橡胶树三倍体的2n配子来源及发生途径鉴定

张源源 方家林 黄肖 李维国 安泽伟

摘要：【目的】明确形成三倍体橡胶树云研77-2和云研77-4的2n配子来源及发生途径，为利用天然2n配子杂交选育多倍体新品种提供参考。【方法】以三倍体橡胶树云研77-2和云研77-4及其亲本为试验材料，通过SSR分子标记鉴定其2n配子来源及发生途径，并分析2n配子传递亲本的杂合性。【结果】分别通过4个位点可判定形成云研77-2和云研77-4的2n配子来源于母本GT1，无位点判定2n配子来源于父本PR107。从8个位点判定形成云研77-2的2n配子发生途径为第一次减数分裂核复原（FDR），从2个位点判定形成云研77-2的2n配子发生途径为第二次减数分裂核复原（SDR），形成云研77-2的2n配子发生途径为FDR的概率为80.00%。从8个位点判定形成云研77-4的2n配子发生途径为FDR，从3个位点判定形成云研77-4的2n配子发生途径为SDR，形成云研77-4的2n配子的发生途径为FDR的概率为72.73%。形成云研77-2和云研77-4的2n配子分别传递亲本60%和70%的杂合性。【结论】形成云研77-2和云研77-4的2n配子均来源于母本GT1，且其发生途径均为FDR。

关键词： 橡胶树；三倍体；2n配子；发生途径；第一次减数分裂核复原（FDR）；第二次减数分裂核复原（SDR）

中图分类号： S794.104 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2018）02-0208-06

Abstract：【Objective】The sources and formation pathway of 2n gametes which formed triploid rubber trees Yunyan 77-2 and Yunyan 77-4 were studied to provide reference for hybridization breeding of polyploid new varieties using natural 2n gametes. 【Method】Triploid rubber trees Yunyan 77-2， Yunyan 77-4 and their parents were used as test materials. The sources and formation pathway of 2n gametes were identified by SSR markers， and heterozygosity of transfer parents of 2n gametes were analyzed. 【Result】Sources of 2n gametes which formed Yunyan 77-2 and Yunyan 77-4 derived from female parent GT1 were identified by four loci respectively，while there was no locus which determined that 2n gametes derived from male parent PR107. Eight loci determined that the formation pathway of 2n gametes which formed Yunyan 77-2 was the first division restitution（FDR），two loci determined that the formation pathway of 2n gametes which formed Yunyan 77-2 was second division restitution（SDR）. The probability of 2n gamete forming Yunyan 77-2 through FDR was 80.00%. Eight loci determined that the formation pathway of 2n gametes which formed Yunyan 77-4 was FDR，three loci determined that the formation pathway was SDR，the probability of 2n gamete forming Yunyan 77-4 through FDR was 72.73%. The 2n gametes which formed Yunyan 77-2 and Yunyan 77-4 transferred 60% and 70% heterozygosity of the pa-rents respectively. 【Conclusion】The 2n gametes which form Yunyan 77-2 and Yunyan 77-4 all originate from the female parent GT1，and the formation pathway of 2n gametes is FDR.

Key words： rubber tree； triploid； 2n gamete； formation pathway； first division restitution（FDR）； second division restitution（SDR）

