北芪五加颗粒对仔猪猪瘟疫苗免疫应答及生长发育影响

2018-08-21赵留涛袁之润吴洪银吴冠连吴春丽

中兽医学杂志 2018年7期

赵留涛，袁之润，吴洪银，吴冠连，吴春丽

（1.商丘爱己爱牧生物科技股份有限公司，河南虞城476300；2.郑州爱己爱牧生物技术有限公司，河南郑州450001；3.郑州大学药学院，河南郑州450001）

北芪五加颗粒为黄芪和刺五加混合提取物配制而成中药复方制剂，文献报道黄芪和刺五加均具有增强免疫的功效[1,2]。同时，试验研究证明黄芪刺五加合剂能提高免疫抑制小鼠的TNF、NK细胞杀伤活性及IL-2水平[3]。本试验以健康仔猪为试验动物，通过检测猪瘟抗体效价和血清中IL-2、IFN-γ含量，观察北芪五加颗粒对仔猪猪瘟疫苗免疫应答的影响，评价其免疫增强作用。通过临床试验，进一步考察该药的疗效和毒副反应，为该药的大规模生产及应用提供合理、科学的临床试验数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物试验猪选用100仔猪，由河北省晋州市利杰原种猪场提供，猪只健康状况良好。

1.1.2 试验药品和试剂北芪五加颗粒(每1g含生药1g)，商丘爱己爱牧生物科技股份有限公司提供，试制批号：20110203；黄芪多糖粉，北京生泰尔生物科技有限公司，生产批号：20111123；猪瘟疫苗，广东永顺生物制药有限公司，生产批号：2011046：猪瘟正向血凝诊断抗原、阳性血清、阴性血清及稀释液由中国农科院兰州兽医研究所提供，批号分别为 20121009、20121003和20121003；猪血清IL-2 ELISA检测试剂盒，天津索罗门生物科技有限公司；猪瘟血清IFN-γ ELISA检测试剂盒，天津索罗门生物科技有限公司。

1.1.3 主要仪器设备酶标仪（RT 2100C），美国雷杜公司；电子天平（MR200A），上海第二天平仪器厂。

1.2 方法

1.2.1 试验分组及处理将体重相近、健康仔猪100头，随机分为5组：试验组北芪五加颗粒（高、中、低）三个剂量组、黄芪多糖对照组和空白对照组，每组20头。试验分组及处理详见表1。试验组于平均31日龄（免疫前3天）开始，北芪五加颗粒按高、中、低三个剂量（8g/kg、4g/kg、2g/kg?饲料）拌料添加1周；黄芪多糖对照组同时段拌料添加黄芪多糖200mg/kg；空白对照组不添加任何药物。平均日龄34天用1头份剂量进行猪瘟疫苗首免，于平均日龄65天用1头份剂量进行猪瘟疫苗二免。并分别于平均日龄34天、48天和60天称量各猪只体重，计算料重比；静脉采血5 mL，分离血清，备用。

1.2.2 测定指标及方法猪瘟抗体效价检测：分别于平均34日龄、48日龄和60日龄试验猪静脉采血5 mL，析出血清，采用正向间接血凝试验检测猪瘟抗体水平。血清中IL-2和IFN-γ含量的检测：对34日龄、48日龄和60日龄试验猪静脉采血制备的血清，用ELISA试剂盒检测IL-2和IFN-γ的含量。生长性能测定：34日龄和60日龄时分别称重，计算出初始平均体重、结束时的平均体重和平均增重；逐日逐栏称量记录饲料消耗量，计算饲料报酬（料重比）。料重比=饲养期内所耗标准饲料量（kg）/同期增重（kg）。

1.2.3 数据分析采用独立性检验法对试验猪在免疫前及首免后猪瘟抗体效价、血清中IL-2和IFN-γ含量进行差异显著性检验。采用方差分析法对试验猪的增重、饲料报酬进行统计分析。

