荧光染色法和KOH湿片法在诊断浅部真菌感染中的效果比较

陈卉

浅部皮肤真菌病是一种常见的真菌感染疾病，主要是因人体毛发、表皮、甲等受到真菌侵犯导致的[1]。浅部皮肤真菌病具有很强的传染性，且病情容易反复发作，容易传播，引起交叉感染，严重影响人类健康安全[2]。目前，临床主要通过免疫学检查、分离培养、直接涂片镜检等多种方法检测真菌，其中KOH湿片法因操作简便、检测快速等优点是传统检测的常用手段，但该种检测方法敏感性较低，且容易出现主观错误，导致漏诊[3]。我院采用荧光染色法诊断真菌感染，结果发现检测效果良好。为进一步探讨分析浅部真菌感染的有效诊断方法，本文对比分析了我院皮肤科门诊2018年1—5月收治的60例疑似真菌感染标本，分别采用荧光染色法、KOH湿片法检测的结果。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院皮肤科门诊2018年1—5月收治的60例疑似真菌感染标本，60例可疑标本中，感染部位位于手足部20例，体股部22例，头面部8例，甲部10例。

1.2 方法

1.2.1 仪器及试剂 本次采用立特晰－真菌荧光染色液（一步法，安徽德莱康生物医疗科技有限公司），选用的试剂主要包括复染剂、10% KOH溶液（取KOH 10 g溶于100 ml纯水中）、荧光素。显微镜选择奥林巴斯CX31普通光学显微镜以及莱卡荧光显微镜。

1.2.2 取材 采用75%酒精对皮损部位进行消毒，采用钝头刀片刮取适量皮损炎性活动性边缘的皮屑，头癣取病发及附近鳞屑，趾甲、指甲取近端甲屑。采用酒精消毒后应快速取材，分为两份，分别放置于载玻片上。

1.2.3 检测方法 （1）荧光染色法。取一滴染色液滴入标本中，直至覆盖或淹没整个标本，静置几秒。将盖玻片盖上，借助纸巾或者棉签进行压片，将多余染液吸走，放置于荧光显微镜下进行观察。（2）KOH湿片法。取一滴10% KOH溶液放置于载玻片上，将盖玻片盖上，点燃酒精灯加热标本使其溶解，放置于光学显微镜下观察。如果标本属于趾甲、指甲或毛发，应滴入一滴20% KOH溶液。

1.3 观察指标

对比分析两种检测方法的检出特征，并对比两种检测方法对不同部位检出阳性率。

1.4 统计学分析

本次选择的统计学处理软件为SPSS 18.0，检出阳性率等计数数据通过（n，%）表示，组间数据对比采用χ2检验；P＜0.05为差异具有统计学意义。

表1 两种检测结果对比（n，%）

2 结果

2.1 两种检测方法特征对比

荧光染色后，孢子、菌丝等真菌会被荧光标记，镜下可观察到清晰的真菌轮廓，呈亮蓝色，可观察到孢子的出芽形态以及菌丝的典型横隔结构，便于识别。在荧光显微镜下，可观察到暗黑色的背景、杂质，背景和真菌荧光造成强烈的反差对比。KOH湿片法显示背景杂乱，真菌与背景反差比较小，且真菌结构不容易进行分辨和判断。

2.2 两种检测结果对比

荧光染色法检出手足部阳性7例，体股部14例，头面部6例，甲部7例；KOH湿片法检出手足部阳性4例，体股部11例，头面部2例，甲部6例；荧光染色法检出阳性34例（56.7%），KOH湿片法检出阳性23例（38.3%），差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

3 讨论

KOH是临床上最早使用的一种直接镜检法，不仅操作简便，且无需特殊仪器[4]。但这种检测方法缺点明显，如背景较为杂乱，阳性检出率较低，漏诊率较高，特别体现在甲屑标本上[5]。而且孢子类结构容易和脂滴、气泡相混淆，导致误诊[6]。荧光染色法中具有特殊的荧光素，可以特异性结合真菌细胞壁上的几丁质，且具有较高的亲和力，只要十几秒的时间即可完成反应，因此检测灵敏度较高，反应也较快[7]。荧光显微镜设定的激发光波段特定为340～400 nm，在这种条件下，孢子、菌丝会被荧光标记，且呈明亮的蓝绿色，黑暗的背景下，真菌轮廓在强烈的反差对比下可清晰显示，相对KOH湿片法而言，可更加清晰的观察真菌形态结构，辨识度大大提高。本次实验研究表明，荧光染色法检出阳性率高于KOH湿片法，这和陈锐君等[8]研究报道结果（浅部真菌感染患者采用荧光染色法诊断的阳性检出率高于KOH湿片法）基本相符。但需要注意的是，荧光染色法可对植物纤维素进行标记，玻片、空气中包含少量纤维，可能在荧光显微镜下也会发出荧光，但一般情况下纤维形态不具备规则性，亮度、粗细、大小等也不同，应重点观察荧光是否具备典型的出芽结构、真菌横隔。

综上所述，荧光染色法是一种快速、准确的真菌检测方法，在具备荧光显微镜的条件下，荧光染色法可用于皮肤科对真菌感染进行早期诊断。