0 引言

【研究意義】三倍体可通过二倍体和四倍体杂交或未减数配子（2n配子）杂交获得（Ramsey and Schemske，1998；吴雪娟等，2016）。根据遗传效应不同，2n配子发生途径可分为第一次减数分裂核复原（First division restitution，FDR）和第二次减数分裂核复原（Second division restitution，SDR）两种，其中FDR途径可传递亲本70%～80%的杂合性，SDR途径可传递亲本30%～40%的杂合性（康向阳和王君，2010），传递亲本杂合性的差异决定了不同发生途径2n配子在多倍体育种中具有不同的应用价值。因此，研究橡胶树三倍体的2n配子来源及发生途径对利用其亲本开展多倍体育种具有重要意义。【前人研究进展】分子标记是2n配子来源及发生途径鉴定的常用手段之一，通过筛选亲本中的杂合性标记位点，对其2n配子中的等位基因配置进行比较分析，可快速确定2n配子的遗传组成（张正海和康向阳，2006）。Chen等（2008）应用4个SSR标记分析鉴定出柑橘异源三倍体来源于FDR途径产生的2n雌配子。Ferrante等（2010）通过多个柑橘二倍体亲本与四倍体品系杂交获得了四倍体子代，并应用6个SSR标记研究鉴定其2n配子的发生途径，结果发现不同亲本分别通过不同发生途径（FDR或SDR）产生杂合或纯合的2n配子。Xi等（2012）应用21个SSR标记分析鉴定出3株黑杨异源三倍体均来源于FDR途径产生的2n雌配子。Dong等（2014）、旻昱等（2017）研究表明，采用少量位于着丝粒附近的低重组率SSR分子标记可检测青杨杂种多倍体的遗传组成，也可鉴定出毛白杨杂种三倍体的2n雌配子来源及发生途径。Yao等（2016）应用25个SSR标记鉴定出通过SDR途径产生的2n雌配子是橡胶树GT1自然授粉子代三倍体的唯一来源。【本研究切入点】橡胶树云研77-2和云研77-4具有较母本GT1生长速度快、产量高、抗性强（敖硕昌等，1998）和高度不育的特性（李惠波，2006），经染色体计数确认为纯合三倍体，是世界上唯一大面积种植且应用于生产的多倍体橡胶树（李惠波等，2009）。由于橡胶树纯合三倍体的唯一来源途径是2n配子和n配子杂交，但目前尚无形成云研77-2和云研77-4的2n配子来源及发生途径的相关研究报道。【拟解决的关键问题】以三倍体橡胶树云研77-2和云研77-4及其亲本为试验材料，通过SSR分子标记鉴定形成其三倍体的2n配子来源及发生途径，分析2n配子传递亲本的杂合性，为解释云研77-2和云研77-4具有优良性状的原因及利用其亲本的2n配子杂交选育多倍体新品种提供参考。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

供试材料为三倍体橡胶树云研77-2、云研77-4及其母本GT1和父本PR107。云研77-2和云研77-4是从GT1×PR107双无性系自然授粉的杂交子代中通过苗期耐寒筛选获得（李惠波等，2009）。高效植物基因组DNA提取试剂盒（DP350）购自天根生化科技（北京）有限公司；Hi-Di去离子甲酰胺、POP-7 Polymer、GS-500LIZ分子量内标、毛细管电泳10×Buffer和2×Taq Plus PCR Master Mix购自Applied Biosystems公司。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 基因组DNA提取 称取云研77-2、云研77-4、母本GT1和父本PR107的嫩叶300 mg，参照高效植物基因组DNA提取试剂盒使用说明提取基因组DNA。

1. 2. 2 SSR引物筛选及合成 通过毛细管电泳检测，从30对在橡胶树中具有多态性位点的引物中，筛选出13对本研究对象中具有多态性的引物，其序列及文献来源见表1。引物5'端连接TAMRA、HEX、FAM或ROX荧光标记，并由北京睿博兴科生物技术有限公司合成。

1. 2. 3 PCR扩增 反应体系10.0 μL：DNA模板0.5 μL，Taq Plus PCR Master Mix 5.0 μL，10 μmol/L上游引物0.1 μL，10 μmol/L下游引物0.1 μL，无菌水补足10.0 μL。扩增程序：94 ℃预变性5 min；95 ℃ 30 s，50～60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，进行35个循环；72 ℃延伸10 min。PCR产物于4 ℃保存。

1. 2. 4 毛细管电泳检测和SSR分析 4种PCR产物（即连接TAMRA、HEX、FAM和ROX荧光标记）各0.3 μL、分子量内标0.5 μL和去离子甲酰胺9.5 μL混合后加入PCR板，95 ℃变性5 min，4 ℃冷却，于ABI-3730XL基因分析仪上检测。检测结果使用GeneMarker V2.20读取分析。

1. 2. 5 2n配子来源和发生途径鉴定 理论上，不考虑无效等位基因和等位基因丢失的情况，三倍体含有提供2n配子亲本的2个及以上等位基因。因此，当同一亲本所有的基因位点均与三倍体子代含有2个及以上相同等位基因时，可确定该亲本为三倍体的2n配子供体。不考虑同源重组的情况下，FDR途径产生的2n配子含有亲本的所有等位基因，SDR途径产生的2n配子含有亲本50%等位基因。因此，确定2n配子来源后，若三倍体在所有的基因位点均含有提供2n配子亲本的所有等位基因时，则2n配子发生为FDR途径，反之为SDR途径。如图1所示，在HSSR013位点，母本GT1等位基因为abc，父本PR107的等位基因为bb，云研77-4的等位基因为abbc，可判断2n配子来源于母本GT1，且云研77-4含有亲本GT1的所有等位基因，可判断2n配子发生途径为FDR。

