栀子大黄汤不同配伍对绿原酸溶出的影响

任晓宇

摘 要：【目的】研究栀子大黄汤不同配伍方式中绿原酸的溶出度比较。【方法】采用高效液相色谱法对不同配伍方式中栀子大黄汤绿原酸含量的测定。色谱柱：C18（4.5mm × 250mm，5.0 μm）；流动相：（A）甲醇-（B）乙酸；梯度洗脱：0-20分钟（5.0%-15.0% A），20～27分钟（15.0%A），28～36分钟（15.0%-25.0%A），36～41分钟（25.0%- 30.0%A）；柱温：35℃；流速：1.0 ml/min。【结果】栀子大黄汤全方绿原酸溶出率较单味栀子溶出量降低21.2%；大黄栀子方绿原酸比单味栀子溶出量增加了33.3%。【结论】绿原酸溶出量受方剂配伍影响，且较为明显。

关键词：栀子大黄汤；绿原酸；溶出度

“医圣”张仲景的《金匮要略》中有一主治酒黄疸之方剂，名曰栀子大黄汤，组方：栀子、大黄（生）、枳实（生）、淡豆豉四味。经现代医学临床研究[1]证明栀子大黄汤可以用于治疗酒精性肝损伤，对实验用大鼠酒精肝有损伤修复作用。方中君药栀子（Gardenia jasminoides Ellis）主要成分环烯醚萜类、酸类、黄酮类[2]，其中以酸类成分中的绿原酸含量最具有代表性，绿原酸是栀子大黄汤中抗菌、抗氧化、降血压和保肝护肝的主要成分，根据等研究证明[3]，绿原酸对于小鼠体外抗氧化实验结果证明，其抗氧化应激作用明显优于橙皮苷。本文以研究栀子大黄汤不同配伍方式中绿原酸的溶出度的比较为研究目的，建立测定绿原酸含量的方法，为栀子大黄汤药代动力学研究提供可靠的依据。

1 仪器与试药

仪器：高效液相色谱工作站（日本岛津LC-2016C）、分析天平（上海伦安生精密仪器有限公司，万分之一）、高速离心机（上海美曼特化学仪器有限责任公司）；中药饮片：大黄（世一堂中药饮片厂，20170612）、栀子（同仁堂中药饮片厂，20170520）、炒淡豆豉（世一堂中药饮片厂，20170808）、麸炒枳实（世一堂中药饮片厂，20170112），本研究中药饮片均经我厂中药鉴定专家鉴定合格；试药：甲醇（色谱纯，山东泰尚松化学试剂有限公司）、绿原酸标准品（南京利民生物科技有限公司，20171212）、无水乙醇、乙酸乙酯、冰醋酸（湖南广要道化学制剂有限公司，均为分析纯），本研究用水为我厂自制纯化水。

2 方法与结果

2. 1 色谱条件

色谱柱：C18（4.5mm × 250mm，5.0 μm）；流动相：（A）甲醇-（B）乙酸；梯度洗脱：0-20分钟（5.0%-15.0% A），20～27分钟（15.0%A），28～36分钟（15.0%-25.0%A），36～41分钟（25.0%- 30.0%A）；柱温：35℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：325.0 nm；进样量：20.0μL。绿原酸色谱图详见图1、2所示。

图2栀子大黄汤中绿原酸高效液相色谱图

2. 2 对照品制备

将6.60mg绿原酸标准品溶于50.0%甲醇溶液中，定容至10.0ml，摇匀备用。

2. 3 供试品制备

2.3.1方剂药粉制备

原方组成[4]：大黄（3.0g）、栀子（9.0g）、淡豆豉（24.0g）、枳实（12.0g）。加水10倍量，温浸半小时后煎煮40分钟，过滤，反复3次后合并提取液，浓缩，得到流浸膏50.0ml，冻干处理得冻干粉。不同配伍方剂：①栀子（9.0g）、大黄（9.0g）；②栀子（9.0g）、大黄（9.0g）、枳实（12.0g）。将方①、②均加水500ml，余法与原方同，得①、②冻干粉。

2.3.2样品制备

精密量取冻干粉0.0788g，置于10.0ml棕色量瓶中加水，定容。将样品溶液1ml移至容量瓶，加入2.0 mol / L稀盐酸条PH值到2.0，用相同体积的乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，40℃氮气吹干，并用70.0%乙醇200.0μL溶解，离心处理十分钟后取上清液，即得供试品。方①、②方法同。

2. 4 方法学考察

2. 4. 1 线性关系

移取绿原酸储备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0ml，以50.0%甲醇为溶剂定容在10.0ml棕色定容瓶中，摇匀备用。绿原酸质量浓度（X）、色谱峰面积（Y）绘制标准曲线，绿原酸于6.60～132.01μg/m L范围内线性关系良好，回归方程：Y =168978 X -14985，r=0.9989。

2. 4. 2 精密度

绿原酸对照品溶液32.0μg/ml，在本研究色谱条件下进样6次，结果加样回收率RSD=0.782%。

2.4.3重复性

以2.3方法制得6份供试品，以2.1色谱条件分析，得绿原酸峰面积，加样回收率RSD=0.143%，重现性良好。

2. 5 樣品含量测定

2.3方法制备方①、②供试品溶液，以2.1色谱条件分析，回归计算出绿原酸溶出量，结果如表1。

3 讨 论

3. 1制备方法与流动相的选择

通常中药材的处理采用水提醇沉，并将指定成分定量分析，绿原酸的含量本就不高，如果采用直接醇沉会影响样品回收率且对色谱分析时的干扰较大，乙酸乙酯来替代乙醇可以显著提高绿原酸的回收率且提高色谱分析准确率。绿原酸较弱在色谱分析时易拖尾，采用流动相为0.50%的冰醋酸时，吸收峰对称性较好。

3. 3 溶出率

根据刘琳琪[5]等研究，大黄对栀子中的绿原酸溶出有促进作用，但是加入枳实后又会使绿原酸溶出率下降，当大黄栀子汤全方配伍后绿原酸溶出率进一步下降，对于溶出率的影响，中药方剂研究的是在不同体外于体内过程的，本研究为体外研究栀子大黄汤的药代动力学提供参考。

4.结论

方剂栀子大黄汤和其不同配伍方剂中的绿原酸溶出量受方剂配伍影响，且较为明显。

参考文献：

[1] 朱鹤云， 毕开顺， 韩飞，等. 栀子大黄汤中活性成分在正常大鼠和酒精性肝损伤大鼠体内的药动学比较[J]. 中国实验方剂学杂志， 2016，22（22）：177-181.

[2] 冯筱懿，钱当当. 中药栀子及其成分栀子苷对肾脏毒性及机制初步研究[J]. 首都医科大学学报（自然科学版）， 2016，22（12）：125-127.

[3] 黎文卓， 刘亚云， 陈勇. 高浓度绿原酸对L02细胞脂质堆积与氧化应激损伤的影响[J]. 中草药， 2017， 48（21）：4471-4478.

[4] 任艳青， 甄亚钦， 李葆林，等. 淡豆豉与栀子配伍降低栀子肝脏毒性的研究[J]. 中药药理与临床， 2017（4）：147-149.

[5] 刘琳琪， 谭向宇， 赵晨曦，等. 大黄-栀子药对配伍比例和提取工艺对大黄中蒽醌类成分溶出的影响[J]. 中草药， 2017， Vol.48Issue（2）：283-287.