兜兰炭疽病病原鉴定及其室内防治药剂筛选

徐波 宋凤鸣 冯淑杰 张荣 刘海涛 曾宋君

摘要：【目的】對兜兰炭疽病病原菌进行鉴定，并进行室内防治药剂筛选，为兜兰炭疽病的大田防控提供参考依据。【方法】采集具有典型症状的兜兰炭疽病标本，以组织分离法进行病原物分离培养，通过形态学观察和rDNA-ITS序列分析对兜兰炭疽病病原菌进行鉴定；通过室内温度、光照控制和培养基中不同pH、碳源、氮源的差异试验确定病原菌菌丝生长、产孢量和孢子萌发条件等生物学特性；选用12种杀菌剂进行兜兰炭疽病病原菌室内药效试验，并对筛选出效果理想的药剂进行室内毒力测定。【结果】通过形态学观察和rDNA-ITS序列分析，确定分离获得的兜兰炭疽病病原菌的无性态为半知菌类黑盘孢目刺盘孢属胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）。胶孢炭疽菌菌丝生长和分生孢子萌发温度为9～36 ℃，最适温度27 ℃；产孢温度12～36 ℃，最适温度30 ℃。胶孢炭疽菌菌丝在55 ℃下处理20 min死亡，孢子在50 ℃下处理30 min或55 ℃下处理20 min死亡。菌丝生长和产孢的pH为2～13，最适为pH 8；分生孢子萌发的pH为2～12，最适为pH 7。连续光照有利于胶孢炭疽菌菌丝生长、产孢及分生孢子萌发。培养基中不同碳源和氮源对菌丝生长、产孢及分生孢子萌发具有显著影响（P<0.05）。500 mg/L的恶霉灵、硫磺·甲硫灵、福·福锌和咪鲜胺锰盐4种杀菌剂对胶孢炭疽菌菌丝抑制率和产孢抑制率均达100.00%，其中咪鲜胺锰盐的毒力最强、反应灵敏度最高，半最大效应浓度（EC50）为0.09 mg/L。【结论】引起兜兰炭疽病的病原菌为胶孢炭疽菌（C. gloeosporioides）。咪鲜胺锰盐、硫磺·甲硫灵、恶霉灵和福·福锌4种杀菌剂可在室内有效防治兜兰炭疽病，其中以500 mg/L咪鲜胺锰盐的防治效果最佳。

关键词： 兜兰；炭疽病；病原鉴定；生物学特性；杀菌剂筛选

中图分类号： S436.611 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2018）02-0271-09

Abstract：【Objective】Anthracnose pathogen of Paphiopedilum was identified and indoor control chemicals were selected to provide theoretical basis for prevention and control of Paphiopedilum anthracnose. 【Method】The samples of Paphiopedilum with typical anthracnose symptoms were collected. The pathogen was isolated and cultured through tissue isolation. Anthracnose pathogen of Paphiopedilum was identified by morphological observation and rDNA-ITS sequence analysis. The biological characteristics such as pathogen mycelial growth， spore production and spore germination were determined by experiment including indoor temperature， illumination and culture media with different pH values， carbon and nitrogen sources. Sensitivity to 12 fungicides of anthracnose pathogen of Paphiopedilum was tested and then fungicides with fine effects were selected to conduct indoor toxicity test. 【Result】 Through morphological observation and rDNA-ITS sequence analysis， the anamorph of isolated anthracnose pathogen of Paphiopedilum was Colletotrichum gloeosporioides， belonging to Colletotrichum， Melanconiales， fungi imperfecti. The temperature for mycelial growth and conidial germination was 9 ℃ to 36 ℃， and the optimal temperature was 27 ℃. Sporulation temperature was 12-36 ℃， and the optimum temperature was 30 ℃. Lethal temperature for C. gloeosporioides mycelia was 55 ℃ maintaining for 20 min， and lethal temperature of conidia was 50 ℃ maintaining for 30 min or 55 ℃ maintaining for 20 min. pH range for both mycelial growth and sporulation was 2-13 and the optimum pH for the both was 8. pH range for conidial germination was 2-12 and the optimum one was 7. Continuous illumination was good for mycelial growth， sporulation and conidial germination. The carbon and nitrogen sources in media had significant difference on mycelial growth， sporulation and conidial germination（P<0.05）. Under the concentration 500 mg/L， hymexazol， sulfur·Jialiulin， Fufuxin and prochloraz-manganese chloride complex could effectively control mycelial growth and sporulation of anthracnose pathogen，the success rates were both 100.00%. Among the four fungicides， prochloraz had the strongest toxicity and reaction sensitivity， and its concentration for 50% of maximum effect（EC50） was 0.09 mg/L. 【Conclusion】The anthracnose pathogen of Paphiopedilum is Colletotrichum gloeosporioides. Hymexazol， sulfur·Jialiulin， Fufuxin and prochloraz can effectively control Paphiopedilum anthracnose， and prochloraz-manganese chloride complex with concentration of 500 mg/L has the best control effects.

