梨小性迷向素原药气相色谱分析方法研究

徐成辰，唐慧敏，杨淑娴，王 坤

（江苏省农产品质量检验测试中心，南京 210036）

梨小性迷向素是一种昆虫性信息素，有效成分包括(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯和(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯3个组分。其为生物防治产品，有效成分与自然界中梨小食心虫分泌的性信息素结构相似，通过有效阻断昆虫间的信息交流，影响雄蛾对雌蛾位置的辨别，从而干扰昆虫雌雄虫的交配，从根本上压低和控制梨小食心虫的种群发展，达到防治梨小食心虫的目的[1]。梨小性迷向素是一种低毒产品，现已在世界多个国家和地区广泛使用，具有持效期长，无防治盲区，绿色环保等优点。

经文献检索，国内尚未见梨小性迷向素色谱分析方法的相关报道。本文采用气相色谱法，对梨小性迷向素原药中的有效成分进行定量测定。该方法操作简便、准确、快速，分离效果较好，可以作为企业生产过程质量控制和质检机构分析检测的参考方法。

1 试验部分

1.1 试剂和溶液

三氯甲烷：色谱纯；梨小性迷向素标样：已知质量分数99.2%［(Z)-8-十二碳烯-1-醇0.9%、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯8.0%、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯90.3%］，常州宁录生物科技有限公司提供；(Z)-8-十二碳烯-1-醇标样：已知质量分数96.8%；(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯标样：已知质量分数98.0%；(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯标样：已知质量分数98.6%；正十八烷（内标物）：分析纯，不含干扰分析的杂质；梨小性迷向素原药，常州宁录生物科技有限公司提供。

1.2 仪器

Agilent 7890A气相色谱仪，具氢火焰离子化检测器；进样系统，具有分流装置和石英内衬装置；色谱工作站；色谱柱：DB-210石英毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）。

1.3 色谱操作条件

温度：柱温80℃，以5℃/min升至180℃，保持2 min，并设置后运行温度240℃，保持10 min；进样口温度240℃；检测器温度260℃。气体流量（mL/min）：载气（N2）1.0、氢气35、空气350、尾吹（N2）25。分流比：30∶1。进样量：1.0 μL。保留时间：(Z)-8-十二碳烯-1-醇约为11.8 min，内标物约为14.2 min，(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯约为15.3 min，(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯约为15.6 min。

梨小性迷向素原药与内标物气相色谱图见图1。

图1 梨小性迷向素原药与内标物的气相色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 内标溶液的配制

准确称取3.0 g（精确至0.000 2 g）正十八烷，置于1 000 mL容量瓶中，用三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀备用。

1.4.2 标样溶液的配制

准确称取梨小性迷向素标样0.1 g（精确至0.000 2g），置于25 mL容量瓶中，移液管准确移入10 mL内标溶液，三氯甲烷稀释至刻度，摇匀备用。

1.4.3 试样溶液的配制

准确称取梨小性迷向素原药0.1 g（精确至0.000 2g），置于25 mL容量瓶中，移液管准确移入10 mL内标溶液，三氯甲烷稀释至刻度，摇匀备用。

1.4.4 测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针中有效成分与内标物峰面积之比的相对变化小于1.5%，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液顺序进行测定。

1.4.5 计算

将测得的2针试样溶液以及前后2针标样溶液中(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯与内标物峰面积之比分别进行平均。试样中(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯和(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯的质量分数w（%）按下式计算。

式中：γ1—标样中 (Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯与内标物峰面积之比的平均值；γ2—试样中(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯与内标物峰面积之比的平均值；m1—梨小性迷向素标样的质量，g；m2—试样的质量，g；P—梨小性迷向素标样中(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯的质量分数，%。

2 结果与分析

2.1 三组分鉴定和内标物的选择

配制 (Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯和(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯3种标样溶液，在1.3色谱条件下分别进样，确定3种组分保留时间。同样色谱条件下，对正十七烷、正十八烷、正十九烷和正二十烷等内标物进行选择，最终选定与梨小性迷向素3个组分能够很好分离，且保留时间适宜的正十八烷为内标物。

2.2 色谱条件的选择

根据梨小性迷向素3个组分的分子结构和极性，选择几种不同极性的毛细管柱进行测试，最终确定对顺反异构组分分离情况较好的DB-210为色谱柱。根据组分、杂质和内标物的分离情况以及DB-210色谱柱的特性，优化柱温条件。确定采用初始柱温80℃，以5℃/min升至180℃，保持2 min，设置后运行温度为240℃，保持10 min的程序升温进行分离和测定。因(Z)-8-十二碳烯-1-醇与另2个组分在DB-210毛细管柱上响应因子不同，所以分别对3个组分进行线性关系、精密度和准确度试验。

2.3 分析方法的线性关系试验

配制系列质量浓度的标样溶液。准确称取梨小性迷向素标样0.04、0.07、0.1、0.12、0.15 g（精确至0.000 2 g），分别置于25 mL容量瓶中，移液管准确移入10 mL内标溶液，三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件进行测定，以(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯与内标物质量之比为横坐标，以峰面积之比为纵坐标，建立坐标系进行线性分析。(Z)-8-十二碳烯-1-醇线性方程为y=0.7676x-0.00196，相关系数为0.999 7；(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯线性方程为y=0.817 2 x＋0.000 57，相关系数为0.999 7；(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯线性方程为y=0.797 1 x＋0.010 31，相关系数为0.999 7。结果表明，梨小性迷向素在1 528～5 813mg/L质量浓度范围内线性关系良好。

2.4 分析方法的精密度试验

从同一产品中准确称取5个试样，在上述色谱条件下进行测定，其结果经统计分析。(Z)-8-十二碳烯-1-醇、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯和(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯的标准偏差分别为0.021、0.019和0.130，变异系数分别为2.58%、0.23%和0.15%（见表1）。

表1 分析方法的精密度试验结果

2.5 分析方法的准确度试验

从已知质量分数的梨小性迷向素原药［(Z)-8-十二碳烯-1-醇0.82%、(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯8.19%、(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯87.73%］中称取5个试样，分别添加一定质量标样，在上述色谱操作条件下进行测定。测得(Z)-8-十二碳烯-1-醇的平均回收率为102.61%，(E)-8-十二碳烯-1-乙酸酯的平均回收率为99.01%，(Z)-8-十二碳烯-1-乙酸酯的平均回收率为99.55%（见表2）。

表2 分析方法的准确度试验结果

3 结论

本方法能够测定梨小性迷向素原药中的有效成分。方法线性关系良好，精密度、准确度高，分离效果好，且操作简便、快速，是产品检测较为理想的分析方法。