表1 试验分组

2 结果

2.1 北芪五加颗粒对仔猪猪瘟疫苗免疫应答的影响

34日龄，各组猪瘟抗体水平相近，差异不显著（p＞0.05）。48日龄，猪瘟抗体水平，北芪五加颗粒高剂量组和中剂量组显著高于北芪五加颗粒低剂量组组和空白对照组，差异显著（p＜0.05）。60日龄，猪瘟抗体水平，北芪五加颗粒高剂量组和中剂量组显著高于北芪五加颗粒低剂量组组和空白对照组，差异显著（p＜0.05 或 p＜0.01）；黄芪多糖组组高于空白对照组，差异显著（p＜0.05）。结果详见表2。

表2 各组免疫抗体检测结果

2.2 北芪五加颗粒对仔猪血清IL-2和IFN-γ含量的影响

34日龄，各组仔猪血清IL-2和IFN-γ含量水平相近，差异不显著（p＞0.05）。 48日龄，血清IL-2含量，北芪五加颗粒高剂量组和中剂量组显著高于空白对照组，差异显著(p＜0.05)；其他各组，差异不显著（p＞0.05）。血清IFN-γ含量，北芪五加颗粒高剂量组和中剂量组显著高于空白对照组，差异显著（p＜0.05）；黄芪多糖组和其它各组相比较，差异均不显著（p＞0.05）。60日龄，血清 IL-2 含量，A组和B组显著高于C组和E组，差异极显著（p＜0.01）。血清 IFN-γ含量，北芪五加颗粒高剂量组和中剂量组显著高于北芪五加颗粒低剂量组组和空白对照组且差异极显著（p＜0.01），黄芪多糖组和其它各组相比较差异均不显著（p＞0.05）。结果详见表3和表4。

表3 北芪五加颗粒对IL-2含量的影响（单位：pg/ml）

表4 北芪五加颗粒对IFN-γ含量的影响（单位：pg/ml）

2.3 北芪五加颗粒对仔猪生长性能及饲料利用的影响

34日龄各组仔猪平均体重相近，差异不显著（p＞0.05）。60日龄平均体重和试验期平均增重，北芪五加颗粒高剂量组和中剂量组显著高于北芪五加颗粒低剂量组组和空白对照组，差异显著（p＜0.05）；黄芪多糖组与其它各组相比，无显著差异（p＞0.05）。北芪五加颗粒高剂量组和中剂量组的料重比低于黄芪多糖组，差异显著（p＜0.05）；黄芪多糖组低于北芪五加颗粒低剂量组和空白对照组，差异显著（p＜0.05）。料重比北芪五加颗粒高剂量组和中剂量组低于黄芪多糖组，差异显著（p＜0.05）；黄芪多糖组低于北芪五加颗粒低剂量组和空白对照组，差异显著（p＜0.05）。试验表明，添加北芪五加颗粒高、中剂量组能促进仔猪的生长发育，降低料重比。结果详见表5。

表5 对仔猪生长性能的影响

3 讨论

现代药理学研究表明，黄芪含有皂苷类、多糖、氨基酸及微量元素等多种有效成分，其中黄酮类、皂苷类和氨基酸类对抗疲劳有增强作用；黄酮类和皂苷类对抗炎有增强作用；多糖类、皂苷类和氨基酸类对补气有增强作用[4-6]。近年来，黄芪作为免疫增强剂的作用日益受到人们的重视[7-8]。刺五加含有多种苷类、多糖、黄酮等药理成分，此外还含多种微量元素及氨基酸等[9-10]。刺五加可增强机体非特异性防御能力，除具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、抗辐射损伤作用[11-12]。关于刺五加的药理作用和应用研究，从目前文献报道来看主要围绕人类疾病的预防和治疗等方面，在畜牧生产领域，刺五加用于猪、雏鸡、鱼及绵羊等动物的生长性能研究，试验证明刺五加也具有提高机体抗应激能力的作用。试验表明，黄芪刺五加合用使上述两药的功能加强，提高了机体的免疫功能，促使仔猪猪瘟疫苗抗体的产生，这与刘东风[13]研究结果一致。此次试验表明，北芪五加颗粒高、中剂量能促进仔猪的生长发育、提高血清中IL-2、IFN-γ含量和猪瘟抗体水平，且高、中剂量组之间差异不显著。