南宁市献血人群登革热血清流行病学调查*

林健燕，郭泽强，罗必泰，周艳君，邱昌文，庞兴旺

(1.广西壮族自治区南宁市中心血站 530003；2.南宁市疾病预防控制中心 530023)

登革热病毒(Dengue virus，DENV)的感染谱表现为无症状的隐性感染、非特征性发热、登革热、登革出血热、登革休克综合征[1]；且约75%的感染者表现为无症状的隐性感染[2]。处于隐性感染的献血者在献血前征询时不能排除其献血，且我国尚未把登革热病毒纳入采供血机构的血液检测项目，那么其所捐献的血液中很可能携带病毒，成为经血传播的传染源。为了解南宁市献血人群中登革热病毒的感染状况，收集了1 712例献血者标本进行登革热病毒抗原和抗体检测，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 2015年12月至2017年9月的每月10日分别在南宁中心血站的不同采血点随机抽取部分经过健康征询合格及血液初筛检测合格的献血者。每位献血者在血液采集时均留取约5～6 mL血样于EDTA抗凝管中，用于DENV NS1抗原、DENV IgM抗体及DENV IgG抗体的检测。

1.2标本保存 现场采集的血液保存于2～8 ℃冰箱，并用2～8 ℃冰盒运送至实验室，实验室在3 000 r/min的条件下离心15 min分离血清，并将血清存放于-20 ℃低温冰箱。所有标本在采集后的4 d内完成检测。

1.3主要试剂与仪器 NS1抗原检测试剂盒购自北京万泰生物药业股份有限公司，IgM和IgG抗体诊断试剂盒购自中山生物工程有限公司。全自动加样仪和全自动酶免仪为瑞士HAMILTON公司的产品。

1.4检测方法 按照试剂盒的使用说明书进行标本的检测和结果判读。

NS1抗原采用双抗体夹心ELISA的原理进行检测。微孔板上设定阴性对照3孔、阳性对照2孔和空白对照1孔，在除空白孔外的各孔中加入稀释液50 μL，然后分别在相应孔中加入待测标本或阴、阳性对照各50 μL振荡混匀。37 ℃温育60 min后在除空白孔外的各孔中加入酶标试剂50 μL振荡混匀，继续37 ℃温育30 min后用洗涤液洗板5遍。每孔先后加入显色剂A、B液各50 μL振荡混匀于37 ℃显色15 min后加入终止液50 μL，立即读取A450 nm值，空白孔调零。结果判定：以阴性对照孔A值的均值+0.10为截断值(Cut off)，待测标本的A值大于等于截断值为阳性，小于截断值为阴性。

IgM和IgG抗体采用间接ELISA进行检测。将10 μL待测血清标本加入500 μL样品稀释液中对标本进行稀释。包被板上设定阴性对照、阳性对照和空白对照各2孔，在每个阴性对照、阳性对照孔中分别加入阴性对照血清和阳性对照血清100 μL。每个空白对照孔中加入洗涤剂100 μL，其余各孔中加入已稀释好的待测标本100 μL。振荡混匀后于37 ℃温育40 min，用洗涤液洗板5遍后在除空白孔外的各孔中加入酶标试剂50 μL振荡混匀，继续37 ℃温育30 min后用洗涤液洗板5遍，每孔先后加入底物A、B液各50 μL振荡混匀于37 ℃显色10 min后加入终止液50 μL，立即读取A450 nm值，空白孔调零。结果判定：IgM检测以阴性对照孔A值的均值+0.20为截断值(Cut off)，IgG检测以阴性对照孔A值的均值+0.15为截断值(Cut off)，待测标本的A值大于等于截断值为阳性，小于截断值为阴性。

1.5统计学处理 采用SPSS16.0统计软件进行数据分析，计数资料用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1血清学检测结果 1 712例献血者中，DENV NS1抗原阳性18例，阳性率1.1%；DENV IgM抗体阳性4例，阳性率0.2%；DENV IgG抗体阳性121例，阳性率7.1%。表1中显示存在双重指标阳性的情况，其中1例NS1抗原和IgM抗体均阳性，1例NS1抗原和IgG抗体均阳性。将1 712例献血者分为以下4种类型：(1)1 571例献血者NS1、IgM、IgG均为阴性，没有感染过登革热病毒；(2)20例献血者NS1和(或)IgM阳性，新近感染了登革热病毒；(3)120例献血者只是IgG阳性，曾经感染过登革热病毒；(4)1例献血者NS1和IgG均阳性，存在登革热病毒的二次感染。见表1。

