结肠癌组织中CysLTR-1 mRNA的表达及意义

赵璐,杜小明,张艳苓,孙国平

(1安徽医科大学第一附属医院，合肥230022；2皖北煤电集团总医院)

结肠癌是常见的消化系统肿瘤，在我国，结肠癌发病率位居所有恶性肿瘤的第六位，据统计，我国每年约有27万新发病例，13万死亡病例[1]。近年来，在结肠癌的早期诊断、根治手术、放疗、化疗及免疫治疗等方面，均取得较大进展，然而，结肠癌患者的治疗效果和预后并未得到显著改善，侵袭和复发是导致结肠癌患者高病死率的主要原因[2]，临床亟需寻找新的有效治疗靶标。流行病学统计结果显示，炎症性肠病(IBD)患者罹患结肠癌的概率是同龄健康者的2～5倍[3]，导致IBD癌变的危险因素主要有结肠癌家族史、年龄、原发性硬化性胆管炎及肠道炎症等，IBD患者接受抗炎治疗可显著降低罹患结肠癌的概率，肠道慢性炎症是诱导结肠癌发生的独立危险因素[4]。半胱氨酰白三烯(CysLTs)及其G蛋白偶联受体(CysLTR-1和CysLTR-2)共同参与炎症反应。有研究证实，CysLTR-1在乳腺癌[5]和胶质细胞瘤[6]等恶性肿瘤组织中表达增加，目前，有关CysLTR-1在结肠癌中表达及意义的研究甚少。2014年1～12月，我们检测了结肠癌患者癌组织中CysLTR-1表达，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2014年1～12月行切除手术的结肠癌患者作为研究对象，纳入标准：术前未接受抗肿瘤治疗；术后经病理检查诊断为原发性结肠癌；具备完整的病例资料；患者及家属均签署知情同意书。排除标准：合并其他恶性肿瘤；严重肝肾功能不全；合并全身感染等。共收集70例符合上述纳入标准和排除标准的结肠癌患者，术中切除癌组织和癌旁正常组织(距离癌组织>5 cm)，生理盐水冲洗后，立即置于液氮中保存。患者男40例、女30例，<60岁者32例，≥60岁者38例；肿瘤直径<5 cm者42例，≥5 cm者28例；肿瘤低分化者36例，中高分化者34例；无淋巴结转移者37例，有淋巴结转移者33例；TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期者36例，Ⅲ～Ⅳ期者34例。本研究获得医院伦理委员会审核批准。患者出院后，通过电话、电子通讯与复诊相结合的手段对患者进行随访(截止随访时间2018年1月)。

1.2 结肠癌患者癌组织中CysLTR-1 mRNA表达检测 采用Real-time PCR法。取出液氮保存的组织样本，每份组织各切取约20 mg，TRIzol试剂提取组织样本中总RNA，参照逆转录试剂盒的反应体系和反应条件(37 ℃ 15 min；85 ℃ 5 s)，将RNA反转录为cDNA，并置于-20 ℃冰箱中保存备用。参照Real-time PCR反应体系和反应条件(预热95 ℃ 30 s；变性95 ℃ 10 s；退火60 ℃ 1 min；延伸72 ℃ 10 min，共35个循环；4 ℃ 30 min)，进行Real-time PCR反应，内参GAPDH正向引物：5′-GCTCCTCTATGTATGTCGTGA-3′，反向引物：5′-ACCTCCGGCCATGGTGTCTGA-3′；CysLTR-1正向引物：5′-GCACCATTGCTTTGTATCTCAACC-3′,反向引物：5′-ATACCTAACGACACATACCAACC-3′。2-ΔΔCT法计算结肠癌组织中CysLTR-1 mRNA相对表达量。

2 结果

2.1 结肠癌及癌旁组织中CysLTR-1 mRNA表达比较 结肠癌、癌旁正常组织中CysLTR-1 mRNA相对表达量分别为4.16±1.22、1.26±0.31，二者比较，差异有统计学意义(t=19.275，P=0.000)。

