正交法优化槐米中芦丁的提取工艺

马春梅

（徐州生物工程职业技术学院，江苏 徐州 221006）

槐米来源于豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾，具有止血、凉血及泻火清肝等功效。研究表明，槐米中主要有效成分为黄酮类化合物芦丁，含量可高达12%～20%[1]。现代药理试验表明，芦丁具有抗炎、抗菌、抗过敏、调节毛细管壁的渗透和防止血管破解等作用[2]，临床上可用于高血压、视网膜出血及脑出血、紫癜和急性出血性肾炎的治疗。近年来，随着人们生活方式的改变，脑血管疾病的发病率呈上升趋势，并且死亡率也居各种疾病之首，因此对预防和治疗心脑血管疾病的药品开发显得尤为重要。芦丁作为治疗心脑血管疾病的常用药物，原料来源广泛，因此探索简单、提取率高的芦丁提取方法十分必要。本文在研究文献资料的基础上，采用正交实验探索芦丁碱提取酸沉淀法的最佳工艺条件[3]。

1 仪器和试药

万分之一电子天平(上海精密科学仪器有限公司）；WF111710-849万能粉碎机（江阴市万通药化机械设备有限公司）；电炉（无锡市伊诺电热仪表）。

槐米（徐州北京同仁堂药店）；经鉴定为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾；芦丁对照品（中国药品生物检定100080-11426）；三氯化铝、乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠等均为分析纯。

2 实验方法

2.1 提取工艺

精密称取槐米20g（细粉、粗粉），加入适量蒸馏水100、200、300mL，用石棉网在电炉上加热至微沸，取下烧杯稍放冷，在搅拌下缓缓加入饱和石灰水调pH至8～9，加入适量硼砂[4]，保持微沸状态 20、30、40min，趁热抽滤，提取1、2、3次，合并提取液，用浓盐酸调pH至4～5，静置析晶12h，抽滤，结晶用少量蒸馏水洗涤3次，抽干，得芦丁粗品。将粗品转入烧杯中，加入适量蒸馏水加热至全部溶解，趁热抽滤，滤液放冷静置8h析晶，抽滤，滤饼在60℃下干燥，得精制芦丁，用电子天平称量，计算收率。粉碎度（A）、溶剂用量（B）、提取次数（C）及提取时间（D）为考查因素[5]，并且每个因素各取3个水平。在相同条件下，采用L9（34）正交试验设计，以芦丁的含量和精制芦丁的提取率作为评价指标，因素水平见表1。

表1 芦丁提取工艺的因素水平表

2.2 芦丁含量的测定

2.2.1 样品的准备

将上述操作得到的粗品置于60℃的烘箱中干燥8h后再移至干燥器中，放置1h，得芦丁粗品。取上述提取的芦丁粗品，按1∶200加蒸馏水煮沸至完全溶解，稍放冷后抽滤、冷却、析晶、抽滤后，沉淀物在60℃下干燥8h，再移至干燥器中，放置1h后称定质量。

2.2.2 对照品溶液的制备

芦丁对照品经干燥恒重后，精密称取25.7mg，置于100mL的容量瓶中，加适量的75%乙醇，用超声仪超声2min使其全部溶解，再加70%乙醇定容至刻度，摇匀，制备为待用的芦丁对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备

精密称取各提取物样品约60mg，并置于25mL的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.4 测定波长的确定

分别量取适量的芦丁供试品溶液和芦丁对照品溶液，按2.2.5中标准曲线的制备方法进行显色，并置于350～550nm的波长间扫描，根据结果分析，两种溶液在500nm波长处均有最大吸收，因此选定测定波长为500nm。

2.2.5 标准曲线的制备

用芦丁标准品配制质量浓度为0.25mg／mL的芦丁乙醇溶液，再分别吸取芦丁的乙醇溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL于25mL的容量瓶中，各加水3.0mL,加5%亚硝酸钠溶液1mL，混匀后，放置6min，加10%的硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10mL，再加水至刻度，摇匀后，放置15min，按照紫外-可见分光光度法，以第1管为空白，在波长500nm处测定其吸光度。以芦丁对照品的质量浓度作为横坐标，吸光度（A）为纵坐标绘制标准曲线，测定结果见表2及图1。

表2 芦丁标准曲线的数据

图1 芦丁的标准曲线

以上结果表明，芦丁的标准曲线方程为Y=12.09X-0.0006，R2=0.9993， 说 明 芦丁的 浓 度 在 0.01～0.06mg/mL的范围内，线性关系良好。

2.2.6 样品测定

取所得的9个样品，按照2.2.5项下的方法制备供试液。精密量取3mL置于25mL容量瓶中，按照以上方法显色，应用紫外-可见分光光度法测定吸光度，并计算芦丁的含量，结果见表3，方差见表4。

3 结果与讨论

本试验中以槐米芦丁的含量及得率为考查指标，由正交试验结果及数据分析和正交实验方差分析表分析可知，粉碎度、提取次数、溶剂用量对提取结果较为显著，提取时间对提取结果影响较小。槐米中芦丁的最佳提取工艺条件为：药材粉碎为粗粉，加入20倍量实验用水，提取2次，每次提取20min。此法操作简单，溶剂采用实验用水，工业化生产成本较低，且对环境无污染。

表3 L9（34）正交试验结果及数据分析

表4 正交实验方差分析表

本试验中芦丁的提取方法选取的是碱溶酸沉法，此法是利用芦丁结构中含有酚羟基，因此显酸性，能与碱成盐而溶于水，加酸后能使其析出的原理，再经过重结晶得到纯度高的芦丁。此法虽然多年来一直被视为比较理想的方法，但因为提取过程中需要加热，伴有水解和产率较低等问题。在操作过程要注意酸碱度的控制，碱性太强会引起芦丁的内酯结构开环，酸性太强会导致副产物增加和产率下降。

[1]冯启蒙，徐聪.槐米中芦丁纯化工艺研究[J].价值工程，2012，7（19）:307-308.

[2]童婧，郭晓荣，房文亮,等.芦丁提取工艺研究[J].中外医疗，2011，26:41-42.

[3]姚倩，郭晓强，宋芹,等.槐米中芦丁提取工艺的比较研究[J].成都大学报，2013（4）:332-334.

[4]涂瑶生，施之琪.槐米中芦丁提取纯化工艺研究[J].海峡药学，2010,22（1）:49-51.

[5]赵东维，包木太，张吉祥,等.正交试验优选槐米中黄酮的超声波提取工艺[J].青岛科技大学学报，2011，32（6）:630-634.