Key words： Paphiopedilum； anthracnose； pathogen identification； biological characteristics； fungicide selection

0 引言

【研究意义】兜兰（Paphiopedilum）是一种花型独特、色彩绚丽的新潮花卉，近年来在我国发展迅速，但在华南地区兜兰商品化栽培过程中较易发生炭疽病等病害，严重影响了兜兰植株生长和观赏价值，进而制约兜兰产业的发展，因此迫切需要明确引起兜兰炭疽病的病原菌及其生物学特性，并筛选出合适的药剂进行防治（曾宋君等，2010）。【前人研究进展】目前我国对兜兰病害的研究较少，仅有兜兰立枯病病原菌分离及颉抗菌防治试验（张志光等，1994）及本研究团队对兜兰茎腐病病原鉴定及其生物学特性研究的报道（徐波等，2014）。炭疽病是兜兰生产过程中的主要病害之一，主要危害兜兰的叶片。兰花炭疽病发病初期，叶片组织出现浅灰色至黑褐色区域，随后坏死，坏死组织逐渐下陷，形成黑色圆形或近圆形凹陷病斑，周围被黄色晕圈包围；多个病斑常聚生成条带状，沿叶脉扩展，病斑处易破碎；病害发生严重时常引起枯叶，甚至全株死亡（刘仲健等，2009）。在华南地区兜兰栽培过程中发生过上述类似症状的病害，但未见详细报道。国内外已有一些兰科植物和其他花卉炭疽病病原菌鉴定和室内防治杀菌剂筛选的报道，其病原菌鉴定方法多采用形态显微观察与rDNA-ITS序列分析分子学鉴定相结合的方法，室内防治杀菌剂的筛选多采用市场常用农药（Park et al.， 1996； 徐明全等，2005；林清洪等，2006； Prapagdee et al.， 2008；高洋等，2010；胡秀荣等，2010；姚锦爱等，2011；周平兰等，2015）。【本研究切入点】目前，有关华南地区兜兰栽培过程中炭疽病病原菌鉴定及室内防治药剂筛选方面的研究尚无文献报道。【拟解决的关键问题】从中国科学院华南植物园科研温室采集具有典型炭疽病症状的兜兰标本，以组织分离法进行病原物分离培养后，通过形态学观察和rDNA-ITS序列分析鉴定兜兰炭疽病病原菌，并在测定病原菌的生物学特性基础上进行室内防治药剂筛选试验，以期获得防治兜兰炭疽病病原菌的有效杀菌剂，为兜兰炭疽病防治提供参考依据。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

具有典型炭疽病症状的摩帝类兜兰（Paphiopedilum Maudiae type）标本来源于中国科学院华南植物园科研温室。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 病原菌分離培养及致病性测定 采用组织分离法对兜兰炭疽病标本进行病原组织分离培养后进行单孢纯化培养，再选取具有代表性的菌株置于4 ℃冰箱保存备用。

人工接种前，将保存的病原菌移植到PDA培养基上25 ℃培养7 d。接种时，沿兜兰叶片中部中脉两侧分别用梅花针刺伤或不刺伤，将直径为5 mm的菌苔贴在伤口或无伤口处，以无病原菌的空白培养基为对照，接种后保湿24 h。每处理贴10个菌块，3次重复，贴块后每天观察发病情况。对接种后出现明显症状的叶片组织再次分离病原菌。

1. 2. 2 病原菌鉴定 参考有关文献（Sutton，1992；吴文平等，1995；陆家云，1997）对确定为致病菌的菌株进行形态鉴定。

采用CTAB法提取病原菌DNA，利用PCR扩增rDNA-ITS序列，进行病原菌分子鉴定。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后拍照。设计的引物为ITS1（5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'）和ITS4（5'-TCCT

