某院多重耐药鲍曼不动杆菌氨基糖苷类耐药基因及耐药性分析

刘丽娟，姜梅杰，张志军，任玉国

(1.莱芜市人民医院检验科,山东莱芜 271100；2.泰安市中心医院检验科，山东泰安 271000)

多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)已是院内感染常见病原菌之一。全国2013、2014和2015年不发酵糖革兰阴性杆菌中，临床分离的鲍曼不动杆菌一直位居第1位，对亚胺培南的耐药率一直都在60%以上[1-3]。根据莱芜市人民医院耐药监测结果显示,2013、2014和2015年不发酵糖革兰阴性杆菌中，临床分离的鲍曼不动杆菌一直位居第2位，但在2016年上升为第1位，并且对亚胺培南的耐药率增高为78.42%。为寻找鲍曼不动杆菌多重耐药原因，本研究对莱芜市人民医院2013-2016年临床分离的51株MDRAB的标本分布及氨基糖苷类耐药基因的流行情况进行了分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1菌株来源 收集2013-2016年莱芜市人民医院住院患者标本中分离出的51株MDRAB，其中2013年9株(编号1～9)、2014年19株(编号10～28)、2015年11株(编号29～39)、2016年12株(编号40～51)。

1.2方法

1.2.1细菌鉴定及药敏试验 采用BD公司hoenixTM100 NMIC/ID-4凤凰复合板鉴定菌种及进行药敏试验，同时用纸片扩散法检测头孢哌酮/舒巴坦和米诺环素的敏感性。M-H琼脂和药敏纸片均为英国Oxoid产品。MDRAB的判断标准根据MAGIORAKOS等[4]报道的标准进行判断。

1.2.2耐药基因检测 采用PCR法，氨基糖苷类耐药基因引物参照文献[5-6]。

1.2.3DNA测序 随机取部分阳性基因进行测序，PCR产物送上海桑尼生物科技有限公司进行测序，测序结果在GenBank网上查询。

2 结 果

2.1抗菌药物敏感试验结果 51株MDRAB对头孢他啶、头孢噻肟、左氧氟沙星、环丙沙星、头孢吡肟、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、复方磺胺甲噁唑和四环素耐药率均为100.0%(51/51)，对亚胺培南和美罗培南的耐药率均为94.1%(48/51)，对阿米卡星和庆大霉素的耐药率分别为84.3%(43/51)和90.2%(46/51),对头孢哌酮/舒巴坦和米诺环素的耐药率分别为62.7%(32/51)和23.5%(12/51),对多黏菌素B都敏感，敏感率100.0(51/51)。51株MDRAB对其余6种抗菌药物的药敏情况见表1。

表1 51株MDRAB对其余6种抗菌药物的药敏情况

2.2氨基糖苷类耐药基因及测序结果 51株MDRAB中，43株(84.3%)armA基因阳性(图1A)，45株(88.2%)ant(3″)-Ⅰ基因阳性(图1B)，29株(56.9%)aac(3)-Ⅰ基因阳性(图1C)。随机取3株armA阳性基因PCR扩增产物进行测序，结果为armA基因。随机取3株ant(3″)-Ⅰ阳性基因PCR扩增产物进行测序，结果为ant(3″)-I基因。随机取3株aac(3)-Ⅰ阳性基因PCR扩增产物进行测序，结果为aac(3)-Ⅰ基因。其中27株(52.9%)同时携带armA、ant(3″)-Ⅰ和aac(3)-Ⅰ基因,15株(29.4%)同时携带armA和ant(3″)-Ⅰ基因，2株(3.9%)同时携带ant(3″)-Ⅰ和aac(3)-Ⅰ基因,1株(2.0%)携带armA基因,1株(2.0%)携带ant(3″)-Ⅰ基因,5株(9.8%)未检出氨基糖甙类耐药基因armA、rmtB 、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、aph(3′)-Ⅵ、ant(3″)-Ⅰ和ant(2″)-Ⅰ。2013-2016年51株MDRAB氨基糖甙类阳性基因的分布情况见表2。

A:armA基因；B:ant(3″)-Ⅰ基因;C:aac(3)-Ⅰ基因

图1氨基糖苷类耐药基因PCR产物电泳图

表2 2013-2016年51株MDRAB氨基糖甙类阳性基因的分布情况

+：阳性；-：阴性

2.3MDRAB标本分布 2013-2016年收集的51株MDRAB标本中，34株来自重症监护室(ICU)患者，占66.7%；10株来自神经外科病房的患者，占19.6%；7株来自神经内科病房的患者，占13.7%。其中，50株MDRAB分离自痰液标本，占98.0%；1株分离自尿液标本，占2.0%。

3 讨 论

已有研究报道，鲍曼不动杆菌是院内感染的重要病原菌之一[1-3]。鲍曼不动杆菌标本主要来自痰液,主要分布在ICU[7-8]。MDRAB标本也主要来自痰液,主要分布在ICU[9]。本研究2013-2016年临床分离的51株MDRAB中，50株分离自痰液标本,34株来自ICU,说明MDRAB主要引起呼吸道感染并且主要分布在ICU。

已有研究报道，16S rRNA甲基化酶可引起氨基糖苷类抗菌药物耐药[10-11]。本研究显示，51株MDRAB中有27株同时携带3种氨基糖苷类耐药基因[(armA+ant(3″)-Ⅰ+aac(3)-Ⅰ)],15株同时携带2种氨基糖苷类耐药基因[(armA+ant(3″)-Ⅰ)]，以及1株携带16S rRNA甲基化酶基因armA的MDRAB对阿米卡星和庆大霉素都耐药；5株未检出氨基糖苷类耐药基因的MDRAB对阿米卡星和庆大霉素都敏感，说明16S rRNA甲基化酶基因armA可引起阿米卡星和庆大霉素耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药与携带氨基糖苷类耐药基因密切相关。笔者前期已分析2013年9月26日至2013年12月8日滕州市中心医院分离的MDRAB主要携带armA、ant(3″)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅰb基因[12]。2013年和2014年莱芜市人民医院流行的MDRAB主要为同时含有armA、ant(3″)-Ⅰ、aac(3)-Ⅰ基因的菌株，2015年以未检出氨基糖苷类耐药基因和同时含有armA、ant(3″)-Ⅰ、aac(3)-Ⅰ基因的菌株为MDRAB的主要流行株,2016年以同时含有armA、ant(3″)-Ⅰ基因的菌株为MDRAB的主要流行株。不同医院或同一医院的不同时间段氨基糖苷类耐药基因流行情况也不完全相同。

本研究的51株MDRAB对头孢他啶、头孢噻肟、左氧氟沙星、环丙沙星、头孢吡肟、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、复方磺胺甲噁唑和四环素都耐药，48株(94.1%)对亚胺培南和美罗培南耐药，对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率为62.7%、中介率为35.3%、敏感率为2.0%。对米诺环素耐药率为23.5%、中介率为23.5%、敏感率为52.9%，对多黏菌素B都敏感。因此，ICU患者因鲍

曼不动杆菌引起感染时，临床医师必须根据药敏试验结果选用抗菌药物。

综上所述，该院临床连续4年分离的MDRAB氨基基糖苷类耐药基因携带率很高，标本主要来自ICU患者的呼吸道。医院应进一步加强ICU的消毒隔离措施，防止院内MDRAB的爆发流行。

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