急性淋巴细胞白血病患儿血浆miR150、miR155、miR233水平变化及其意义

何旭，杨昆，胡银山，徐孙秋，马春蓉

(1川北医学院第二临床学院，四川南充637000；2南充市中心医院)

急性淋巴细胞白血病(ALL)是以淋巴母细胞增生失调以及分化异常引起大量非成熟白细胞形成为特征的血液系统恶性肿瘤，约占急性白血病的70%以上，是儿童白血病的常见类型[1,2]。随医疗技术的快速发展，急性淋巴细胞白血病治愈率超过80%，显著提高了患儿的生命质量[3]。长期化疗给患儿肝肾功能、血液及神经系统等带来严重的不良反应，患儿病死率较高[4]。从分子生物学角度探讨急性淋巴细胞白血病发病机制，可为疾病的诊断、治疗提供重要参考价值。微小RNA(miRNA)是新型非编码小分子RNA，通过互补配对的方式特异性结合靶基因序列而介导细胞的增殖、分化等病理生理过程，miRNA还具有抑癌或者促癌作用，与多种恶性肿瘤的发病过程密切相关[5,6]。miR150、miR155、miR233属于miRNA家族，已有研究[7]表明其参与了恶性肿瘤的发生发展过程。目前关于miR150、miR155、miR233在急性淋巴细胞白血病发生、发展中的作用相关报道较少。2015年3月～2018年3月，我们观察了118例ALL患儿血浆miR150、miR155、miR233的表达水平变化，并探讨其临床意义。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2015年3月～2018年3月我院血液科收治的118例急性淋巴细胞白血病患儿为观察组。纳入标准：①符合《儿童急性淋巴细胞性白血病诊疗建议》(第4次修订草案)中关于ALL诊断标准[8]；②年龄≤14岁。排除标准：①T细胞、B细胞杂合ALL患儿；②合并有中枢神经系统白血病患儿；③合并其他可能影响本研究结果的疾病。根据疾病状态将观察组患儿分为初诊者、缓解者、复发者。初诊者32例，其中男18例，女14例；年龄4～13(9.2±0.9)岁；病理分型为T淋巴细胞白血病8例，B淋巴细胞白血病24例；危险度分型为低危型16例，中危型10例，高危型6例。缓解者46例，其中男26例，女20例；年龄3～14(8.9±1.2)岁；病理分型为T淋巴细胞白血病16例，B淋巴细胞白血病30例；危险度分型为低危型22例，中危型18例，高危型6例。复发者40例，其中男22例，女18例；年龄3～13(9.3±1.0)岁；病理分型为T淋巴细胞白血病18例，B淋巴细胞白血病22例；危险度分型为低危型20例，中危型12例，高危型8例。三者性别、年龄比较具有可比性(P均>0.05)。

随机选取30例健康体检儿童为对照组，其中男17例，女13例；年龄5～14(9.8±1.1)岁。观察组、对照组患儿性别、年龄、病理分型及危险度分型比较，P均>0.05，具有可比性。本研究获得医院伦理委员会的批准，研究对象家属在知情同意书上签字。

1.2 血浆miR150、miR155、miR233检测方法 采用qRT-PCR法检测各组血浆miR150、miR155、miR233。抽取两组儿童清晨空腹外周静脉血5 mL，分离血浆，按照RNA提取试剂盒(海吉玛制药技术有限公司提供)上的说明提取总RNA，按照逆转录试剂盒(美国Life Technologies公司提供)上的说明进行RNA的反转录。用Real-Time PCR分析仪(美国Life Technologies公司提供)行qRT-PCR，所有操作均严格按照使用说明书进行。反应体系为20 μL，包括2×All-in-One qPCR Mix 10 μL，Universal Adaptor PCR Primer 2 μL，All-in-One miRNA qPCR Primer 2 μL，cDNA 2 μL，ddH2O 4 μL。反应条件：95 ℃ 10 s预变性，95 ℃ 3 s变性，80 ℃ 20 s退火，72 ℃ 20 s延伸，40个循环。内参为GAPDH，以2-△△Ct表示miR150、miR155、miR233的相对表达量。

