补骨脂素的植物雌激素作用及其机制

（黑龙江八一农垦大学动物科技学院动物药学系，黑龙江大庆 163000）

妇女保健是医疗发展中的重要研究项目，在妇科病症研究中，逐渐将中草药渗透其中，因为植物中包含大量雌激素，补骨脂素对人体具有重要作用。雌激素其活性化学成本具有明显生物学研究效应。比如补需药其主要选择补骨脂，属于豆科草本植物果实，具有很好的补肾壮阳功效。对补骨脂素中的植物雌激素作用展开实验研究，针对乳腺癌细胞分析其作用，为妇科临床治疗的发展提供更多帮助。

1 补骨脂素的植物雌激素内涵

所谓植物雌激素，主要是植物在光合条件下因为弱雌激素作用所产生的化合物。因为雌激素在低亲和度条件下，与植物产生雌激素样效应，所以产生植物雌激素。从分子结构上分析，补骨脂素的植物雌激素与哺乳动物身体中所包含的雌激素结构具有相似之处，都属于生物活性成分，都对妇女保健具有治疗作用。在植物雌激素其本身并不属于激素，补骨脂素的植物雌激素包含大豆、亚麻籽等。

2 补骨脂素的植物雌激素作用

补骨脂素的植物雌激素属于外源性激素类型，其不需要其他途径能够直接在机体内参与内分泌调节程序。雌激素在一定剂量条件下，将其结合ER，能够很好地激发出雌激素的作用。实验研究发现其相似于身体中雌二醇17β的功效，因为食物中包含的雌激素剂量充足，其对妇科炎症与更年期病症具有很好的治疗作用，同时也能够缓解绝经后的骨质疏松病症，主要治疗方法是代替治疗手段。因为雌激素类型不同，所产生的治疗效果也存在很多差别，比如内源性的雌激素，尤其是异黄酮中的雌激素，其治疗功效明显，并且能够代替子宫切除后的作用。对于补骨脂素的植物雌激素研究，很多发达国家针对其功效，采取人工合成的方式，利用雌激素为原材料制作雌激素代用品依普黄酮，主要治疗病症为骨质疏松。

如果应用低剂量的植物雌激素，将其与ER相结合，继而形成复合物，其本身会受到结合部位的影响，帮助人体很好的组织过多雌激素分子与身体中的受体结合，从而削减靶细胞的应答效率，不仅能够达到抗刺激素的目的，还能增强人体抵抗能力。补骨脂素的植物雌激素，将其结合乳腺细胞，提升ER竞争地位，并且球蛋白在刺激性激素刺激下形成，这样一来很好的抑制络氨酸酶活性变化，降低促细胞增殖效果，很好的组织了子宫癌以及乳腺癌病症的出现。

植物雌激素对于乳腺疾病的治疗，还体现在乳腺癌细胞增殖方面，当然这方面内容还处于研究状态，很多机制并不清晰。相关研究资料显示，因为补骨脂素的植物雌激素具有亚型ERα、ERβ，这与雌激素关系紧密。乳腺组织中两种受体本身都处于正常状态，其中优势方为ERβ，但是一旦比例发生变化，作为优势方的ERβ将会提升肿瘤出现的可能性。这期间需要补骨脂素的植物在雌激素利用ERα为载体进行细胞增殖，防止细胞继续恶变。

3 某实验室补骨脂素的植物雌激素实验操作

①细胞培养

在细胞培养中，具体培养对象为乳腺癌细胞与子宫内膜癌细胞，以常规细胞培养的方式，选择小牛血清，含量为10%，融入高糖溶液之后，注意培养的温度必须为37℃，同时含有5%的CO2，饱和度湿度也必须符合试验标准。具体细胞培养之前，需要提前4d洗涤细胞，应用PBS，之后培养先选择无酚红DMEM培养，这样就能将细胞中的雌激素消耗殆尽。

②细胞增殖试验

细胞增殖步骤操作期间，首先T47D细胞传代必须满足3次，完成上一培养步骤之后，选择处于生长期的细胞，同时以胰蛋白酶进行消化，含量为0.25%，利用PBS洗涤，确保洗涤次数在2次以上，及时往其中加入无血清DMEM，将细胞密度控制在有限的孔板内，并且保证培养液的体积控制在200µL。等到24h培养结束之后，细胞会发生明显变化，紧贴细胞壁，这样需要将细胞转换为1×10-8mol·L-1ICI182，780，在此条件下受试物必须设置不同复孔，满足试验需要。将其中的培养液吸去，以酶联免疫检测仪为主要检测手段进行吸光度测定，并且计算具体的增殖率。具体增殖率计算公式如下：

PR（%）=（实验组A/溶剂对照组A）×100%

根据具体试验计算获得计算数据，同时测定期间因为T47D细胞相同，所以补骨脂素药物主要为1×10-7mol·L-1，或者是1×10-6mol·L-1。

③细胞株培养与计算之后，需要测定PRmRNA，主要以RTPCR法进行检测。需要选择无酚红DMEM，含量为5%，将已经培养了4d的细胞进行试验，以培养瓶为设备，进行无血清借种，静置24h之后观察细胞的贴壁情况，随即进行试剂提取，根据药物说明书应用，将试验情况详细记录。

④流式细胞术检测步骤中，仔细观察细胞中ER-α，ER-β变化情况，并且准确记录。与此同时还需要与上述的细胞培养衔接，观察静置24h后的细胞壁变化。时间加到48h，并且洗涤细胞，用PBS洗涤次数为2，进行细胞重悬，以5%血清为辅助，将ER-α，ER-β抗体进行冰孵，时间为40min。避光放置，以免因为光照影响试验结果。最后利用细胞仪进行细胞检测。

⑤试验操作期间必须仔细进行数据统计，所有数据结果都必须以±s的形式表示，同时利用数据处理软件将数据专业处理，参考统计学原理展开检验分析。