微小RNA-203抑制胶质母细胞瘤干细胞的干细胞特性分析

刘家凯 曾海勇 祝 刚

胶质母细胞瘤为星形细胞瘤的一种常见类型, 也是恶性程度最高的的一种胶质瘤, 具有预后不佳的特点［1］。现阶段,该疾病的治疗以手术、放疗、化疗及其他综合治疗为主, 病死率仍处于较高水平。为改善胶质母细胞瘤患者的预后, 近年来国内外医疗领域不断深入探索该疾病的发病机制。目前对该疾病发生及发展机制的研究已经进入基因领域［2］。微小RNA是一类由内源基因编码的单链RNA分子, 国内外大量实践研究已经证实微小RNA与多种肿瘤疾病的发生、发展存在明显关系［3］。早期有研究发现微小RNA-203在胶质母细胞瘤组织中的表达降低, 但尚无较多更深入的研究。基于上述现状, 本研究分析微小RNA-203对胶质母细胞瘤干细胞特性的影响, 现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2014年1月～2016年12月收治的、接受手术治疗的30例胶质母细胞瘤患者作为研究对象。患者中男 18 例 , 女 12 例 , 年龄 22～71 岁 , 平均年龄 (45.19±9.06)岁。本研究在获取医院伦理委员会批准后开展。

1.2 方法

1.2.1 胶质母细胞瘤干细胞培养、分离 取30例患者术后新鲜病理组织, 剪碎后, 使用胰蛋白酶消化, 制作成单细胞悬液, 经过滤、离心后, 使用干细胞培养基、放置在含5%CO2的细胞培养箱中培养, 温度37℃, 待细胞成熟后, 分离细胞, 随机分为研究组和对照组, 每组15例。

1.2.2 细胞转染 向研究组干细胞转染微小RNA-203, 向对照组细胞转染无意义寡核苷酸链, 转染后24 h, 在荧光显微镜下进行细胞计数, 计算转染效率。

1.2.3 CD133 mRNA、Nestin mRNA 检测 转染 3 d 后 , 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测两组干细胞中CD133 mRNA、Nestin mRNA 的表达 , 检测试剂盒购自武汉默沙克生物科技有限公司, 严格按照试剂盒使用说明书进行检测操作。

1.2.4 细胞成球试验 将转染后的细胞以每孔1000个的密度接种于96孔培养板上, 1周后计算两组细胞一次成球、二次成球的细胞球数量。

1.3 观察指标 比较两组干细胞转染3 d后 CD133 mRNA、Nestin mRNA表达水平以及转染1周后一次成球、二次成球的细胞球数量。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数 ± 标准差(s)表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组干细胞转染 3 d 后的 CD133 mRNA、Nestin mRNA比较 转染 3 d 后 , 研究组干细胞的 CD133 mRNA、Nestin mRNA的表达水平均低于对照组, 差异具有统计学意义(t=89.80、55.80, P＜0.05)。见表 1。

2.2 两组干细胞转染1周后的一次成球、二次成球的细胞球数量比较 转染1周后, 研究组干细胞一次成球、二次成球的细胞球数量均低于对照组, 差异具有统计学意义(t=35.39、145.52, P＜0.05)。见表 2。

表1 两组干细胞转染 3 d 后的 CD133 mRNA、Nestin mRNA 比较 (

表1 两组干细胞转染 3 d 后的 CD133 mRNA、Nestin mRNA 比较 (

注 ：与对照组比较 , aP＜0.05

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表2 两组干细胞转染1周后的一次成球、二次成球的细胞球数量比较(s, %)

表2 两组干细胞转染1周后的一次成球、二次成球的细胞球数量比较(s, %)

注：与对照组比较, aP＜0.05

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3 讨论

研究证实, 胶质母细胞瘤干细胞与神经干细胞具有相似的生理作用, 且能够在诱导分化环境中发生细胞分化, 因此对胶质母细胞瘤干细胞的特性进行深入研究具有重要意义［4］。国内外近年来开展的细胞功能学研究证实, 微小RNA-203对胶质母细胞瘤干细胞特性具有一定程度的调节作用［5］。此外, 早期开展的研究还证实, 微小RNA-203在胶质瘤组织中的表达降低, 并能通过抑制相关基因信号通路对胶质瘤组织细胞的侵袭能力产生抑制作用［6,7］。胶质母细胞瘤干细胞的自我更新能力和多向分化能力的强弱与患者的预后存在明显相关性, 可以说是细胞的重要特性。

本研究分析微小RNA-203对胶质母细胞瘤干细胞自我更新能力和多向分化能力的影响。胶质母细胞瘤干细胞自我更新能力评估指标为转染1周后一次成球、二次成球的细胞球数量, 多向分化能力的评估指标为CD133 mRNA、Nestin mRNA的表达水平。结果显示转染3 d后, 研究组干细胞的CD133 mRNA、Nestin mRNA 的表达水平均低于对照组 , 差异具有统计学意义 (t=89.80、55.80, P＜0.05)。转染 1 周后 , 研究组干细胞一次成球、二次成球的细胞球数量均低于对照组,差异具有统计学意义(t=35.39、145.52, P＜0.05)。上述研究结果表明, 微小RNA-203能够抑制胶质母细胞瘤干细胞的自我更新能力, 促进胶质母细胞瘤干细胞进行多向分化。深入分析得到上述结果的原因为：向胶质母细胞瘤干细胞转染微小RNA-203后, 能够使一定比例的胶质母细胞瘤干细胞转换为一般细胞, 失去干细胞本身的生理作用, 最终导致肿瘤干细胞群体难以维系。

综上所述, 微小RNA-203是一种能够抑制胶质母细胞瘤干细胞自我更新能力、促进胶质母细胞瘤干细胞多向分化的单链RNA分子。针对微小RNA-203进行胶质母细胞瘤基因治疗可作为一种新的研究思路, 具有较高的研究价值。