表1 献血人群登革热病毒抗原抗体阳性检出情况(n=1 712)

表2 血清学检测结果与人群基本特征之间的相关性[n(%)]

-表示无数据

2.2血清学检测结果与人群特征的关系 对血清学检测结果阳性的献血人群按照性别、年龄、文化程度、居住地等特征进行比较，发现IgM与性别之间差异有统计学意义，男性IgM阳性率更高；IgG与年龄之间差异有统计学意义，30岁以上的人群IgG阳性率更高。见表2。

3 讨 论

登革热在全球100多个国家流行，但是东南亚和西太平洋地区作为登革热的主要流行区，该地区的患者约占全球患者的75%[3]。广西壮族自治区与东盟多国相毗连，南宁市作为广西壮族自治区的省会城市是中国-东盟博览会的永久举办地，是中国与东盟各国联系的桥头堡。随着中国东盟自由贸易区的建立，每年经南宁市进出中国和东盟的旅游、经商、务工、学习人员日益增多，包括登革热在内的东南亚常见传染病对广西乃至全国的威胁迅速增大。本研究在分析人群特征与血清学检测结果之间的关系时，发现IgM抗体与性别有关，男性IgM阳性率更高，说明男性由于野外作业机会较多尤其到东盟各国经商、务工机会较多，更易于遭受有效蚊虫叮咬导致感染。IgG抗体与年龄有关，30岁以上人群IgG阳性率更高，说明随着年龄增长，暴露可能性增加，尤其是30岁以上的人群有更多的机会到东南亚旅游、经商和务工，获得感染的可能性增大。正是由于地理位置、气候条件及社会活动等因素的存在，南宁市一直是登革热传播和流行的高风险地区。

登革热病毒有4种血清型，主要通过蚊媒叮咬传播；然而，针刺伤[4-5]、器官移植[6-7]、输血[8-9]等非蚊媒叮咬途径的有效传播感染案例已有报道。由于大量的患者需要输血治疗，涉及范围广泛，因此输血传播登革热病毒的案例自报道以来就一直引起全球输血工作者和研究者的高度关注。南宁市每年约13万人次参与献血，然而献血人群或健康人群中登革热病毒的感染状况一直少有研究报道。本次研究发现南宁市献血人群中DENV NS1抗原、IgM抗体、IgG抗体的阳性率分别是1.1%、0.2%、7.1%。有研究指出：NS1抗原和(或)IgM抗体阳性提示正遭受病毒感染，处于感染期；IgG抗体阳性提示既往曾经受过感染，感染已恢复并能抵抗同型病毒的再次感染[10-12]。说明登革热病毒在南宁市既有既往流行也有现时流行，献血者中既有曾经受感染者也有正在受感染者。已发现的21例NS1抗原和(或)IgM抗体阳性的献血者，其所捐献的血液中可能携带有登革热病毒并有可能导致受血者感染。121例IgG抗体阳性的献血者，其所捐献的血液有可能会让受血者被动获得DENV IgG抗体。然而，有研究指出由于登革热病毒存在抗体依赖性感染增强效应，曾经感染过登革热病毒的个体，一旦重新感染不同型别的登革热病毒时，易于发展为病死率较高的登革出血热或登革休克综合征[13-14]。因此，输注了带DENV IgG抗体血液的受血者，在获得同型登革热病毒的免疫力的同时也承担了相应的风险。南宁市献血人群中DENV NS1抗原、IgM抗体、IgG抗体的阳性率明显低于周边部分亚洲国家报道的结果[3，12-13]，表明南宁市登革热的流行率较低，同时也提示抵抗登革热病毒的人群免疫力较低，当登革热病毒输入时易引起暴发流行。此外，本研究还发现存在NS1抗原和IgG抗体同时阳性的情况，说明二次感染的存在，提示南宁市可能同时存在不同型别的病毒流行，进一步提示了输注IgG抗体阳性的受血者所面临的风险。

因此，结合南宁市的实际情况，在综合考虑成本-效益的前提下，建议按照以下方式适当完善当前的献血者血液筛查策略，以减少登革热病毒经血传播的可能。(1)在献血前的健康征询表中增加登革热病毒感染风险相关问题的条目；(2)从东南亚、非洲等登革热流行区回来的人员应自入境时起14 d后才能参与献血，并在献血前同时进行DENV NS1抗原和DENV IgM抗体的筛查；(3)利用病毒灭活技术对血制品开展病毒灭活。