Cripto-1蛋白、E钙粘蛋白和波形蛋白在甲状腺微小乳头状癌中的表达及其意义

朱新峰

PTMC是指直径≤1 cm的甲状腺乳头状癌, 其在甲状腺乳头状癌中约在占50%［1］。PTMC高分期、甲状腺外转移、淋巴管侵袭及转移发生率近年来明显升高。PTMC的发生、发展与上皮间质转化(EMT)有关［2］。Cripto-1信号通路可能与EMT存在交互关系, 在肿瘤侵袭与转移过程发挥重要作用［3］。E钙粘蛋白和波形蛋白是EMT的两个相关因子, 在多种恶性肿瘤中存在高表达［4］。本研究对甲状腺良恶性组织中的Cripto-1、E钙粘蛋白和波形蛋白的表达情况进行分析,探讨三者在甲状腺微小乳头状癌侵袭和转移中的作用, 报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2015年8月～2017年2月在山东济宁市第二人民医院外科行手术治疗的患者病理组织标本, 其中81例PTMC组织、70例甲状腺腺瘤组织及65例癌旁甲状腺正常组织。PTMC肿瘤灶直径≤1 cm。81例PTMC组织来源患者中男31例, 女 50例；年龄34～65岁, 平均年龄(45.3±7.4)岁；颈部淋巴结转移11例。70例甲状腺良性肿瘤均为腺瘤, 其组织来源患者中男22例, 女48例；年龄37～68岁,平均年龄(47.1±8.0)岁。癌旁甲状腺正常组织来源患者中男20例, 女 45例；年龄36～69岁, 平均年龄 (47.6±8.2)岁。上述实验标本均经手术及病理检查证实。上述患者术前无放化疗及其他方法治疗。PTMC在病理检查过程中并未发现浸润。三类组织来源患者的性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 采用ElivisionTMplus法进行免疫组织化学染色。具体步骤：①标本遵照常规取材、固定、石蜡包埋, 4 μm厚连续切片。②石蜡切片脱蜡、水化, 抗原EDTA热修复, PBS反复冲洗3 min, 共3次；③3%的H2O2孵育10 min, PBS反复冲洗3 min, 共3次；④去净PBS, 加用5% PBS稀释后的山羊血清封闭孵育10 min, 弃去山羊血清, 滴加一抗4℃过夜,PBS反复冲洗3 min, 共3次；⑤去净PBS, 滴加适量含有生物素标记二抗的工作液, 37℃孵育10 min；滴加辣根过氧化物酶, 37℃孵育10 min；DAB显色, 苏木素对比染色；梯度酒精脱水, 二甲苯透明, 封片, 镜下观察细胞染色情况。以磷酸盐缓冲液替代一抗作为阴性对照。

1.3 观察指标及判定标准 观察不同甲状腺组织的Cripto-1蛋白、E钙粘蛋白、波形蛋白表达情况；分析Cripto-1蛋白、E钙粘蛋白、波形蛋白表达与PTMC临床病理特征的关系；分析Cripto-1蛋白、E钙粘蛋白和波形蛋白表达的相关性。Cripto-1蛋白、E钙粘蛋白、波形蛋白表达情况通过显微镜下可观察染色情况判定, Cripto-1蛋白定位于细胞膜或细胞质, 染色程度≥25%为阳性表达；E钙粘蛋白定位于细胞膜,染色程度≤90%为低表达；＞90%为表达保留。波形蛋白定位于细胞质, 染色程度≤20%为低表达, ＞20%为高表达。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差()表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用Fisher精确概率法或χ2检验；变量间相关性采用Spearman相关性分析。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同甲状腺组织的Cripto-1蛋白、E钙粘蛋白、波形蛋白表达情况 PTMC组织的Cripto-1蛋白阳性率66.67%、E钙粘蛋白低表达率70.37%、波形蛋白高表达率75.31%均明显高于甲状腺腺瘤组织的51.43%、54.29%、47.14%和癌旁甲状腺正常组织的0、0、0, 甲状腺腺瘤组织的Cripto-1蛋白阳性率、E钙粘蛋白低表达率、波形蛋白高表达率均明显高于癌旁甲状腺正常组织, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2 Cripto-1蛋白、E钙粘蛋白、波形蛋白表达与PTMC临床病理特征的关系 不同性别、年龄、肿瘤大小的PTMC患者Cripto-1蛋白阳性率、E钙粘蛋白低表达率、波形蛋白高表达率比较差异无统计学意义(P＞0.05)；有淋巴结转移PTMC患者的Cripto-1蛋白阳性率、E钙粘蛋白低表达率、波形蛋白高表达率明显高于无淋巴结转移者, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表1 不同甲状腺组织的Cripto-1蛋白、E钙粘蛋白、波形蛋白表达情况(n, %)

表2 Cripto-1蛋白、E钙粘蛋白、波形蛋白表达与PTMC临床病理特征的关系(n, %)

2.3 Cripto-1蛋白、E钙粘蛋白和波形蛋白表达的相关性Spearman相关性分析结果显示, Cripto-1高表达与E钙粘蛋白低表达和波形蛋白高表达呈明显正相关(r=0.31、0.33,P＜0.05)；E钙粘蛋白低表达与波形蛋白高表达呈明显正相关(r=0.34, P＜0.05)。

3 讨论

EMT作为机体的一个基本病理生理过程, 在胚胎形成、发育及肿瘤侵袭、转移中发挥重要作用。E钙粘蛋白是上皮细胞表面的一个重要生物学标志物, 其表达缺失与乳腺癌、胃癌、肺癌等恶性肿瘤的低分化、高侵袭能力及不良预后有关［5］。波形蛋白是EMT重要的间质细胞标志物, 其对间质特性的稳定起一定作用［6］。Cripto-1蛋白属表皮生长因子-CFC的家族中的一员, 其参与了早期胚胎发育与形成、细胞分化及肿瘤形成和进展过程［7-10］。

本研究结果显示, PTMC组织的Cripto-1蛋白阳性率66.67%、E钙粘蛋白低表达率70.37%、波形蛋白高表达率75.31%均明显高于甲状腺腺瘤组织的51.43%、54.29%、47.14%和癌旁甲状腺正常组织的0、0、0, 甲状腺腺瘤组织的Cripto-1蛋白阳性率、E钙粘蛋白低表达率、波形蛋白高表达率均明显高于癌旁甲状腺正常组织, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。说明Cripto-1、E钙粘蛋白、波形蛋白的表达在肿瘤的发生、进展过程中发挥着重要作用。此外, 本研究显示, 不同性别、年龄、肿瘤大小的PTMC患者Cripto-1蛋白阳性率、E钙粘蛋白低表达率、波形蛋白高表达率比较差异无统计学意义(P＞0.05)；有淋巴结转移PTMC患者的Cripto-1蛋白阳性率、E钙粘蛋白低表达率、波形蛋白高表达率明显高于无淋巴结转移者, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。Spearman相关性分析结果显示, Cripto-1高表达与E钙粘蛋白低表达和波形蛋白高表达呈明显正相关(r=0.31、0.33, P＜0.05)；E钙粘蛋白低表达与波形蛋白高表达呈明显正相关(r=0.34, P＜0.05)说明这三种蛋白相互作用而在PTMC的转移中起着重要作用。

综上所述, Cripto-1蛋白、E钙粘蛋白和波形蛋白在PTMC的侵袭转移中可能发挥重要作用。深入了解究Cripto-1蛋白及EMT在PTMC发生、进展过程中的作用机制,对将来PTMC的分子靶向治疗及生物学治疗具有促进作用。