性病门诊患者人乳头瘤病毒（HPV）感染情况及其病毒亚型分布分析

杨静

【摘 要】目的：分析我院性病门诊患者人乳头瘤病毒（HPV）感染情况及其亚型分布。方法以我院2015年9月至2016年11月妇科门诊1216例患者为研究对象，采集全部研究对象的宫颈分泌物，采用PCR-反向点杂交法进行HPV-DNA检测，将检测结果进行统计分析。结果：1216例样本中共检测出HPV阳性324例，感染率为26.64%。其中，高危型感染294例，低危型感染30例；单一感染占总阳性数的78.39%，单一感染与多重感染人数差异显著，P<0.05；在年龄分布方面，峰值集中在20～40岁。结论：不同型别HPV的致癌能力和后果有差异，HPVl6、18型很容易引起具有侵袭性或恶性程度高的宫颈癌；年轻女性HPV感染率高，且感染年龄分布有年轻化趋势。

【关键词】人乳头瘤病毒；感染率；亚型；分布

Abstract Objective： To analyze the infection status and subtype distribution of human papillomavirus （HPV） in sexually transmitted diseases outpatients in our hospital. Methods in our hospital from September 2015 to November 2016 1216 cases of gynecological clinic patients as the research object， collecting all the cervical secretions of the research object， HPV-DNA was detected by PCR- reverse dot blot hybridization method， the detection results were analyzed. Results： HPV positive was detected in 324 of 1216 samples， with an infection rate of 26.64%. Among them， 294 cases of high-risk infection， 30 cases of low risk of infection； single infection accounted for the total number of positive 78.39%， the number of single infection and multiple infection had significant difference， P<0.05； in the age distribution， the peak concentrated in the 20～40 years old. Conclusion： the carcinogenic ability and consequences of different types of HPV were different， HPVl6， 18 are easily caused by invasive or high malignant degree of cervical cancer； the high rate of HPV infection and the infection of young women， younger age distribution.

Key words： Human papillomavirus；Infection rates；Subtypes；Distribution

【中图分类号】R36.231 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2018）06-03--01

人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一种无包膜的双连闭环DNA病毒，属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属。HPV可通过性行为、密切接触、母婴等方式传播。HPV感染可引发多种肿瘤，特别容易引发女性宫颈癌，不同的型别引起不同的临床表现，另外还有外阴癌、阴茎癌、肛门癌、前列腺癌、膀胱癌、直肠癌、口腔癌、扁桃体癌等。目前已分离出130多種，其中约40种与宫颈癌和癌前病变有关。HPV感染具有一定的地域性，不同国家与地区感染分型不同。本研究通过PCR-反向点杂交法，对2016年9月至2016年 11月我院妇科门诊1216例患者进行HPV-DNA 的检测，探讨其感染情况并分析其亚型分布，结果如下。

对象与方法

一、对象

1.研究对象

2015年9月至2016年 11月我院妇科门诊患者1216例，年龄20～71岁，平均41.69岁。所有病例均采用 PCR-反向点杂交法进行HPV-DNA的检测并分型。

2.样本采集

不能在患者月经期采集，且采集对象在48小时内无性行为，没有对阴道使用药物或冲洗。医生通过窥阴器暴露宫颈，先拭去宫颈口分泌物，再采用专用拭子探入患者宫颈口内2～3cm，按顺时针方向旋转3～4周以获得足够的脱落细胞，然后取出置于盛有1mL无菌生理盐水的样本管中，作上标记，储藏于-20℃条件环境中。两周内检测，实验操作前要振荡摇匀。

二、仪器及试剂

采用达安基因股份有限公司（广州）生产的HPV分型基因检测试剂盒，试剂盒包括DNA提取液、聚合酶链反应（Polymerase chain reaction，PCR）的反应液、Taq酶、阴性质控品、阳性质控品、杂交中和液、变性液、洗液、显色液、酶标原液、基因芯片。同时对19种基因亚型HPV进行分析，其中高危型16种：16、53、58、52、31、33、56、39、68、18、66、51、35、59、45、6、11、43亚型和 CP8304 型，低危型HPV 3种：6、11、43 型。

三、方法

实验操作严格按照HPV分型检测试剂盒说明书进行，具体步骤如下：（1）抽提样本DNA。（2） PCR扩增：首先93℃热作用3min使DNA变性，然后在63℃退火，使引物与DNA模板结合，最后在72℃延伸，保持7min。（3）PCR产物杂交：把PCR 产物置于医用核酸分子快速杂交仪中，与分型杂交膜条进行杂交及酶标显色。（4）观察结果：采用肉眼观察，HPV分型杂交膜上有19种基因型，并设有质控点。若质控点阳性，其他点阴性，则结果判定为阴性。质控点阳性，再根据膜条HPV分型分布图确定HPV病毒类型。

