100 μL A、B洗液加入到B号96孔深孔板中，对血液样本进行裂解；裂解结束后，按照三级程序从A号、B号96孔深孔板中提取核酸，与此同时配备扩增核酸反应液。结合血液样本量，按照四级核酸扩增程序进行扩增，并将提取核酸后的结合液加入到八联管中，使用PCR仪进行扩增，详细、准确记录扩增结果，挑出结果为阳性的血液样本，之后进行拆分实验，确定血液样本的阳性率。

1.3.3 判定标准 以罗氏定量检测作为两种检测方法判定的“金标准”，从而判断两种检测方法在血液病毒检测中的效果。

1.4 观察指标 观察两种检测方法对血液样本HBV、HIV及梅毒的敏感度和特异度，对比两种检测方法的效果。敏感度=真阳性人数/(真阳性人数+假阴性人数)×100%。特异度=真阴性人数/(真阴性人数+假阳性人数)×100%。

1.5 统计学方法 使用SPSS 22.0软件进行统计分析，计数资料以率表示，进行χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法对HBV的检测结果比较 核酸检测法的敏感度和特异度分别为95.31%和91.03%；酶联免疫法的敏感度和特异度分别为89.06%和89.42%；两种检测方法的敏感度和特异度比较，差异均具有统计学意义(χ2值分别为12.254和14.218，P值均＜0.05)。见表1。

2.2 两种方法对HIV的检测结果比较 核酸检测法的敏感度和特异度分别为96.77%和91.64%；酶联免疫法的敏感度和特异度分别为85.48%和85.01%；两种检测方法的敏感度和特异度比较，差异均具有统计学意义(χ2值分别为14.127和15.315，P值均＜0.05)。见表2。

表1 两种检测方法对HBV的检测结果 (份)

表2 两种检测方法对HIV的检测结果 (份)

2.3 两种方法对梅毒的检测结果比较 核酸检测法的敏感度和特异度分别为96.88%和91.07%；酶联免疫法的敏感度和特异度分别为87.5%和89.41%；两种检测方法的敏感度和特异度比较，差异均具有统计学意义(χ2值分别为13.524和13.276，P值均＜0.05)。见表3。

表3 两种检测方法对梅毒的检测结果 (份)

3 讨论

传染病的重要传播途径之一就是通过血液传播，如乙肝、艾滋病、梅毒等，对人们的健康造成极大威胁，而输血也成为传染病通过血液传播的一种特殊形式。加强对无偿献血者血液的检测，可以降低因输血而罹患传染病的发生率。目前，我国大部分血站通常采用酶联免疫法对血液进行检测，但是单纯应用该检测方法容易出现漏检、误检等情况，且存在一定的缺陷，对无偿献血者血液检测的整体质量不是十分理想[5]。

临床研究发现，血液病毒感染的大部分患者在前期无明显临床症状，且短期内无发病征象，甚至由于部分患者体内的抗体浓度过低而得不到有效检测[6]。如果对有血液传播疾病患者的血液出现漏检、误检等，而此类血液输入到其他人体内，则可导致受血者被感染。HBV、HIV、梅毒等为临床常见可经血液传播病毒，且此类病毒具有潜伏期长的特点，很多患者在不知情的情况下已经被感染。对于已经被感染却不知情的患者，如果献血，且在献血检测中没有被准确排查，则会提高血液病毒的传播率。

核酸检测是采取病毒核酸扩增技术，在检测中可以使病毒直接扩增，并汇集到阳性孔内。核酸检测的优势如下：①可以缩短病毒感染的窗口期[7]；②具有较高的特异性和敏感性；③可以避免病毒变异、人工操作导致的漏诊情况发生[8]。核酸检测的缺点包括：①进口试剂的价格相对较高；②需要多份血液标本混合筛查；③国产试剂虽然价格不高，但是灵敏度稍差。

酶联免疫法的检测目标主要是血液中的病毒抗原[9]，如果患者体内存在血液病毒，其波长会发生变化，实验人员可以根据波长的具体变化情况判断患者的病情变化。酶联免疫法的优势如下：①检测速度快；②费用相对较低；③选择性强、灵敏度高。酶联免疫法的缺点包括：①操作繁琐；②漏诊率高；③其检测结果受温度等多种外界因素的影响。很多血液病毒存在潜伏期，只有过了潜伏期，该病毒才可以被检测到，临床通常将该时期称之为“窗口期”，酶联免疫法对处于窗口期的血液病毒不能进行有效检测[10-11]，如HIV的潜伏期较长，非常容易出现漏诊。

本研究结果显示，核酸检测法在无偿献血者血液HBV、HIV、梅毒的检测中，其敏感度和特异度均优于酶联免疫法。综上，推荐使用核酸检测法对无偿献血者血液HBV、HIV、梅毒进行检测。