2 结果

两组儿童血浆miR150、miR155、miR233相对表达量见表1。与对照组比较，观察组血浆miR150、miR233水平降低，miR155表达升高(P均<0.05)。与对照组比较，初诊者、复发者血浆miR150、miR233水平降低，miR155水平升高(P均<0.05)；与缓解者比较，初诊者、复发者血浆miR150、miR233水平降低，miR155水平升高(P均<0.05)。缓解者血浆miR150、miR155、miR233水平与对照组比较，P均>0.05。

表1 两组儿童血浆miR150、miR155、miR233相对表达量比较

注：与对照组比较，※P<0.05；与缓解者比较，*P<0.05 。

初诊ALL患儿血浆miR150、miR155、miR233相对表达量与ALL临床病理参数的关系见表2。不同性别、年龄及病理分型组患儿血浆miR150、miR155、miR233表达水平比较，P均>0.05；不同危险度分型患儿血浆miR150、miR155、miR233表达水平比较，P均<0.05，危险度分型越高，患儿血浆miR150、miR233表达水平越低，miR155表达水平越高。

表2 初诊ALL患儿血浆miR150、miR155、miR233相对表达量与ALL临床病理参数的关系

3 讨论

ALL发病过程中癌基因激活以及抑癌基因失活是引起细胞发生癌变的病理学基础。miRNA是由内源基因编码的非编码单链RNA分子，长度为19～25个核苷酸，它在人类病理生理过程中发挥重要调控作用，通过对调节信号分子而参与信号激活、细胞的增殖、分化、死亡等[9,10]。已有研究[11,12]表明，miRNA参与了多种恶性肿瘤的发生发展过程，现已成为临床辅助疾病诊断、治疗及评估预后的重要标志物。

miR150是miRNA家族成员之一，通过对靶基因进行调控而导致下游基因异常表达，引起免疫系统和造血系统紊乱，最终引起恶性肿瘤的发生[13]。研究[7]显示，miR150在NK/T细胞淋巴瘤以及慢性粒细胞性白血病等恶性肿瘤中呈低水平表达，而在骨肉瘤、胃癌、慢性淋巴细胞性白血病等肿瘤中呈高水平表达。可见，不同类型恶性肿瘤中miR150作用不同。miR155是已知的致癌因子，通过在造血系统以及免疫系统等恶性疾病中呈高表达水平而发挥致癌作用[14]。Faraoni 等[15]对急性髓性血病患者研究发现，患者血浆miR155表达明显升高，可作用评估患者预后的重要指标。miR233在造血系统分化过程中通过表达上调而发挥重要生理功能，其表达异常则可引发血液系统恶性疾病。Han等[16]研究发现，miR233表达异常与儿童ALL预后密切相关，在初诊期以及复发期患儿miR233表达下调，而在缓解期患儿中表达水平升高。

目前多数研究主要通过采集患者肿瘤组织或者骨髓的方式检测miRNA，创伤较大，本研究观察了急性淋巴细胞白血病患儿血浆中3种miRNA表达变化并探讨其临床意义。本研究结果显示，观察组患儿血浆miR150、miR233表达水平低于对照组，miRNA155表达水平高于对照组，提示血浆miR150、miR155、miR233异常表达可能参与了ALL的发病过程。进一步分析不同临床病理参数的ALL患儿血浆miR150、miR155、miR233表达水平的差异，结果显示初诊、复发的患儿血浆中miR150、miR233表达下调，miR155表达上调，提示miR150和miR233可能发挥了抑癌基因的作用，而miR155发挥了促癌基因的作用。初诊者与复发者、缓解者与对照组之间血浆miR150、miR155、miR233表达水平无差异。表明血浆miR150、miR155、miR233水平可反映ALL患儿不同的疾病状态。此外，结果发现，血浆miR150、miR155、miR233表达水平与初诊患儿的性别、年龄、病理分型与无关，而与危险度分型密切相关，病情危险程度越大，miR150、miR233表达水平越低，miR155表达水平越高，提示miR150、miR155、miR233可作为临床评估急性淋巴细胞白血病危险程度和预后，从而为指导临床制定个体化治疗方案提供参考。

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