皮灵搽剂质量标准研究＊

李祥，利新发，谭初宝

(江西省景德镇市第六人民医院，景德镇 333000)

丙酸氯倍他索为肾上腺皮质激素类药物，具有较强的抗炎、抗瘙痒和血管收缩作用，抗炎作用约为氢化可的松的112倍，特别适用于短期治疗的顽固性皮肤病[1]。市场供应品种多制成单方或复方软膏剂型，外用溶液型剂型较少。我院制剂室生产的皮灵搽剂（赣药制字H20130003），以丙酸氯倍他索为主药，主治慢性湿疹、神经性皮炎、银屑病、扁平苔藓、瘙痒症、痒疹等，临床应用多年，疗效颇好。然而目前尚没有皮灵搽剂标准的质量控制方法，近年来高效液相色谱色谱法 （Highperformance liquid chromatography，HPLC） 广泛作为了各类药物质量控制标准的常用方法，本研究参考相关文献[2]，笔者采用HPLC法建立了皮灵搽剂中丙酸氯倍他索含量测定的方法，并对该制剂进行了稳定性考察，为皮灵搽剂的质量控制提供参考。

1　仪器与试药

1.1仪器 岛津高效液相色谱仪、电子天平（FA1104型，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）、紫外分光光度仪（UV-754型，上海电子光学技术研究所）、搅拌机（JB-3型，上海新伟仪表电器厂）。

1.2试药 丙酸氯倍他索（天津天药药业股份有限公司）；乙醇（湖南九典制药股份有限公司）；月桂氮酮（湖北科捷制药有限公司）；甘油（南昌白云药业有限公司）；丙酸氯倍他索对照品 （100302-200602，含量为99.5%），购自中国药品生物制品检定所；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。

2　方法与结果

2.1皮灵搽剂的制备 按处方比例，称取丙酸氯倍他索溶于适量乙醇中使溶解，加入月桂氮卓酮和甘油，加乙醇使成1000ml，搅拌均匀，即得皮灵搽剂。

2.2丙酸氯倍他索的含量测定

2.2.1色谱条件 色谱柱：Diamonsil（R）C18柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-甲醇-0.05mol·L-1磷酸二氢钠溶液 （用85%磷酸调节pH值到2.5）（475：100：425）； 流速：1ml·min-1； 检测波长为240nm；进样量：20μl。

2.2.2对照品溶液的配制 取丙酸氯倍他索对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含25μg的对照品溶液。

2.2.3供试品溶液的配制 精密量取皮灵搽剂5ml（相当于丙酸氯倍他索1.25mg），置50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过即得供试品溶液。

2.2.4阴性样品溶液的配制 取除丙酸氯倍他索的其他处方组分，按工艺制成阴性样品，照“2.2.3”方法制备阴性样品溶液。

2.2.5专属性试验 在“2.2.1”色谱条件下，对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液色谱图见图1。理论塔板数按丙酸氯倍他索峰计算不低于2000，处方中其他成分对主峰的测定无干扰。

图1　高效液相色谱图（A.丙酸氯倍他索对照品；B.供试品；C.阴性样品）

2.2.6线性试验 取丙酸氯倍他索对照品适量，精密称定，分别用甲醇稀释，配制以下一系列浓度的溶液：100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625μg·ml-1。精密吸取各浓度对照品溶液续滤液各20μl，照“2.2.1”项下色谱条件进行含量测定。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，丙酸氯倍他索的浓度（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：Y=40883.58 X+2835.76，r=0.9999；结果表明：丙酸氯倍他索在1.56μg·ml-1-100μg·ml-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.2.7重复性试验 取同一批次样品6份，按“2.2.3”方法制备供试品溶液，精密吸取 20μl，照“2.2.1”项下色谱条件下进行测定，结果丙酸氯倍他索的含量平均值为0.25mg·ml-1，RSD为1.46%，表明方法重复性良好。

2.2.8精密度试验 取同一份供试品溶液，照“2.2.1”项下色谱条件下连续进样6次，测定峰面积。丙酸氯倍他索的RSD为1.26%，表明该方法精密度良好。

2.2.9稳定性试验 取同一批号的供试品溶液，照“2.2.1”项下色谱条件下分别于 0、1、2、4、8、12、24h进行测定，记录峰面积。7次测定丙酸氯倍他索峰面积的RSD为1.92%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.2.10加样回收率试验 精密量取同一批皮灵搽剂样品3ml、4ml、5ml各3份于50ml量瓶中， 共9份， 精密加入对照品母液 （0.1036mg·ml-1）2ml，照“2.2.3”方法制备供试品溶液，并照“2.2.1”项下色谱条件进行测定，计算丙酸氯倍他索的加样回收率。结果平均回收率为99.06%，RSD=1.31%。表明回收率良好，该方法准确度高。结果见表1。

