绿威胶囊对乙醇致小鼠急性胃溃疡的保护作用

刘培刚 张宏建 胡恩莹 梁卫青 浦锦宝#

1 浙江省中医药研究院 浙江 杭州 310007

2 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053

关键词 绿威胶囊 乙醇 胃溃疡 胃黏膜 抗氧化 小鼠

绿威胶囊以叶绿素铜钠盐和蚕蛹复合氨基酸（经水解提取精制而得）为主，辅以薏苡仁、茯苓及山楂等[1]，能促进损伤组织愈合、治愈溃疡及保护胃黏膜。本实验旨在研究绿威胶囊抵抗胃溃疡的作用，探讨其可能的作用机理，为绿威胶囊保健应用和功能拓展提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 药物：绿威胶囊，浙江红绿生源健康生物技术有限公司，批号：171016；奥美拉唑肠溶片，浙江金华康恩贝生物制药有限公司，批号：JA1701004。

1.2 动物：雄性SPF级BALB/c小鼠60只，体重20±2g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2016-0011，分笼饲养，自由饮水和摄食，5天后开始实验，控制室温22±2℃，湿度55±15%。

1.3 仪器：JJ-12J型脱水机、JB-P5包埋机，武汉俊杰电子有限公司；ROTAZ型超薄切片机，德国徕卡公司；烤箱，上海福玛实验仪器有限公司；倒置荧光显微镜成像系统，日本尼康公司；5430R型离心机，德国艾本德股份公司；Power Wave XS2型酶标仪，美国BioTek公司；pH精密试纸（0.5～5.0），杭州特种纸业有限公司。

1.4 动物分组和给药：BALB/c小鼠60只，随机分为6组，每组10只，包括：正常对照组（生理盐水）、模型对照组（生理盐水）、阳性对照组（奥美拉唑20mg/kg）、绿威胶囊低剂量组（20mg/kg）、绿威胶囊中剂量组（40mg/kg）、绿威胶囊高剂量组（80mg/kg）；连续进行灌胃给药6天，每日1次，第5次给药后禁食24h，自由饮水，末次给药30min后，给予70%乙醇0.1ml/只，构建胃溃疡模型，正常组灌胃给予相同剂量的生理盐水，4小时之后眼球采血，制备血清后备用。

1.5 髓过氧化物酶（MPO）的活性和丙二醛（MDA）的含量测定：造模1h后摘眼球取血，3000r/min和4℃条件下制备血清留作备用；离心后的血清用生理盐水5倍稀释后取20μl，按MPO及MDA测定试剂盒说明书测定其A值并计算含量（波长为450nm）。

1.6 胃黏膜观察：颈椎脱臼法将小鼠处死后剖腹快速取出胃，在贲门处使用精密pH试纸测定pH值。幽门与贲门结扎后将1.5ml 10%甲醛注入小鼠胃腔中，小鼠胃固定10～15min后，沿大弯剪开用生理盐水冲洗干净后展平并将水分吸干以备后续检测。观察胃黏膜损伤情况。利用游标卡尺对小鼠的溃疡面积进行精密计算：按Gut h标准展开溃疡指数及抑制率的计算[2]。溃疡抑制率=（平均模型组UI-平均实验组UI）/平均模型组UI×100%。

1.7 胃组织形态学观察：取相同10%甲醛溶液浸泡小鼠胃组织部位采用常规石腊包埋，4μm切片，HE染色后通过光镜进行胃部组织学变化的观察。

2 结果

2.1 绿威胶囊对胃溃疡的影响：正常组小鼠胃黏膜色泽较红润，表面光滑且无损伤，未见出血点；模型组小鼠出现严重溃疡，都有条索状或点状出血。与模型组比较，绿威胶囊各剂量组和奥美拉唑组小鼠胃黏膜点状出血和损伤程度均有不同程度减轻。且在绿威胶囊各剂量组中均能发现在胃溃疡部位形成叶绿素盐保护膜进行保护。

