PD-1在子宫内膜异位症组织中的表达及临床意义

陈春莹 刘小乐 付艳霞

子宫内膜异位症(endometriosis, EM)为临床生常见的妇科疾病之一, 也是造成育年龄妇女不孕的主要原因之一［1-2］。

患子宫内膜异位症患者, 临床多产生痛经、下腹痛、性交痛等症状, 影响妇女身心健康。研究在子宫内膜异位症组织中PD-1的表达及其临床意义, 为临床治疗子宫内膜异位症提供新决策, 发挥积极影响［3-5］。作者对2017年2～7月本院收治的20例子宫内膜异位症患者进行回顾分析。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2017年2～7月医院收治的20例子宫内膜异位症患者作为研究组, 患者均符合临床子宫内膜异位症手术标准［6］。另选同期20例无子宫内膜异位症且需行子宫切除术的患者作为对照组。纳入标准：患者手术耐受性好,生育年龄女性, 无复发性流产疾病。排除标准：患者有严重肝功能损害疾病。研究组年龄23～88岁, 平均年龄(32.0±0.3)岁。对照组年龄22～89岁, 平均年龄(35.0±0.7)岁。两组患者一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 研究组在术中获得异位内膜标本, 对照组在术中获得子宫内膜标本, 两组标本均应用多聚甲醛固定, 并在低温环境保存。制备组织切片：切片前用石蜡包埋标本组织快, 放在-20℃环境下预冷20 min, 使用切片机制备组织切片,烘干后置于玻片盒内。染色后, 做镜下观察, 记录两组PD-1化学染色评分。

采用蛋白印迹法(western blotting)检测两组子宫内膜组织内PD-1表达。用低温磷酸缓冲盐溶液(PBS)反复冲洗内膜组织。配制蛋白裂解液, 将子宫内膜组织放入1.5 ml离心管内, 加入100：1浓度的裂解液, 反复震荡裂解。将裂解后的子宫内膜组织裂解混合液进行离心操作, 收集组织蛋白上清液, 监测子宫内膜组织内PD-1表达。

1.3 观察指标及判定标准 对比两组患者的内膜组织PD-1化学染色评分与PD-1表达水平。其中, 化学染色评分的分值越高, 病情越差。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件对数据进行处理。计量资料以均数±标准差()表示, 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

研究组患者的PD-1化学染色评分为(7.10±3.60)分,PD-1表达为(1.20±0.40)KD；对照组患者的PD-1化学染色评分为(4.20±2.60)分, PD-1表达为(0.40±0.31)KD；研究组患者的PD-1化学染色评分、PD-1表达均高于对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两组患者子宫内膜组织中的PD-1表达对比

表1 两组患者子宫内膜组织中的PD-1表达对比

注：与对照组比较, aP＜0.05

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3 讨论

近年来, 子宫内膜异位症的发病率不断升高, 发病人群亦趋于年轻化, 为育龄期妇女身体健康带来不良影响。临床中, 针对子宫内膜异位症疾病, 在发病机制方面还不甚了解,研究显示, 子宫内膜异位症与患者体内局部微环境以及内膜组织的免疫细胞功能异常有关［7-9］。同样, 子宫内膜异位症患者临床也多伴有局部、全身免疫功能异常, 而PD-1信号通路, 在机体内可协同T细胞免疫反应, 调节患者机体的免疫过程。

医学中, PD-1位于CD28家族, 是I型跨膜蛋白, 由268个氨基酸组成, 可定位于PDCD1基因上。PD-1作为T细胞增值负调节分析, 能够在T细胞静息状态下低表达, 激活时高表达。而在机体外周的淋巴器官内, PD-1能与B7-H1受体结合, 共同激活初始T细胞, 引起免疫耐受, 导致机体T细胞失能。但在正常的机体组织内, 如在子宫、肾、皮肤等组织内PD-1没有表达, 而在病变的乳腺癌、肺癌、宫颈癌等肿瘤组织内, 则可检测出子宫内膜异位症患者体内的PD-1异常表达, 且PD-1表达水平与患者疾病及预后有关系, 而这多与肿瘤免疫逃逸相关［10,11］。在子宫内膜异位症患者体内PD-1表达水平升高, 也与患者自身免疫状态的改变有关,由于PD-1可表达与T淋巴细胞, 并根据T细胞活化程度影响多种因子作用, 使T细胞功能紊乱、枯竭, 引发免疫缺失,加重子宫内膜异位症患者病情。而子宫内膜异位症的发生也与细胞免疫密切相关。通过免疫组织化学法以及蛋白印迹法检测PD-1在子宫内膜异位症患者组织内的表达, 有助于了解该病中PD-1信号通路的表达情况。本次研究中, 通过检测子宫内膜异位症患者PD-1的表达水平, 证实相较于正常患者子宫内膜的PD-1表达升高。

PD-1信号通路对异位内膜产生影响, 可降低局部微环境免疫效能, 促进子宫内膜异位, 临床中加强临床PD-1检测有助于根据PD-1表达改善治疗方案, 提升子宫内膜异位疾病治疗方法。本次研究中, 研究组患者的PD-1化学染色评分为(7.10±3.60)分, PD-1表达为(1.20±0.40)KD；对照组患者的PD-1化学染色评分为(4.20±2.60)分, PD-1表达为(0.40±0.31)KD；研究组患者的PD-1化学染色评分、PD-1表达均高于对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。赵凤杰［12］等研究针对PD-1作用机制, 为应用抗PD-1免疫治疗子宫内膜异位症开辟了新领域, 发挥临床意义, 与本次研究结果一致。在临床治疗子宫内膜异位症中, 可根据PD-1在组织内表达水平的变化, 进一步了解PD-1参与子宫内膜异位症的免疫机制, 制定临床治疗决策, 有助于改进临床治疗PD-1蛋白表达子宫内膜异位症的方法, 发挥重要意义［13］。

综上所述, 在子宫内膜异位症患者中, PD-1在组织中的表达水平相较于正常者过高, 可根据PD-1表达变化, 为进一步优化临床子宫内膜异位症治疗思路提供策略, 发挥临床研究意义。