2.2 结肠癌组织中CysLTR-1 mRNA表达与患者临床病理特征的关系 结肠癌组织中，以CysLTR-1 mRNA相对表达量的平均值为界限，将结肠癌患者分为CysLTR-1高表达组和CysLTR-1低表达组，≥平均值为CysLTR-1高表达组(36例)，<平均值为CysLTR-1低表达组(34例)。结肠癌组织中CysLTR-1 mRNA表达与患者性别、年龄均不相关(P均>0.05)，与肿瘤大小、肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期有关(P均<0.05)，见表1。

表1 CysLTR-1 mRNA表达与结肠癌患者临床病理特征的关系[例(%)]

2.3 结肠癌组织中CysLTR-1 mRNA表达对患者预后的影响 CysLTR-1高表达、低表达者术后3年总生存率分别为30.56%(11/36)、55.89%(19/34)，二者比较，差异有统计学意义(χ2=4.580，P=0.032)。CysLTR-1高表达、低表达者的中位生存时间分别为23.47、27.53个月，二者比较，差异有统计学意义(χ2=3.876，P=0.049)。

3 讨论

结肠癌是恶性程度较高的消化系统肿瘤，是结肠黏膜上皮细胞在遗传、环境等多因素共同诱导下的结果，结肠癌是导致肿瘤相关死亡的主要原因[7]。据统计，结肠癌患者的5年总生存率仅30%～50%[8]，预后不佳。化疗及靶向治疗在结肠癌综合治疗方案中占重要地位，是提高结肠癌患者治疗效率的关键，因此寻找新的靶向治疗靶标分子，对提高结肠癌患者生存率、改善患者预后均有积极意义。

越来越多的研究关注炎症因子在结肠癌肿瘤形成及恶性进展中的功能，其中白三烯(LTs)和前列腺素是近年来的研究热点[9]。研究证实，LTs及其受体参与促进了多种肿瘤形成，是一种新近发现的致瘤机制[11]。CysLTs属于LTs，是由花生四烯酸和5-脂氧合酶代谢途径产生的一系列强效炎症介质，包括白三烯C4(LTC4)、白三烯D4(LTD4)和白三烯E4(LTE4)。CysLTs与其受体(CysLTR-1和CysLTR-2)相互作用，在炎症反应、细胞迁移[11]等过程中发挥生物学效应，如CysLTs在过敏性鼻炎中表达增加，CysLTR-1拮抗剂(如孟鲁斯特)能有效抑制CysLTs与CysLTR-1结合，可有效减轻过敏性鼻炎引起的不适症状[12]。Savari等[13]证实，CysLTs及其受体是连接炎症与结肠癌的重要桥梁。

本研究结果显示，CysLTR-1 mRNA在结肠癌组织中的相对表达量高于癌旁正常组织，差异有统计学意义，由此推测，CysLTR-1在结肠上皮细胞癌变过程中可能发挥促进作用。另外，本研究结果发现，在肿瘤直径较大的肿瘤组织中，CysLTR-1呈较高表达状态，提示CysLTR-1可能促进结肠癌细胞增殖。低分化肿瘤组织中，CysLTR-1表达水平较高，有淋巴结转移和较高TNM分期的肿瘤组织中，CysLTR-1表达较高，以上结果提示CysLTR-1与其配体在结肠癌细胞去分化、侵袭转移等恶性进展过程中发挥促进作用，是导致结肠癌患者病情进展的正向调控因子。

Csandl等[14]证实，CysLTR与肿瘤多药耐药性关系紧密，CysLTR拮抗剂可增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，改善患者预后。本研究结果发现，CysLTR-1高表达者的术后3年总生存率较低、中位生存时间较短，由此推测，CysLTR-1高表达可能预示结肠癌患者较低的生存率和较短的生存时间，监测结肠癌组织中CysLTR-1表达，有助于预测结肠癌患者预后情况。

综上所述，结肠癌组织中CysLTR-1 mRNA呈高表达，监测术后结肠癌组织中CysLTR-1表达，有助于对患者进行病情进展和预后评估。