1. 2. 6 2n配子传递亲本杂合性分析 在确定2n配子来源及发生途径后，可直接读取2n配子的基因型，计算2n配子传递亲本的杂合性（Rate of maternal heterozygosity，HR）。2n配子传递亲本的杂合性计算公式为：

HR（%）=nab/（nab+naa+nbb）×100

其中，n为2n配子数，ab表示杂合基因型2n配子，aa和bb表示纯合基因型2n配子（Xie et al.，2014）。

2 结果与分析

2. 1 基因组DNA提取结果

4个供试材料的基因组DNA浓度为68.55～335.15 ng/μL，OD260/OD280为2.007～2.119，其琼脂糖凝胶电泳检测结果（图2）表明，提取的基因组DNA质量较好，条带完整，可用于后续试验。

2. 2 SSR引物筛选结果

毛细管电泳检测结果表明，从30对引物中筛选出的13对引物在三倍体云研77-2和云研77-4中处于杂合状态且在其父母本中具有差异条带，筛出率为43.33%（表1）。利用13对引物对4个供试材料进行PCR扩增，共扩增出33条差异性条带，平均每对引物扩增出2.5个条带，每个位点的等位基因数为2～3个，其中6个位点有2个等位基因，7个位点有3个等位基因。

2. 3 2n配子来源鉴定结果

如表2所示，通过HB-1、HSSR012、EHB133和EHB177位点可判定形成云研77-2的2n配子来源于母本GT1，通过HB-1、HSSR013、EHB133和EHB177位点可判定形成云研77-4的2n配子来源于母本GT1，其余位点均无法明确判定，无位点可判定2n配子来源于父本PR107。因此，判定云研77-2和云研77-4的2n配子均来源于母本GT1。

2. 4 2n配子发生途径鉴定结果

如表2所示，从HSSR013、EHB034、EHB070、EHB087、EHB159、EHB065、unigenge17757和HESR-

055等8个位点可判定形成云研77-2的2n配子发生途径为FDR，从HSSR012和EHB133位点可判定形成云研77-2的2n配子发生途径为SDR，因此，形成云研77-2的2n配子发生途径为FDR的概率为80.00%。从HSSR006、HSSR013、EHB034、EHB070、EHB087、EHB159、EHB065和HESR055等8个位点可判定形成云研77-4的2n配子发生途径为FDR，HSSR012、EHB133和unigene17757等3个位点可判定形成云研77-4的2n配子发生途径为SDR。因此，形成云研77-4的2n配子發生途径为FDR的概率为72.73%。可见，形成云研77-2和云研77-4的2n配子发生途径均为FDR。

2. 5 2n配子傳递亲本杂合性分析结果

根据2n配子传递亲本杂合性的计算公式计算可得形成云研77-2和云研77-4的2n配子分别传递亲本60%和70%的杂合性（表3），传递亲本的杂合性均超过50%，进一步证实形成云研77-2和云研77-4的2n配子发生途径为FDR。

3 讨论

自1982年胡东琼等从橡胶树GT1的子代中分离出三倍体植株以来，从橡胶树GT1的子代中筛选出三倍体的报道越来越多。张源源（2013）从橡胶树GT1的自然授粉子代中检测出3株天然三倍体；Yao等（2016）从橡胶树GT1与17个候选亲本的自然授粉子代中检测出8株三倍体。本研究材料云研77-2和云研77-4也是从GT1×PR107双无性系自然授粉的杂交子代中筛选获得（敖硕昌等，1998；李惠波等，2009）。研究证实，橡胶树GT1可稳定产生2n雌配子（Yao et al.，2016；张源源等，2017），但无直接证据证明云研77-2和云研77-4的2n配子来自母本GT1。本研究结果表明，形成云研77-2和云研77-4的2n配子均来自母本GT1，且发生途径为FDR。这与Yao等（2016）应用SSR分子标记鉴定出2n雌配子是橡胶树GT1自然授粉子代三倍体的唯一来源，其发生途径为SDR的研究结论不同，说明橡胶树GT1可能通过FDR和SDR两种途径产生2n雌配子。

