肝门部胆管癌组织中PIWIL4蛋白表达及其临床意义

刘起胜龚宗跃邹 艳徐筱红刘 怀曹寅生

肝门部胆管癌是发病率最高的一种胆管癌，但其发病原因及机制仍未完全明确。有研究[1]指出，在肝门部胆管癌的发生、发展过程中，PIWI蛋白发挥着重要的调控作用。而PIWIL4属PIWI家族中的一员，其表达量与卵巢癌、肝癌等肿瘤的发生有着密切的关系，但对于其在肝门部胆管癌方面的相关研究报道极为少见。鉴于此，本研究拟采用SP免疫组化法检测PIWIL4蛋白的表达情况，并分析其与临床病理特征的相关性。

1　资料与方法

1.1一般资料 收集2001年1月-2017年3月期间湖南中医药大学第一附属医院经手术切除的40例肝门部胆管癌癌组织及癌旁组织标本，其男23例，女17例,年龄24～77岁，平均年龄（49.63±6.50）岁。所有标本收集后均即刻进行液氮速冻处理并存于-80 ℃冰箱中备用。

1.2实验方法 将40例肝门部胆管癌癌组织及癌旁组织制片，按照SP免疫组化试剂盒（购于上海研卉公司）说明书完成SP免疫组化染色操作，以检测组织中PIWIL4蛋白的阳性表达状况。每张切片在BX43-12P02显微镜（奥林巴斯）下随机选取5个高倍镜视野，每视野计数≥100个细胞。若切片经苏木素复染后，在显微镜下见胞质呈棕黄色、褐黄色颗粒状则为PIWIL4阳性细胞。PIWIL4蛋白阳性表达主要根据细胞染色深浅程度和PIWIL4阳性细胞百分比来综合判断，①染色程度：若染色为深褐色则3分，棕黄色则2分，淡黄则为1分，未染色的为0分。②PIWIL4阳性细胞百分比大于70%为3分，在36%～70%之间为2分，6%～35%之间则为1分，小于6%为0分。若①×②得分在0～2分之间则为阴性（-），3分以上的判为阳性（+）。

1.3统计学分析 选用SPSS23.0软件，计数数据以%表示，用卡方检验；计量数据以（x± s）表示，用t检验。P＜0.05代表差异存在统计学意义。

2　结 果

2.1PIWIL4蛋白在肝门胆管癌组织及癌旁组织中的表达情况 PIWIL4蛋白在肝门部胆管癌组织中的阳性表达率60.0%（24/40），在癌旁组织中为32.50%（13/40）。两者比较差异有统计学意义（χ2=6.084，P=0.014）。

2.2肝门胆管癌组织中PIWIL4蛋白表达与相关病理特征的相关性 肝门部胆管癌组织中PIWIL4蛋白阳性表达与细胞分化程度、TNM分期、淋巴结是否转移差异有统计学意义（P＜0.05），但与肿瘤大小、病理类型差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1　肝门胆管癌组织中PIWIL4蛋白表达与相关病理特征的相关性

3　讨 论

近年越来越多的研究发现[2～3]，PIWI家族中的PIWIL4基因与恶性肿瘤的发生、发展有密切的联系，其能够激活IL6/STAT3信号通路，靶向调控凋亡抑制蛋白Bcl-xl，促使细胞增殖与抑制凋亡，参与癌症的发生[2～3]。目前对于PIWIL4基因的研究主要集中在乳腺癌、卵巢癌、舌鳞癌研究中[4]，而对于其在肝门胆管癌组织中的表达状况及相关作用的研究报道则较为少见。

本研究为进一步明确PIWIL4蛋白表达在肝门胆管癌病变中的作用，收集40例肝门胆管癌组织癌患者的癌病灶组织及癌旁组织进行免疫组化和RT-PCR法检测，结果发现，肝门部胆管癌组织中PIWIL4蛋白阳性表达率为60.0%，明显高于癌旁组织的32.50%，与袁媛等[5]的研究报道基本一致，提示PIWIL4蛋白在肝门胆管癌组织中呈高表达，其原因有可能是PIWIL4基因具有癌基因的活性，参与了肝门胆管癌的发生、发展。此外，本研究结果还发现肝门部胆管癌组织中PIWIL4蛋白表达水平均与TNM分期、淋巴结是否转移、细胞分化程度差异有统计学意义（P＜0.05），但与肿瘤大小、病理类型差异无统计学意义（P＞0.05）。在实际临床中，癌灶分化程度、淋巴结转移、TNM分期三种临床病理因素与肝门部胆管癌的恶性度具有密切的联系，故从上述结果来看PIWIL4蛋白表达水平会随着肝门部胆管癌的恶性度增加而升高。

总之，PIWIL4基因在肝门部胆管癌组织中呈高表达，且PIWIL4蛋白表达上调在肝门部胆管癌中的发生、发展及预后中发挥着重要作用，可将其作为判断肝门部胆管癌病情进展的主要指标之一。