CCGCTTATTGATATGC-3'），扩增获得的PCR产物由华大基因生物技术有限公司进行纯化与测序，将测序结果登陆www.ncbi.nlm.nlh.gov网站进行BLAST比对，得到病原菌的rDNA-ITS鉴定结果。

1. 2. 3 病原菌生物学特性测定 参照方中达（2001）的方法进行病原菌生物学特性测定。病原菌耐热力测试时，把直径5 mm的病原菌菌饼放在装有5 mL无菌水的试管中，再将试管分别放入45、50、55和60 ℃的恒温水浴锅内分别处理5、10、15、20、25和30 min后迅速冷却，然后将菌饼置于PDA培养基上培养，6 d后观察病原菌生长情况。有关温度、光照和pH处理及不同碳源和氮源对病原菌菌丝生长、产孢量和孢子萌发影响的测定参考徐波等（2014）的方法。各试验均重复3次。

1. 2. 4 室内防治药剂筛选试验 室内防治药剂筛选参考徐波等（2014）的方法。所用药剂包括恶霉灵（70%可湿性粉剂，天津市绿亨化工有限公司）、硫磺·甲硫灵（70%可湿性粉剂，江苏省南京惠宇农化有限公司）、福·福锌（80%可湿性粉剂，青岛海纳生物科技有限公司）、咪鲜胺锰盐（50%可湿性粉剂，江苏辉丰农化股份有限公司）、苯醚甲环唑（10%可湿性粉剂，陕西标正作物科学有限公司）、肟菌酯（原药含量95%，江苏丰山集团有SAS限公司）、多菌灵（50%可湿性粉剂，江苏江阴福达农化有限公司）、腈菌唑（40%可湿性粉剂，山东省联合农药工业有限公司）、百菌清（75%可湿性粉剂，山东罗邦生物农药有限公司）、甲基托布津（70%可湿性粉剂，日本曹达株式会社）、代森锰锌（80%可湿性粉剂，江西劲农化工有限公司）和三唑酮（15%可湿性粉剂，江苏剑牌农化股份有限公司）等12种杀菌剂。配制浓度均为500 mg/L。各试验均重复3次。

1. 3 统计分析

运用Excel 2010对试验数据进行整理，采用SPSS 17.0进行差异显著性分析，利用SAS 9.4进行线性回归分析。

2 结果与分析

2. 1 致病性测定结果

以采用组织分离法从兜兰炭疽病标本中获得的代表性菌株进行人工接种，刺伤接种的叶片于接种4～5 d后开始出现组织坏死，其表现症状与自然发病症状基本相似（图1）。从发病的叶片组织中可分离出相同的病菌，而无刺伤接种和对照均未出现病斑。表明从发病兜兰叶片中分离获得的病菌是导致兜兰发生炭疽病的病原菌，而叶片伤口是病原菌的重要入侵途径。

2. 2 病原菌鉴定结果

2. 2. 1 病原菌形态鉴定结果 由图2可看出，在PDA培养基上，病原菌一般呈等径辐射生长，菌落圆形，地毯状平铺，初期白色，然后逐渐变为橄榄绿，最终变为灰黑色，后期偶有扇变；气生菌丝由白色至灰白色，逐渐变为深灰色絮状或绒状。分生孢子梗无色、单胞，卵形、圆桶形或棍棒形，短小。分生孢子呈圆柱形或圆桶状、单胞、无色、两头钝圆，内含2～3个油球，大小12.50～14.15 μm×3.5～5.5 μm。根据病原菌形态特征，参考Sutton（1992）、吴文平等（1995）、陆家云（1997）的描述，初步鉴定该病原菌为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）。

2. 2. 2 病原菌分子鉴定结果 扩增获得的PCR产物（图3）经测序后，其测序结果在GenBank中进行BLAST比对，发现兜兰炭疽病病原菌的rDNA-ITS序列与C. gloeosporioides（HQ845106.1）具有99%的相似性。结合该菌的形态学观察及分子生物学特性，确定兜兰炭疽病病原菌的无性态为半知菌类黑盘孢目刺盘孢属胶孢炭疽菌（C. gloeosporioides）。