植物多倍体较二倍体除具有倍性优势外更具有杂合性优势（Bingham，1980）。FDR途径产生的2n配子可传递亲本70%～80%的杂合性（康向阳和王君，2010），其高效传递亲本杂合性的特点在育种中具有较高的利用价值（Xi et al.，2012）。前人研究表明，橡胶树GT1具有较强的抗寒性，尤其是成龄期茎干和茎基具有极强的抗寒能力，但橡胶树PR107的抗寒性较差，两者自然授粉的杂种子代三倍体云研77-2和云研77-4的抗寒性优于母本GT1和父本PR107，尤其是云研77-4的抗寒性极强（敖硕昌等，1998；李明谦，2005；李惠波，2006；高新生等，2008；刘世红等，2011）。本研究结果显示，形成云研77-2和云研77-4的2n配子分别传递母本GT1 60%和70%的杂合性。该结论可用于解释云研77-2和云研77-4，尤其是云研77-4具有较母本GT1生长速度快、产量高、抗性强（敖硕昌等，1998）和高度不育的特性（李惠波，2006）的原因，为利用橡胶树抗寒优良品种GT1为亲本选育多倍体新品种提供参考。

通过SSR等不同分子标记可有效分析基因位点的组成，进而鉴定出2n配子的发生途径。但如果分子标记检测位点处发生了同源重组，则通过该标记位点得出的等位基因配置无法准确代表整条染色体的遗传组成，导致2n配子发生途径判断失误（董春波，2015）。本研究结果显示，从大部分位点可判定形成云研77-2的2n雌配子发生途径为FDR，但有部分位点如HSSR012和EHB133在母本中具有多态性，其2n配子却表现为纯合，会导致2n雌配子发生途径误判为SDR途径，说明这2个位点在2n雌配子发生过程中发生了同源重组，且在形成云研77-2和云研77-4的2n雌配子中均表现为SDR途径。可见，这2个位点具有较高的同源重组发生频率，在今后的2n配子发生途径研究中应避免使用，以减少误判概率。

在植物群体遗传多样性研究中，足够的分子标记数量和样本数量是保证结果准确性的先决条件，数量过少可能导致检测到的变异偏低，影响结果的准确性（Sjogren and Wyoni，1994）。2n配子发生途径鉴定时，检测的基因位点数量越多，位点的多态性越高，因同源重组而导致误判的概率越小（董春波，2015），但橡胶树遗传背景狭窄（吴春太等，2009），分子标记的多态性较低，开发大量的分子标记具有一定的难度，且分子标记数量的增加会提高试验成本。针对这些问题，Done等（2014）采用少量位于着丝粒附近的低重组率的SSR分子标记位点来评估青杨杂种多倍体的遗传组成，旻昱等（2017）利用相同的方法鉴定出毛白杨杂种三倍体的2n雌配子发生途径。因此，开发低重组率的SSR分子标记是今后橡胶树分子标记研究的重要方向。

4 结论

形成云研77-2和云研77-4的2n配子均来源于母本GT1，且其发生途径均为FDR，分别传递亲本60%和70%的杂合性，解释了云研77-2和云研77-4具有优良性状原因，为利用优良亲本的天然2n配子杂交选育多倍体新品种提供参考。

参考文献：

安泽伟，赵彦宏，程汉，李维国，黄华孙. 2009. 橡胶树EST-SSR标记的开发与应用[J]. 遗传，31（3）：311-319. [An Z W，Zhao Y H，Cheng H，Li W G，Huang H S. 2009. Development and application of EST-SSR markers in Hevea brasiliensis Muell. Arg.[J]. Hereditas，31（3）：311-319.]

敖硕昌，和丽岗，肖桂秀，陈建白，何长贵. 1998. 橡胶树高产抗寒材料云研77-2、云研77-4的选育[J]. 云南热作科技，21（2）：3-8. [Ao S C，He L G，Xiao G X，Chen J B，He C G. 1998. Selection of rubber cold fast and high-yield strains，Yunyan77-2 and Yunyan77-4[J]. Journal of Yunnan Tropical Crops Science & Technology，21（2）：3-8.]