2.2 胃黏膜溃疡指数及溃疡抑制率比较：见表1。

表1 绿威胶囊对乙醇致小鼠急性胃溃疡的影响（）

表1 绿威胶囊对乙醇致小鼠急性胃溃疡的影响（）

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

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2.3 胃液pH值变化比较：相比正常组，乙醇诱导急性胃溃疡小鼠胃液pH显著降低。绿威胶囊各剂量组与模型组比较，均可抑制胃酸分泌，与正常组和奥美拉唑组比较均无明显差异，且在中高剂量组中部分实验结果略高于正常组和奥美拉唑组。说明绿威胶囊各剂量组均能提高胃溃疡小鼠胃内pH值。结果见图1。

图1 各组小鼠胃内pH值比较

2.4 胃组织病理切片HE染色：正常组小鼠胃黏膜层结构连续完整；表层上皮黏液细胞正常，没有坏死及出血现象。模型组小鼠胃黏膜上皮腺体减少现象清晰可见，出血及坏死现象发生，肌层肉芽组织增生，大部分区域微黏膜的上皮细胞出现大量脱落的状况，胃底腺结构紊乱且黏膜下层增厚。与模型组比较，绿威胶囊各剂量组和奥美拉唑治疗后胃黏膜均有不同程度的减轻，可见大部分区域结构清晰，无血管扩张和上皮细胞脱落，未见坏死及出血，但可见不同程度的腺体减少。见图2。

图2 各组小鼠胃组织病理切片比较（HE染色）

2.5 绿威胶囊对胃溃疡小鼠血液中MPO及MDA含量的影响：模型组中MPO含量较正常组降低（P＜0.01），MDA含量升高（P＜0.01）；与模型组比较，绿威胶囊各剂量组MPO均升高（P＜0.01），但对MDA含量未表现出明显影响，其中只有高剂量具有明显降低作用（P＜0.01），说明绿威胶囊能升高乙醇引起的急性胃溃疡小白鼠胃组织的MPO含量，一定程度上降低小鼠胃组织MDA的含量。结果见表2。

表2 绿威胶囊对血液中MPO和MDA含量的影响（）

表2 绿威胶囊对血液中MPO和MDA含量的影响（）

注：与正常组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

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3 讨论

现代医学认为，某些特殊原因导致胃酸、胃蛋白酶等攻击因子增强或者胃黏膜保护因子降低使得局部黏膜的抵抗力明显降低，从而导致胃溃疡发生[3]。高度酒精作为一种攻击因子，不仅能引起体内产生大量的氧自由基及MDA，还对MPO起抑制作用，从而引起胃黏膜受损[4]。绿威胶囊的主要成分叶绿素铜钠盐是从中药蚕砂中提取而来，经过脱镁离子并用铜离子取代获得的叶绿素衍生物，能促进损伤组织愈合、治愈溃疡和保护胃黏膜。

以往研究表明，中性粒细胞浸润在胃黏膜炎症和损伤的发展中至关重要。通过MPO进入中性粒细胞的含量可以对胃黏膜组织进行评估。MDA是多不饱和脂肪酸的最终产物，它通常被用作评估胃黏膜脂质过氧化的指标。本实验结果显示：正常对照组小鼠溃疡面积明显小于模型对照组小鼠，说明成功构建了急性胃溃疡小鼠模型。绿威胶囊各剂量组均可以明显减小乙醇所诱导的急性胃溃疡小鼠模型的溃疡面积，显示绿威胶囊具有不错的胃保护功效。通过测定MPO和MDA含量，表明绿威胶囊各剂量组均能显著增加乙醇诱发急性胃损伤小鼠模型胃组织中的MPO含量及一定程度降低小鼠胃组织的MDA含量。结果证实绿威胶囊可能通过胃黏膜的保护、氧自由基的清除及脂质过氧化抑制而起到对胃溃疡保护功效。