2. 3 病原菌生物学特性

2. 3. 1 温度对病原菌菌丝生长、产孢量和孢子萌发的影响 由图4可知，胶孢炭疽菌菌丝在9～36 ℃内均能生长，以27 ℃下的生长较快，在此温度下培养6 d后菌落直径为83.67 mm，大于其他11个处理。在9～27 ℃内菌落直径随温度升高而增大；在27～36 ℃内菌落直径随温度升高而减小。

胶孢炭疽菌在6、9和39 ℃条件下均没有孢子产生，产孢温度为12～36 ℃，最适温度为30 ℃，在此温度下培养6 d后产孢量为32.25×106个/皿，达最大值。在12～30 ℃内产孢量随温度升高而增加；在30～36 ℃内产孢量随温度升高而减少（图4）。

由图5可知，胶孢炭疽菌分生孢子在6、9和39 ℃条件下均不能萌发，其萌发温度为12～36 ℃，最适温度为27 ℃，在此温度下培养12和24 h，萌发率分别为15.00%和55.00%（图5）。

2. 3. 2 病原菌耐热力测定结果 由表1可知，胶孢炭疽菌菌丝在水温45 ℃条件下处理5～30 min、50 ℃条件下处理5～30 min或55 ℃条件下处理5～15 min仍可再生长。随着处理时间的延长，对菌丝生长的抑制率逐步升高，在45和50 ℃条件下均以处理30 min效果最佳，抑制率分别为13.44%和32.21%，顯著高于其他处理（P<0.05，下同）。在55 ℃条件下处理20及20 min以上时菌丝不再生长，抑制率达100.00%。

由表2可知，胶孢炭疽菌在45 ℃条件下处理5～30 min、50 ℃条件下处理5～25 min或55 ℃条件下处理5～15 min仍能产生孢子，但随着温度的升高或处理时间的延长，对产孢的抑制率逐步升高；在50 ℃条件下处理30 min或55 ℃条件下处理20及20 min以上时均不能产生孢子。

2. 3. 3 pH对病原菌菌丝生长、产孢量和孢子萌发的影响 由图6可知，胶孢炭疽菌菌丝在pH 2～13内均可生长和产孢。菌丝生长和产孢的最适pH均为8，在此条件下培养6 d后菌落直径为85.94 mm，产孢量为30.50×106个/皿。pH在2～8时培养6 d后的菌落直径和产孢量均随着pH升高而增大；pH在8～13时培养6 d后的菌落直径和产孢量均随着pH升高而减小。

从图7可知，胶孢炭疽菌分生孢子在pH 13时不能萌发，在pH 2～12时可萌发，最适pH为7，在此条件下分生孢子培养12和24 h的萌发率分别为22.69%和44.33%。在pH 2～7内孢子萌发率随pH升高而升高，在pH 7～12内则随pH升高而降低。

2. 3. 4 光照对病原菌菌丝生长、产孢量和孢子萌发的影响 不同光照条件对胶孢炭疽菌菌丝生长、产孢和分生孢子萌发均有影响，连续光照（3000 lx日光灯）有利于菌丝生长、产孢和分生孢子萌发；全暗条件不利于菌丝生长、产孢和分生孢子萌发；而12 h光暗交替有利于菌丝生长和分生孢子萌发，但不利于产孢（表3）。

2. 3. 5 不同碳源对病原菌菌丝生长、产孢量和孢子萌发的影响 从表4可知，胶孢炭疽菌在6种供试碳源培养基上和无碳源（无菌水，CK）条件下均能生长和产孢，但无碳源条件下菌丝稀薄，紧贴培养基表面生长。分生孢子在无菌水及浓度为1%的6种供试碳源培养液中均能萌发。

6种供试碳源培养基培养中，葡萄糖、麦芽糖、果糖、甘露醇和可溶性淀粉对胶孢炭疽菌菌丝生长均起促进作用，其中葡萄糖最有利于该菌菌丝生长，其培养的菌株菌落直径显著高于其他碳源培养基培养的菌落直径，其次是果糖和麦芽糖，而乳糖则会抑制菌丝生长。6种供试碳源培养基中，最有利于胶孢炭疽菌产孢的是麦芽糖，其培养的菌株产孢量著高于其他碳源培养基的产孢量，其次是葡萄糖，而乳糖会抑制产孢。最有利于分生孢子萌发的是葡萄糖和可溶性淀粉，二者的孢子萌发率显著高于其他碳源培养基的孢子萌发率，而果糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇均会抑制分生孢子萌发，其中果糖最不利于分生孢子萌发。