董春波. 2015. 杨树同源重组特点及2n配子杂合性分析[D]. 北京：北京林业大学. [Dong C B. 2015. Analysis of homologous recombination characteristics and 2n gamete heterozygosity in Populus[D]. Beijing：Beijing Forestry University.]

高新生，李维国，黄华孙，张伟算. 2008. 海南中西部橡胶主栽品种寒害适应性调查[J]. 广东农业科学，（11）：14-16.[Gao X S，Li W G，Huang H S，Zhang W S. 2008. Investigation on cold resistance adaptability of major rubber clones in midwest Hainan[J]. Guangdong Agricultural Sciences，（11）：14-16.]

胡东琼，袁梁茂，吴云通，刘北洋，林盛，黎永造，黎德舜. 1982. 橡胶树自然多倍体的选择与分离的研究初报[J]. 热带作物研究，（3）：1-5. [Hu D Q，Yuan L M，Wu Y T，Liu B Y，Lin S，Li Y Z，Li D S. 1982. Selection and se-paration of natural polyploid in rubber tree[J]. Chinese Journal of Tropical Agriculture，（3）：1-5.]

康向陽，王君. 2010. 杨树多倍体诱导技术研究[M]. 北京：科学出版社. [Kang X Y，Wang J. 2010. Polyploid Induction Technique of Poplar[M]. Beijing：Science Press.]

李惠波，周堂英，宁连云，李国华. 2009. 橡胶树新品种云研77-2和云研77-4的细胞学鉴定及育种过程[J]. 热带亚热带植物学报，17（6）：602-605. [Li H B，Zhou T Y，Ning L Y，Li G H. 2009. Cytological identification and bree-ding course of Hevea Yunyan77-2 and Yunyan77-4[J]. Journal of Tropical and Subtropical Botany，17（6）：602-605.]

李惠波. 2006. 经染色体观察发现橡胶树新品种云研77-2、77-4为纯合三倍体[J]. 热带农业科技，29（3）：40. [Li H B. 2006. New varieties of rubber trees Yunyan 77-2，77-4 were identified as homozygous triploid by chromosome counting[J]. Tropical Agricultural Science & Technology，29（3）：40.]

李明谦. 2005. 橡胶树新品种云研77-4、云研77-2的抗寒性生理鉴定[J]. 热带农业科技，28（2）：4-6. [ Li M Q. 2005. Cold-resistance physiological appraise to rubber new varie-ties of Yunyan77-4 and Yunyan77-2[J]. Tropical Agricultural Science & Technology，28（2）：4-6.]

刘世红，田耀华，魏丽萍，周会平. 2011. 西双版纳30个橡胶树品种的低温半致死温度及低温对抗氧化系统的影响[J]. 植物生理学报，47（5）：505-511. [Liu S H，Tian Y H，Wei L P，Zhou H P. 2011. Semi-lethal low temperatures and impact of low temperature on antioxidant system of 30 varieties of rubber trees in Xishuangbanna[J]. Plant Phy-siology Journal，47（5）：505-511.]

旻昱，康宁，索玉静，田菊，康向阳. 2017. 毛白杨杂种三倍体的2n雌配子发生途径鉴定[J]. 北京林业大学学报，39（5）：17-24. [Min Y，Kang N，Suo Y J，Tian J，Kang X Y. 2017. Origin identification of 2n female gamete of Populus tomentosa triploid hybrids[J]. Journal of Beijing Fore-stry University，39（5）：17-24.]

吴春太，李维国，高新生，张晓飞，张伟算. 2009. 我国橡胶树育种目标及发展策略探讨[J]. 广西农业科学，40（12）：1633-1636. [Wu C T，Li W G，Gao X S，Zhang X F，Zhang W S. 2009. Rubber tree breeding：Objectives and development strategies in China[J]. Guangxi Agricultural Sciences，40（12）：1633-1636.]

吴雪娟，杨利平，陈敏. 2016. 条叶百合的离体多倍体诱导[J]. 贵州农业科学，44（8）：84-88. [Wu X J，Yang L P，Chen M. 2016. In vitro polyploid induction of Lilium ca-llosum[J]. Guizhou Agricultural Sciences，44（8）：84-88.]

张源源. 2013. 橡胶树座果规律及三倍体诱导研究[D]. 北京：北京林业大学. [Zhang Y Y. 2013. Disciplines of fruit-set success and triploid induction of Hevea brasiliensis[D]. Beijing：Beijing Forestry University.]