四、数据统计与处理

采用SPSS软件进行数据统计，对于多型感染者，各亚型的阳性率重复计算，感染率的差别分析采用卡方检验，P<0.05在统计学上有意义。

结果

一、HPV的感染率

全部样本感染具体情况如表1。1216例样本中共检测出HPV阳性324例，感染率为26.64%。其中，高危型感染294例，感染率为24.18%；低危型感染30例，感染率为2.47%。部分型别间感染率差异显著，P<0.05。

二、不同年龄组HPV的感染率

把1216例患者按10岁为间隔单位分组，感染者年龄分布情况如表2。从表2可以看出，31～40岁组感染率最高，占31.48%；其次是41～50岁组，占29.01%；20～30岁组占20.68%；51～60岁组占15.12 %；大于61岁组占3.70%。部分年龄组间差异显著，P<0.05。

三、HPV感染亚型的单纯感染与多重感染情况分析

1216例样本中HPV 高危及低危亚型单纯感染及多重感染情况如表3。在324例阳性中，单一感染所占比例最高，为78.39%，双重感染占18.76%，三重感染占2.47%。单纯感染与多重感染间差异显著，P<0.05。

讨论

宫颈癌是妇女疾病中一种很常见的恶性肿瘤，有调查数据显示全球每年新发宫颈癌患者40万至50万例，其中我国人数约为12万，接近全球女性宫颈癌新发病例的三分之一。人乳头瘤病毒（HPV）感染是宫颈癌和癌前病变的主要原因，在宫颈癌患者的癌变组织中检测出HPV的患者超过90%。以往有研究显示，HPVl6、18型很容易引起具有侵袭性或恶性程度高的宫颈癌，调查数据中HPVl6、18型约占到70%，由此，感染l6、18型HPV的女性宫颈癌发病率很高，还有一些高危型（如普遍的皮肤型HPV感染）是与疣状表皮发育不良或其他恶性肿瘤有关，本研究与此基本相符。HPV感染具有一定的地域性，根据前人研究，我国宫颈癌的高发地区HPV感染率高达20%，其他低发地区HPV的感染率不超过10%。

HPV是球形DNA病毒，可以使人体正常细胞永生化，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，然后使感染部位发生病变。其病变机理为HPV感染后连续不斷地刺激角化细胞，同时激活有丝分裂增殖的肿瘤基因，使肿瘤基因持续表达然后生成肿瘤。女性生殖道感染HPV的现象非常普遍，有数据显示正常女性的HPV感染率为20%～47%，本实验的研究结果为阳性率26.64%，符合相关研究的数据。HPV的传播方式以性接触传播为主，可导致CA、宫颈癌、肛门肛管癌、扁桃体癌、口腔癌等疾病。不同型别的HPV侵犯的组织部位不同，感染后引起的临床病症也不同，低危型会导致寻常疣、扁平疣、跖疣等，高危型很容易诱发宫颈癌、直肠癌、口腔癌、扁桃体癌等。

HPV感染率与年龄关系较大，根据相关文献，发达国家HPV感染峰值一般出现在25岁以下，然后随年龄的增加呈下降趋势，在发展中国家里HPV感染的年龄分布曲线呈U型。本次实验中，20～40岁人群为感染率高峰，50岁以上女性感染率接近20%，感染年龄分布有年轻化趋势。根据SELLORS的研究，年轻女性HPV感染率很高的主要原因是在20岁前开始性生活和没有固定的性伙伴，年龄较大出现的感染高峰是因为HPV具有潜伏性，妇女在感染后，机体免疫力随年龄的增长而下降，从而病毒再次被激活引起感染。根据以往研究，HPV感染以单一感染为主，单一感染约占总感染人数的3/4。本次研究中，单一感染占总阳性数的78.39%，与相关研究数据接近。多重感染中，以二重感染为主，三重及以上感染较少，多重感染所载病毒量更多，更容易发生宫颈癌。

本次实验通过PCR-反向点杂交法检测样本的HPV感染情况并分型，此技术在国内运用广泛，检测结果准确可靠。PCR-反向点杂交法对DNA纯度要求低，特异性强，灵敏度高，操作简便、快速，一般在2～4 小时完成扩增反应。将PCR法运用于HPV感染检测，可以完成宫颈癌及癌前病变等高风险人群的初次筛选，对控制HPV感染具有重要意义，及早预防与治疗，降低宫颈癌的发生。

参考文献

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