2. 3. 6 不同氮源对病原菌菌丝生长、产孢量和孢子萌发的影响 从表5可知，胶孢炭疽菌菌丝在无氮源（无菌水，CK）条件下和6种供试氮源培养基上均能生长，其中硝酸钾、亚硝酸钠、硝酸铵和脲均能促进胶孢炭疽菌菌丝生长，最有利于胶孢炭疽菌菌丝生长的是硝酸钾，其培养的菌株菌落直径显著高于其他氮源培养基培养的菌落直径，其次是硝酸铵，而赖氨酸和氯化铵会抑制菌丝生长。胶孢炭疽菌在氮源为氯化铵的培养基上不能产孢，在其余5种供试氮源和对照培养基上均能产孢，其中，以亚硝酸钠、硝酸铵和脲为氮源的培养基上产孢量显著高于对照，亚硝酸钠最有利于产孢，其次是脲。胶孢炭疽菌分生孢子在无菌水中和浓度为1%的6种供试氮源培养基中均能萌发，其中硝酸钾、亚硝酸钠、硝酸铵和氯化铵均能促进分生孢子萌发，最有利于分生孢子萌发的是氯化铵，其次是硝酸铵。

2. 4 不同杀菌剂对病原菌的室内防效

2. 4. 1 不同杀菌剂对病原菌菌丝生长和产孢量的抑制效果 从表6可知，恶霉灵、硫磺·甲硫灵、福·福锌和咪鲜胺锰盐4种杀菌剂能完全抑制胶孢炭疽菌菌丝生长及孢子产生，菌丝抑制率和产孢抑制率均达100.00%，是防治兜兰炭疽病的理想药剂。苯醚甲环唑和肟菌酯对胶孢炭疽菌菌絲的抑制率在80.00%以上，且产孢抑制率均达100.00%，即这2种杀菌剂也适合用于防治兜兰炭疽病。

2. 4. 2 不同杀菌剂对病原菌的毒力 进行咪鲜胺锰盐、肟菌酯、福·福锌和恶霉灵4种杀菌剂对胶孢炭疽菌室内毒力测定，结果（表7）显示，4种供试杀菌剂的抑菌机率值y和杀菌剂质量浓度转换成的对数值x的相关系数（r）均在0.9500000以上，说明供试杀菌剂的毒力回归方程均有效。

4种杀菌剂咪鲜胺锰盐、肟菌酯、福·福锌和恶霉灵的半最大效应浓度（EC50）分别为0.09、1.98、9.77和15.92 mg/L，说明咪鲜胺锰盐对炭疽病病原菌的毒力最强，恶霉灵对该菌的毒力最弱（表7）。

从表7可知，咪鲜胺锰盐、福·福锌、恶霉灵和肟菌酯的毒力回归方程的斜率分别为2.770901、0.361001、0.198393和0.151925，以咪鲜胺锰盐的斜率最大，综合咪鲜胺锰盐对胶孢炭疽菌的EC50最小，说明胶孢炭疽菌对咪鲜胺锰盐的反应灵敏度最高。

3 讨论

炭疽病是兰花栽培过程中的常见病害（徐明全等，2005），其病原菌主要为胶孢炭疽菌（C. gloeosporioides）（Park et al.，1996； 徐明全等，2005； Prapagdee et al.， 2008；高洋等，2010；姚锦爱等，2011）和兰科刺盘孢菌（C. orchidearum）（姚圣梅和姜晓明，1997）。本研究首次从华南地区的兜兰炭疽病标本中分离鉴定出其病原菌的无性态为胶孢炭疽菌，该菌菌丝生长及分生孢子萌发的温度为9～36 ℃，最适温度均为27 ℃，产孢温度为12～36 ℃，最适温度为30 ℃，喜中高温环境，与高洋等（2010）对墨兰炭疽病菌生物学特性研究结果相近，但与姚锦爱等（2011）对建兰炭疽病菌生物学特性研究结果存在明显差异，可能与兜兰和墨兰炭疽病菌均来自于华南地区，而建兰炭疽病菌来自福建有关。但兜兰与墨兰炭疽病菌的生物学特性略有差异，可能是胶孢炭疽菌在不同的寄主材料中具有不同的生态适应性。