张源源，黄肖，李维国. 2017. 温度对橡胶树GT1的2n雌配子发生频率的影响[J]. 西南农业学报，30（12）：2634-2638. [Zhang Y Y，Huang X，Li W G. 2017. Effect of temperature on frequency of 2n female gametes of diploid clone in rubber tree（Hevea brasiliensis Muell. Arg.）[J]. Southwest China Journal of Agricultural Sciences，30（12）：2634-2638.]

张正海，康向阳. 2006. 植物2n配子发生及其遗传标记研究进展[J]. 遗传，28（1）：105-109. [Zhang Z H，Kang X Y. 2006. Advances in researches on genetic markers of 2n gametes[J]. Hereditas，28（1）：105-109.]

An Z W，Li Y C，Zhai Q L，Xie L L，Zhao Y H，Huang H S. 2013. Development and characterization of novel expressed sequence tag-derived simple sequence repeat markers in Hevea brasiliensis（rubber tree）[J]. Genetics and Molecular Research，12（4）：5905-5910.

Bingham E T. 1980. Maximizing heterozygosity in autopolyploids[M]//Lewis. Polyploidy： Biological Relevance. New York：Plenum Press： 471-491.

Chen C，Lyon M T，O'Malley D，Federici C T，Gmitter J，Grosser J W，Chaparro J X，Roose M L，Gmitter F G. 2008. Origin and frequency of 2n gametes in Citrus sinensis×Poncirus trifoliata and their reciprocal crosses[J]. Plant Science，174（1）：1-8.

Dong C B，Suo Y J，Kang X Y. 2014. Assessment of the genetic composition of triploid hybrid Populus using SSR markers with low recombination frequencies[J]. Canadian Journal of Forest Research，44（7）：692-699.

Ferrante S P，Lucretti S，Reale S，Patrizio A D，Abbate L，Tusa N，Scarano M T. 2010. Assessment of the origin of new citrus tetraploid hybrids（2n=4x） by means of SSR markers and PCR based dosage effects[J]. Euphytica，173（2）：223-233.

Li D J，Deng Z，Qin B，Liu X H，Men Z H. 2012. De novo assembly and characterization of bark transcriptome using Illumina sequencing and development of EST-SSR mar-kers in rubber tree（Hevea brasiliensis Muell. Arg.）[J]. BMC Genomics，13：192.

Ramsey J，Schemske W D. 1998. Pathways，mechanisms，and rates of polyploid formation in flowering plants[J]. Annual Review of Ecology and Systematics，29（1）：467-501.

Sjogren P，Wyoni P I. 1994. Conservation genetics and detection of rare alleles in finite populations[J]. Conservation Biology，8（1）： 267-270.

Souza M L，Mantello C C，Santos O M，Goncalves P S，Souza A P. 2009. Microsatellites from rubber tree（Hevea brasi-liensis） for genetic diversity analysis and cross-amplification in six Hevea wild species[J]. Conservation Genet Resour，1（1）：75-79.

Triwitayakorn K，Chatkulkawin P，Kanjanawattanawong S，Sraphet S，Yoocha T，Sangsrahru D，Chanprasert J，Ngamphiw C，Jomchai N，therawattanasuk K，Tangphatsornruang S. 2011. Transcriptome sequencing of Hevea brasi-liensis for development microsatellite markers and construction of a genetic linkage map[J]. DNA Research，18（6）：471-482.

Xi X，Li D，Xu W，Guo L Q，Zhang J F，Li B. 2012. 2n egg formation in Populus×euramericana（Dode） Guinier[J]. Tree Genetics & Genomes，8（6）：1237-1245.

Xie K D，Wang X P，Biswas M K，Liang W J，Xu Q，Grosser J W，Guo W W. 2014. 2n megagametophyte formed via SDR contributes to tetraploidization in polyembryonic ‘Nadorcoot tangor crossed by citrus allotetraploids[J]. Plant Cell Reports，33（10）：1641-1650.

Yao P Q，Li G H，Long Q Y，He L G，Kang X Y. 2016. Male parent identification of triploid rubber trees（Hevea brasi-liensis） and the mechanism of 2n gametes formation[J]. Forests，7（12）：301.

（責任编辑 陈 燕）