糖皮质激素联合丙种球蛋白对重症药疹患者N—乙酰基转移酶活性的影响

汪小柳 刘志军

摘要 目的：检测糖皮质激素联合丙种球蛋白对N-乙酰基转移酶活性的影响，探讨糖皮质激素联合丙种球蛋白治疗重症药疹可能的机制。方法：收集正常人和重症药疹患者经糖皮质激素联合丙种球蛋白治疗前后尿液，采用反相高效液相色谱技术，检测尿液中咖啡因的3种主要代谢产物5-乙酰氨基-6-甲酰氨基-3-甲基嘧啶（AFMU）、1-甲基黄嘌呤（1X）和l一甲基尿酸（1U）含量，以AFMU/（AFMU+1U+1X）的比率评价各组N-乙酰基转移酶活性。结果：重症药疹患者N-乙酰基转移酶平均活性（0.12±0.01），明显低于正常人群组的（0.54±0.06）（P<0.01）。结论：N-乙酰基转移酶在重症药疹患者中活性降低，糖皮质激素联合丙种球蛋白治疗有助于恢复N-乙酰基转移酶活性，是治疗重症药疹的作用机制之一。

关键词 重症药疹；糖皮质激素；丙种球蛋白；N-乙酰基转移酶；RP-HPLC

研究表明，重症药疹的发生与体内N-乙酰基转移酶活性降低有关[1]。我们检测正常人和重症药疹患者经糖皮质激素联合丙种球蛋白治疗前后N-乙酰基转移酶活性的变化，为糖皮质激素联合丙种球蛋白的临床应用提供更多的理论基础。

资料与方法

试验对象：2015年1月-2017年6月收治重症药疹患者20例，男8例，女12例；平均年龄（25.3±5.6）岁；病程0.5～7 d。选取同期来本院体检的健康人50例，男25例，女25例；平均年龄（28.3±7.8）岁。所有参与患者均签署知情同意书。

仪器、试剂和药品：IOAvp型高效液相色谱仪，包括SCL中央控制器，SPD紫外可见检测器，LC高压泵，SIL自动进样器，CLASS-VP 5.0色谱数据工作站；甲泼尼龙琥珀酸钠；5-乙酰氨基-6-甲酰氨基-3-甲基嘧啶、l-甲基黄嘌呤（Ⅸ，2-FJ-103-1）和l一甲基尿酸（1U，1399520）；雀巢咖啡。乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。

色谱条件：Shim-pack VP-ODS柱、Shim-pack C18预柱；流动相为乙腈（A相），0.05%醋酸（B相），O～24 min B相的比例从2.5%线性增加至8%；流速l mL/min；在柱温25℃、280 nm波長下检测。

方法：①治疗方法：患者使用丙种球蛋白2g/kg，分3～5d静脉滴注；同时结合静脉使用糖皮质激素相当于泼尼松1 mg/（kg·d）治疗，待病情稳定后逐次递减激素用量。②样品收集及处理：试验当日，受试者上午预留空白尿样后，口服1杯咖啡（含咖啡因约215 mg），5h之后再次留取10mL尿液样品置样品瓶中（预先加入200mg维生素C），保存于-20℃直至上机分析。在整个试验过程中，受试者禁服其他含咖啡因的食物，且不得服用其他药物。试验全过程受医师监护。上机分析时，精密称取AFMU、IX和IU对照品适量，用ddH20陪成20μg/mL对照品溶液。根据AFMU/（AFMU+ 1X+ 1U）的峰面积比，绘制出概率分布直方图。

统计学方法：采用SPSS 13.0 f'orWindows统计软件。计量资料采用（x±s）表示，计数资料比较使用Kruskal-Wallis检验，相关关系采用配对资料的关联性分析。P< 0.05代表差异有统计学意义。

结果

色谱分离：将咖啡因3种代谢物对照品溶液、空白尿液样品和受试尿液样品按照上述标准色谱条件进样测定，可见代谢物AFMU. 1U和IX之间具有良好的分离度，在3种峰位上没有尿液中其他杂质的干扰，而且代谢物与杂质之间的分离度也比较清楚，可以用于分析N-乙酰基转移酶的活性，见图l。

正常人和重症药疹患者治疗前后N-乙酰基转移酶活性比较：采用RP-HPLC法测定大鼠服用咖啡因后尿液中代谢产物AFMU、1U和1X，其中以AFMU/（AFMU+1U+1X）的比率来评价N-乙酰基转移酶的活性。重症药疹患者N-乙酰基转移酶平均活性（O.12±0.01），明显低于正常人群组（0.54±0.06）（P< 0.01），且服药7d后平均活性（0.49±0.04），与正常组相比，差异无统计学意义（P>0.05），见表l。

讨论

重症药疹在临床上是常见的药物不良反应，不但皮肤损害严重，常常还伴有内脏受损及全身中毒症状，易出现并发症，如果未得到及时和有效的治疗，该病死亡率相当高。因此积极和早期治疗重症药疹患者有着极其重要的意义。糖皮质激素是有效的抗炎、抗过敏药物，它能有效地减少炎性渗出[2]。而丙种球蛋白具有中和抗原、抑制细胞因子炎性介质的产生和释放等作用，且其不良反应少见，是临床上治疗重症药疹的重要手段。糖皮质激素联合丙种球蛋白目前是重症药疹治疗中最有效的药物[3]。但其治疗机制仍尚未完全明确。

本研究结果与Dietrich的结果相符，与正常人群相比，重症药疹患者中N-乙酰基转移酶活性降低，而且，经过糖皮质激素联合丙种球蛋白治疗后，重症药疹患者中N-乙酰基转移酶活性逐渐升高，直至接近正常人水平，这可能是糖皮质激素联合丙种球蛋白治疗重症药疹的机制之一，可为糖皮质激素联合丙种球蛋白的临床应用提供更多的理论基础和实验室依据。

参考文献

[1]包振宇，邹先彪.重症药疹的研究进展[J].实用皮肤病学杂志，2015，8（2）：1 12-1 14.

[2]汪小柳，李锐.方红，等.38例重症药疹临床分析[J].实用皮肤病学杂志，2010，3（3）：137-140.

[3]王侠生.重症大疱型药疹研究进展[J].临床皮肤科杂志，2004，33（4）：254-256.