目前尚无兜兰胶孢炭疽菌致死温度的文献报道。本研究结果表明，兜兰胶孢炭疽菌菌丝在55 ℃下处理20 min死亡，孢子在50 ℃下处理30 min或55 ℃下处理20 min死亡，故采用水浴55 ℃处理20 min兜兰胶孢炭疽菌，其菌丝和分生孢子即可同时死亡，此温度可作为基质消毒的参考依据。

本研究在葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和可溶性淀粉6种碳源中，只有乳糖对兜兰胶孢炭疽菌菌丝生长、产孢及分生孢子萌发均起抑制作用。但谭舒心（2009）的研究结果显示乳糖能促进蜘蛛兰褐斑病胶孢炭疽菌菌丝生长和产孢，姚锦爱等（2011）也研究发现乳糖能促进建兰炭疽病胶孢炭疽菌菌丝生长；而汪涛（2007）的研究结果显示乳糖对百合炭疽菌的菌丝生长和产孢影响不显著，张海珊（2008）的研究结果认为乳糖对麦冬炭疽菌菌落生长影响不显著，但能促进产孢。引起这些差异的原因可能是胶孢炭疽菌适应生存环境的结果，但具体原因尚需进一步研究。

关于氮源对胶孢炭疽菌菌丝生长的影响报道主要集中于硝酸铵、氯化铵、硝酸钾和脲等。本研究结果显示，氯化铵抑制兜兰胶孢炭疽菌菌丝生长，硝酸铵和硝酸钾促进菌丝生长，与谭舒心（2009）对蜘蛛兰褐斑病病原菌的试验结果一致，但姚锦爱等（2011）研究发现，硝酸铵和氯化铵均能促进建兰炭疽病病原菌菌丝生长，硝酸钾则抑制菌丝生长。林清洪等（2006）研究发现，脲和硝酸铵均能抑制鹤望兰炭疽病菌产孢，与本研究脲和硝酸铵均能促进兜兰胶孢炭疽菌产孢的结果相反，其原因可能与寄主不同有关系，但具体原因也需进一步研究。

在对兜兰炭疽病杀菌剂药效试验中，虽然与已报道的炭疽病种类不同，但同种杀菌剂的防效结果大致相同。林清洪等（2006）对鹤望兰炭疽病杀菌剂药效研究结果表明，50%咪鲜胺3种浓度对病原菌的抑制率均为100.0%；50%多菌灵3种浓度对病原菌的抑制率分别为99.0%、92.4%和88.2%；70%代森锰锌和75%百菌清对病原菌的抑菌效果最差。檀根甲（2009）针对采后苹果炭疽菌的药剂试验结果显示，苯醚甲环唑的效果最好，EC50为0.115 mg/L，代森锰锌的效果最差。胡秀荣等（2010）进行了7种杀菌剂对柑橘炭疽病菌的室内毒力测定，结果表明咪鲜胺的毒力最强，EC50为0.0741 mg/L。王丽等（2016）测定了三唑类杀菌剂对苹果炭疽病菌的室内毒力，结果表明，苯醚甲环唑对苹果炭疽病菌的EC50为0.7200 mg/L，2014和2015年的田间药效试验结果表明，10%苯醚甲环唑WG对炭疽病的防效较好，分别为82.20%和83.53%。本研究中不同杀菌剂对兜兰胶孢炭疽菌的防效试验结果显示，大多数已报道的杀菌剂均能有效抵制兜兰胶孢炭疽菌菌丝生长和产孢，其中咪鲜胺锰盐能完全抑制菌丝生长和产孢，EC50为0.09 mg/L；苯醚甲环唑的菌丝抑制率和产孢抑制率分别为86.43%和100.00%，多菌灵的分别为74.42%和95.21%；代森锰锌和百菌清的抑菌效果较差。因此，在防治兜兰炭疽病时，咪鲜胺锰盐是最值得推荐的杀菌剂，其次是硫磺·甲硫灵、恶霉灵、福·福锌和肟菌酯等。为利用本研究成果，还需在兜兰温室栽培过程中对兜兰炭疽病进行接种和防治试验，下一步需利用已筛选出的杀菌剂进行药效验证并在温室栽培过程中对兜兰炭疽病进行有效防控。

