引发犬腹泻的三种病毒

侯巍，郭莉，阳爱国，莫茜，尹杰，袁东波

（四川省动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041）

腹泻常发生于幼犬，病犬排便次数增多，其粪便稀软或呈水样，有时粪便恶臭及有出血，患犬营养不良、电解质失调、酸碱平衡紊乱。引起犬腹泻的病毒主要有细小病毒、冠状病毒、轮状病毒。

犬腹泻致病原因复杂，若治疗不及时会引起脱水、低钾血症、酸中毒等，严重时可导致犬只死亡。

1 犬细小病毒

犬细小病毒病为一种急性传染病，患犬发病特征为有出血性肠炎或非化脓性心肌炎，其多发生于幼犬，患犬病死率为10%～50%。

1.1 生物学特性 细小病毒颗粒呈二十面体对称，直径约26nm，内含ssDNA，长约5200bp。细小病毒的复制只发生在活跃的正在增殖的细胞中。

犬细小病毒感染从1978年被证实后，发现病毒在不断变异，1979年出现CPV-2a，该病毒犬敏感，并可使猫发病。1984年出现CPV-2b，该毒株在426位由天冬酰胺转换为天冬氨酸，随后，一些国家陆续分离到CPV-2c型，该病毒在426位由天冬氨酸转换为谷氨酸。

1.2 常见检测方法

1.2.1 血凝-血凝抑制试验（HA-HI） HA主要用来检测粪便中的CPV-2血凝效价，HI主要用于流行病学调查，偶尔用于粪便中肠道抗体的检测。

有学者认为用V型微量血凝板和0.5%～1%的猪红细胞悬液进行试验，pH值范围在6.8～7.2之间阳性率最高，反应温度以2～4℃或22℃为宜。在实验摸索中，有学者提出，在HA-Hl试验中加入含明胶的0.15MPBS以助结果判定，国内学者用二巯基乙醇处理粪便，也可使阳性检出率提高。

1.2.2 琼脂扩散试验 该方法为常规诊断法，较HA试验敏感性差。Klingeharn采用Wadsworth’s改良的双向扩散试验检测粪便上清液中的CPV抗原，浇板的凝胶为Diffoc琼脂糖，稀释液为TEN缓冲液，37℃孵育24h即可出现沉淀线。

1.2.3 血清中和试验 有学者采用稀释病毒——固定血清法在细胞培养物中根据灭活血清中和犬细小病毒的中和指数来判定，方法是连续用10倍稀释度的病变悬液与1∶25稀释的血清等量混合，于20℃感作1h后，每个病毒——血清混合物分别接种三个培养管，2～3d后用纯甲醇或甲醛固定，然后用MG、G染色或HE染色，检查有无核内包涵体，并计算中和指数。

1.2.4 酶联免疫吸附试验（ELISA） ELSIA既可用于检测犬细小病毒抗原，也可检测抗体。有学者采用不同的ELISA方法成功检出了犬细小病毒。

2 犬冠状病毒

犬冠状病毒性肠炎是以引起患犬频繁呕吐和腹泻为特征的高度接触性传染病。该病1974年首先报道，此后很多国家和地区相继发现本病暴发流行。

2.1 生物学特性 冠状病毒（CCV）属尼多病毒目（Nidovirales）单股正链RNA病毒，具有多形态性，多数呈圆形或椭圆形，其不小不一，小的直径50～60nm，大的直径为150nm以上。

病毒外被一层近似双层的囊膜，囊膜上布有花瓣样的突起，其长约20 nm，突起排列有序，间隔较宽，呈皇冠状。冠状病毒由4种结构蛋白构成。

2.2 常用检测方法

2.2.1 荧光抗体技术 应用犬冠状病毒特异荧光抗体直接对肠黏膜或刮取的肠黏膜细胞进行染色，如在胞浆中发现特异荧光，则可确定为犬冠状病毒感染。

有学者采用直接荧光抗体技术评价了犬冠状病毒弱毒疫苗免疫的犬，病毒在肠道的增殖情况。另有学者采用间接荧光抗体技术检查了人工接种CCV1-71病犬，发现接种后2d可在其十二指肠见到荧光细胞，接种后4d可在回肠见到荧光细胞。

2.2.2 夹心EL1SA法 Tuchiya首先建立了CCV的双抗体夹心ELIsA方法，发现该法与间接荧光抗体方法检测CCV抗原的结果一致，其具有良好的特异性。有学者在荷兰进行的犬细小病毒、冠状病毒和轮状病毒性肠炎的流行病学调查中，亦建立了双抗体夹心法。该法简捷方便，适于大规模检查犬细小病毒、轮状病毒和CCV抗原。国内有学者采用纯化病毒免疫豚鼠制备CCV特异抗体，建立了CCV双抗体夹心ELISA法，其检查结果与电镜检查结果一致。

3 轮状病毒

犬轮状病毒（CRV）主要侵害新生幼犬，患犬以腹泻为特征。导致本病的传染源主要是病犬和隐性带毒犬，病毒主要通过消化道传染，被污染的用具和环境可使健康犬感染。

3.1 生物学特性 CRV属呼肠病毒科、轮状病毒属，核酸型为双股RNA。粪便标本负染后电镜观察，可见完全病毒和缺乏核衣壳的不完全病毒。细胞培养物电镜观察，病毒粒子直径 68～83nm，存在于胞浆内，无囊膜，二十面体立体对称，病毒衣壳呈双层结构，内层衣壳放射状排列，如车轮的条辐，其外由外壳膜包围，如同车胎一样，故称为轮状病毒。

轮状病毒因抗原性不同分为A组和B-E组，A组为典型的轮状病毒，具有共同的抗原成分。B-E组为副轮状的病毒，每组有其特有的抗原交叉反应。经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，轮状病毒由11条RNA片段组成。

3.2 常用检测方法

3.2.1 荧光抗体试验 取腹泻早期犬空肠、回肠黏膜涂片，用冷丙酮固定，然后用荧光素标记特异荧光抗体，于室温下染色、冲洗后，在荧光显微镜下检查，如见阳性荧光细胞，即可诊断为该病毒。本法较常用，是快速的常规检测方法。

3.2.2 电镜观察 取患犬腹泻汁或后段小肠内容物制样，用磷钨酸负染后镜检，若发现轮状形态，即可判为阳性。此法操作简便、可靠，可直接观察到犬轮状病毒颗粒。

3.2.3 酶联免疫吸附检测 本方法可区分出人和动物的轮状病毒。此法快速简便，应用广泛。