表1　加样回收率试验结果（n=9）

2.2.11样品的含量测定 分别取3批次皮灵搽剂样品，按“2.2.3”方法制备供试品溶液，并测定各批次样品中丙酸氯倍他索的含量。结果见表2。

表2　样品中丙酸氯倍他索含量测定结果（n=3）

2.3稳定性试验

2.3.1影响因素试验

2.3.1.1强光照射试验样品去除外包装放在装有日光灯的光照箱内，于照度为4500±500lx的条件下放置10d，于第5d和第10d取样，观察外观性状变化，并采用HPLC法测定含量。结果见表3。

2.3.1.2高温试验 样品去除外包装放在60℃的恒温箱内，放置2d后，即发现瓶体变形膨胀，溶液由无色变为微黄色，故改在40℃条件下进行试验，于第5d和第10d取样，观察外观性状变化，并采用HPLC法测定含量。结果见表3。

2.3.1.3高湿试验 样品去除外包装放在25℃，相对湿度90%±5%的恒温恒湿箱内，放置10d，于第5d和第10d取样，观察外观性状变化，并采用HPLC法测定含量。结果见表3。

表3　影响因素试验考察结果

2.3.2加速试验 本品模拟上市包装放在40℃±2℃、相对湿度75%±5%的恒温恒湿箱内，放置6个月，在试验期间第1个月、2个月、3个月、6个月末分别取样一次，观察外观性状变化，并采用HPLC法测定含量。结果见表4。

2.3.3长期试验 本品模拟上市包装放在30℃±2℃、相对湿度（65±5）%的恒温恒湿箱内，放置 12个月，在试验期间第3个月、6个月、9个月、12个月末分别取样1次，观察外观性状变化，并采用HPLC法测定含量。结果见表5。

2.4安全性观察 皮灵搽剂在我院临床应用中，不良反应报告病例极为少见，偶见局部轻度灼烧感。曾有个别患者没有遵从医嘱正确使用药物，由于单位面积用量过大导致皮肤局部萎缩的不良反应发生，但是3个月后自行恢复正常。因此皮灵搽剂在临床使用中的用药安全性较高。

表4　加速试验考察结果

表5　长期试验考察结果

3　讨论

慢性湿疹是皮肤科常见、多发类疾病，具有强烈瘙痒、反复发作的特点，患者皮肤呈现局限性肥厚或苔藓样变，临床治疗较为困难，严重影响患者的生活质量[3]。皮灵搽剂在我院皮肤科临床应用多年，其主药成分丙酸氯倍他索对于慢性湿疹、扁平苔藓和神经性皮炎等非感染性炎症性皮肤病，可以发挥局部抗炎治疗作用；加入高效安全、无毒副作用的透皮吸收促进剂月桂氮酮，提高了丙酸氯倍他索对皮肤的渗透性[4]；甘油作为保湿剂，在皮肤涂抹搽剂后，保持湿润环境，保护皮肤，降低敏感性。皮灵搽剂配制工艺简单，易于规模生产，因此非常适合医院制剂的开发与应用。

由于丙酸氯倍他索是皮灵搽剂的主要的测定指标成分，因而在皮灵搽剂质量标准的制订中，建立丙酸氯倍他索的含量测定方法最为关键。参照相关文献，丙酸氯倍他索的含量测定方法有HPLC法和双波长系数倍率法等，其中采用HPLC法较多，但流动相选择较为复杂[5-8]。我们的研究参照《中国药典》中丙酸氯倍他索的含量测定的流动相配比，而且参照相关文献[8]，发现如果用甲醇-磷酸二氢钾溶液，待测成分可出现双峰的色谱峰，这对结果的检测会带来不利影响，因而在本研究中采用了甲醇-磷酸二氢钠溶液，且检测条件为流速为1ml·min-1，检测波长为 240nm，经对照品、供试品、阴性样品色谱图比较，结果显示丙酸氯倍他索和制剂中的其它组分能达到基线分离，理论塔板数不低于2000。这些结果表明该法用于测定丙酸氯倍他索的含量不受干扰，专属性强，准确度高。，此外，我们还通过影响因素试验、加速试验和长期试验考察皮灵搽剂的稳定性，在强光、高温、高湿等条件下试验，其外观性状和含量等均无明显变化；在长期试验期间内，该制剂的外观性状和含量也均无明显变化。因此，皮灵搽剂在试验期间内基本稳定，暂定其有效期为一年。综上，我们的研究表明HPLC法所建标准可用于皮灵搽剂质量标准的控制。