4 结论

在华南地区引起兜兰炭疽病的病原菌为胶孢炭疽菌（C. gloeosporioides），咪鲜胺锰盐、硫磺·甲硫灵、恶霉灵和福·福锌等4种杀菌剂可在室内有效防治兜兰炭疽病，其中以500 mg/L咪鲜胺锰盐的效果最佳。

参考文献：

方中达. 2001. 植病研究方法[M]. 第3版. 北京：中国农业出版社. [Fang Z D. 2001. Research Method of Plant Pathology[M]. The 3rd Edition. Beijing：China Agriculture Press.]

高洋， 劉爱媛， 冯淑杰， 张荣. 2010. 墨兰炭疽病菌生物学特性研究[J]. 北方园艺，（24）：170-171. [Gao Y， Liu A Y， Feng S J， Zhang R. 2010. Study on biological characteris-tics of Colletotrichum gloeosporioides of Cymbidium sinense[J]. Northern Horticulture， （24）：170-171.]

胡秀荣， 鹿连明， 蒲占湑， 黄振东，陈国庆. 2010. 7种杀菌剂对柑橘炭疽病菌的室内毒力测定[J]. 中国农学通报， 26（11）： 272-275. [Hu X R， Lu L M， Pu Z X， Huang Z D， Chen G Q. 2010. Toxicity measurement of 7 fungicides on Colletotrichum gloeosporioides from citrus[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin， 26（11）：272-275.]

林清洪， 林光荣， 刘福平， 章宁，黄维南. 2006. 鹤望兰炭疽病菌的生物学特性及杀菌剂的药效研究[J]. 福建农业学报， 21（3）： 203-206. [Lin Q H， Lin G R， Liu F P， Zhang N， Huang W N. 2006. Biological characteristics of anthracnose of Strelizia reginae and control efficiencies of fungicides against the pathogen[J]. Fujian Journal of A-gricultural Sciences， 21（3）： 203-206.]

刘仲健， 陈心启， 陈利君， 雷嗣鹏. 2009. 中国兜兰属植物[M]. 北京：科学出版社. [Liu Z J， Chen X Q ， Chen L J， Lei S P. 2009. The Genus Paphiopedilum in China[M]. Beijing： Science Press.]

陆家云. 1997. 植物病害诊断[M]. 第2版. 北京： 中国农业出版社：166-167. [Lu J Y. 1997. Diagnosis of Plant Diseases[M]. The 2nd Edition. Beijing：China Agriculture Press：166-167.]

檀根甲. 2009. 采后苹果与炭疽菌的相互作用及病害控制机理研究[D]. 合肥：安徽农业大学. [Tan G J. 2009. Postharvest interaction between apple and anthracnose caused by Collectotrichum gloeosporioides and control mechanism of the disease[D]. Hefei： Anhui Agricultural University.]

谭舒心. 2009. 蜘蛛兰褐斑病及其病原菌鉴定与病害的药剂控制试验[D]. 重庆：西南大学. [Tan S X. 2009. Diagnosing brown leaf bloteh of spider lily（Hymenocallis li-ttoralis） and screening effective fungicides for the disease control[D]. Chongqin：Southwest University.]

王丽，周增强，侯珲. 2016. 三唑类杀菌剂对苹果主要病原菌的毒力及田间防效[J]. 河南农业科学，45（7）： 82-86. [Wang L，Zhou Z Q，Hou H. 2016. Virulence and field control efficacy of triazole fungicides on pathogens of main apple diseases[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences，45（7）：82-86.]

汪涛. 2007. 百合炭疽菌生理生化及有效药剂筛选研究[D]. 合肥：安徽农业大学. [Wang T. 2007. Studies on physiological and biochemical characteristics of Colletotrichum lilii and screening of effectual fungicides[D]. Hefei： Anhui Agricultural University.]

吴文平， 张志铭， 张玉琴. 1995. 炭疽菌属（Colletotrichum Cda）分类研究V. 产直形孢子的种[J]. 河北农业大学学报， 18（3）： 63-67. [Wu W P， Zhang Z M， Zhang Y Q. 1995. Studies on taxonomy of genus Colletotirchem Cda. V. Species with stright conidia[J]. Journal of Agrieultural University of Hebei， 18（3）： 63-67.]

