百蕊草口服液制备工艺比较研究

高延宏

摘 要：本文对百蕊草口服液工艺进行研究。采用高校液相测定了百蕊草口服液中山奈酚的含量，固定相为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（5μm，4.6mm×150mm），甲醇-0.4%磷酸（55：45）为流动相，检测波长为428nm；山奈酚对照品在进样量为0.3～1.5μg范围内线性关系良好，呈良好的线性关系。回流提取与水提醇沉制得百蕊草口服液均为浅褐色透明气微香，味甘、苦。回流提取制得百蕊草口服的山奈酚含量高于水提醇沉制得百蕊草口服液。

关键词：百蕊草口服液；制备；工艺

百蕊草为檀香科植物百蕊草ThesiumchinenseTurcz.的全草。百蕊草具有清热解毒，补肾涩精的功效。百蕊草常用于急性乳腺炎、肺炎、扁桃體炎、上呼吸道感染、头昏、遗精等。《贵州民间方药集》记载：“治头昏体弱，腰痛，遗精，滑精。”百蕊草含百蕊草素、3，5，7，4′-四羟基黄酮-3-葡萄糖-鼠李糖甙（3，5，7，4′-tetrahydrox-yflavone-3-glucosyl-rhamnoside）、紫云英甙（astragalin）、琥珀酸、D-甘露醇、山柰酚、3-葡萄鼠李糖甙山柰酚等成分。百蕊草在体外具广谱抗菌活性、止咳、祛疫、平喘等作用。本文对百蕊草口服液工艺进行研究。

1 仪器与试药

电子天平FA1004型（南京华欣分析仪器制造有限公司）；LU230四元低压梯度液相色谱分析系统（大连依利特分析仪器有限公司）；CO-Ⅳ色谱柱温箱（恒温柱箱）（天津琛航科苑科技发展有限公司）；WIGGENS WT2加热制冷循环器（北京桑翌实验仪器研究所）；10升超纯水器water-10n（中科仪（北京）仪器有限公司）；IKA RV10数显型旋转蒸发仪（上海泰坦科技股份有限公司）；新芝scientz-T超声波提取机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；UV-5500（PC）扫描型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。山奈酚对照品（中国药品生物制品检定所提供）。甲醇（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、磷酸氢二钠（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、三乙胺（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、醋酸（杭州萧山创益化工仪器有限公司）、乙酸铵（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）、磷酸（杭州萧山创益化工仪器有限公司）、乙腈（昆山诺普森实验室用品科技有限公司）。

2 制备百蕊草口服液

2.1 回流提取

称重后，将百蕊草在洗药机水槽内进行淋洗，投入提取提取罐内，加7倍的55%的乙醇，浸润三十分钟，在加热回流提取时间为四十五分钟（加热温度为75℃），过滤，真空浓缩提取液并回收乙醇，回收乙醇，至无醇味，加纯化水至200升，灌装，灭菌，即得百蕊草口服液。

2.2 水提醇沉

称重后，将百蕊草在洗药机水槽内进行淋洗，投入提取提取罐内，煎煮两遍，第一遍加纯化水6倍量，温浸30分钟后煎煮60分钟；第二遍加纯化水4倍量，煎煮60分钟，过滤，合并滤液。将滤液浓缩至相对密度1.25（60摄氏度测）。冷却至室温，放至醇洗罐中缓缓加入3倍乙醇，边加边搅拌至均匀，静止24小时。取上清药液，回收乙醇，至无醇味，加纯化水至200升，灌装，灭菌，即得百蕊草口服液。

3 测定方法

3.1 色谱条件

色谱柱为USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（规格4.6mm×150mm，5μm）；甲醇-0.4%磷酸（55：45）为流动相；检测波长为428nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃[1-6]。

3.2 供试品溶液的制备

取百蕊草口服液适量，精密量取1ml，置10mL量瓶中，加80%甲醇适量，超声处理5分钟使溶解，放置至室温，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

3.3 对照品溶液的制备

精密称取山奈酚对照品约10mg，置50mL容量瓶中，用20%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5mL至10mL容量瓶中，用80%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含山奈酚100.0μg）。

3.4 标准曲线的制备

分别吸入标准品3μl，6μl，9μl，12μl，15μl注入HPLC，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值A为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，山奈酚对照品在进样量为0.3～1.5μg范围内线性关系良好。

3.5 精密度试验

精密吸取山奈酚对照品溶液重复进样5次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.88%。

3.6 重现性试验

分别称取同批百蕊草口服液样品6份，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值为0.98%，此含量测定方法的重现性良好。

3.7 稳定性试验

取同一对照品溶液与同一供试品溶液，分别在0，4，8，12进样测定，样品溶液的稳定性实验表明，室温下12h内测定峰面积基本一致。

3.8 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分别精密添加一定量的山奈酚对照品，按供试品制备所述方法测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.81%。

4 讨论

分别考察甲醇-水-三乙胺（25∶75：0.1），0.01mol/L磷酸氢二钠-磷酸缓冲液（p H=2.2）-水（80：20），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺，甲醇-2%醋酸水溶液（18∶82），甲醇：乙酸铵溶液（33：67体积比），乙腈-水（体积比为65∶35），甲醇-0.1%磷酸溶液（30：70），甲醇-0.4%磷酸（55：45）不同比例的流动相，结果以甲醇-0.4%磷酸（55：45）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-0.4%磷酸（55：45）为流动相。回流提取与水提醇沉制得百蕊草口服液均为浅褐色透明气微香，味甘、苦。回流提取制得百蕊草口服的山奈酚含量高于水提醇沉制得百蕊草口服液。

参考文献

[1]蔡定国，缪平，顾明娟.高速逆流色谱法从银杏叶分离异鼠李素、山奈酚和槲皮素对照品[J].中药新药与临床药理，1999（01）.

[2]翔，盛洁静，曲中原，张振国，徐阳，季宇彬.昙花中槲皮素、异鼠李素和山奈酚量的测定[J].邹哈尔滨商业大学学报（自然科学版），2015（05）.

[3]黄兴富，黎其万，刘宏程，王继良，孙浩岩，邵金良.高效液相色谱法同时测定苦荞中芦丁、槲皮素和山柰酚的含量[J].中成药，2011（02）.

[4]刘知远，沈廷明，吴仲玉.RP-HPLC法同时测定福建产金线莲中槲皮素、山柰素、异鼠李素的量[J].中草药，2015（03）.

[5]马银海，彭永芳，郭亚东，杨光宇，尹家元，胡秋芬.高效液相色谱法快速测定莲须中的槲皮素和山萘酚[J].昆明师范高等专科学校学报，2005（04）.

[6]浦锦宝，梁卫青，郑军献，胡轶娟，魏克民.HPLC法测定三叶青中槲皮素、山奈酚的含量[J].中国中医药科技，2011（02）.