徐波， 宋凤鸣，冯淑杰，张荣，刘海涛，曾宋君. 2014. 兜兰茎腐病病原鉴定和生物学特性及室内药剂筛选研究[J]. 广东农业科学，41（14）：70-75. [Xu B， Song F M， Feng S J， Zhang R， Liu H T， Zeng S J. 2014. Study on pathogen identification and biologicalcharacteristics of stem rot of Paphiopedilum and its indoor chemical control[J]. Guangdong Agricultural Science，41（14）：70-75.]

徐明全， 郑平， 刘荣维， 刘琼光， 鲍晓媛. 2005. 兰花主要病害鉴定及药剂筛选试验[J]. 广东农业科学，（5）：46-49. [Xu M Q， Zheng P， Liu R W， Liu Q G， Bao X Y. 2005. Pathogen identifing and medicament screening for disease control of orchids[J]. Guangdong Agricultural Science，（5）：46-49.]

姚锦爱， 黄鹏， 余德亿， 吕苏敏，林丽萍. 2011. 建兰炭疽病病原菌分离、鉴定及培养条件优化[J]. 热带作物学报， 32（10）： 1940-1944. [Yao J A， Huang P， Yu D Y， Lü S M， Lin L P. 2011. Isolation and identification of anthracnose pathogen on Cymbidium ensifolium and its culture condition optimization[J]. Chinese Journal of Tropical Crops， 32（10）： 1940-1944.]

姚圣梅， 姜曉明. 1997. 兰花炭疽病的初步研究[J]. 仲恺农业技术学院学报， 10（1）： 36-40. [Yao S M， Jiang X M. 1997. Studies on Cymbidium anthracnose[J]. Journal of Zhongkai Agrotechnical College， 10（1）： 36-40.]

曾宋君， 陈之林， 吴坤林， 段俊. 2010. 国产兜兰属植物的引种和栽培[J]. 中国野生植物资源， 29（2）：53-58. [Zeng S J， Chen Z L， Wu K L， Duan J. 2010. Study on introduction and cultivation of Paphiopedilum distributed in China[J]. Chinese Wild Plant Resoures， 29（2）：53-58.]

张海珊. 2008. 麦冬炭疽菌的生物学特性及有效药剂筛选[D]. 合肥：安徽农业大学. [Zhang H S. 2008. Biological characteristics and effective fungicides selection of anthracnose of Ophiopogon japonicus[D]. Hefei： Anhui Agricultural University.]

张志光， 张天晓， 陈个贤， 李树云. 1994. 蔸兰立枯病原菌及颉抗菌防治的研究[J]. 湖南师范大学自然科学学报，17（1）： 70-74. [Zhang Z G， Zhang T X， Chen G X， Li S Y. 1994. Studies on the Rhizoctonia solani kuhn from Paphiopedilm spp and biological control of it by Trichoderma virde Pers Fr[J]. Acta Science Natural Univisity Normal Hunan， 17（1）： 70-74.]

周平兰， 唐新科， 龙岳林， 周小毛. 2015. 春兰炭疽病致病菌 Colletotrichum boninense 的鉴定及生物学特性分析[J]. 园艺学报， 42（10）：1993-2001. [Zhou P L， Tang X K， Long Y L， Zhou X M. 2015. Identification of pathogen Colletotrichum boninense from Cymbidium goeringii and its biological characteristics[J]. Acta Horticulturae Sinica， 42（10）：1993-2001.]

Park S Y， Chung H J， Kim G Y， Koh Y J. 1996. Characteris-tics of anthracnose of orchids caused by Colletotrichum gloeosporioides[J]. Korean Journal of Plant Pathology， 12（4）：455-458.

Prapagdee B， Akrapikulchart U， Mongkolsuk S. 2008. Potential of a soil-borne Streptomyces hygroscopicus for biocontrol of anthracnose disease caused by Colletotrichum gloeosporioides in orchid[J]. Journal of Biological Sciences， 8（7）：1187-1192.

Sutton B C. 1992. The Genus Glomerella and its anamorph colletotrichum[M]//Bailey J A，Jeger M J. Colletotrichum Biology，Pathology and Control. Wallingford： CAB International： 1-26.

（责任编辑 麻小燕）