蒙药肋柱花的质量标准研究△

巴根那 包明兰* 王秀梅 乌云嘎 奥乌力吉，2 王秀兰，2

(1.内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000； 2.内蒙古蒙医药工程技术研究院，内蒙古 通辽 028000; 3.内蒙古民族大学蒙医药学院2015级硕士研究生,内蒙古 通辽 028000)

肋柱花蒙药肋柱花是龙胆科植物肋柱花Lomatogonium carinthia- cum(Wulf)Reichb.的干燥全草，是蒙医常用药及特色药材，蒙古名音译为哈比日根-地格达，亦称特木尔-地格达。按蒙医药理论，肋柱花具有清热、健胃、愈伤等功效；用于温热、流感、伤寒、中暑头痛、肝胆热、黄疸、伤热等病症的治疗[1-2]，也是蒙医治疗肝胆疾病的主要传统药物，临床疗效显著。药理研究表明，肋柱花含有的口山酮类化合物、獐芽菜苦苷、木犀草素、齐墩果酸等成分均有不同程度的利胆、保肝活性[3]，可在一定程度上揭示蒙药肋柱花用于治疗肝胆疾病的物质基础。为了确保药材质量，本文采用薄层色谱法对肋柱花中獐牙菜苦苷和木犀草素进行了定性鉴别；用HPLC法对肋柱花中獐牙菜苦苷进行定量分析，建立了质量控制方法。

1 仪器与试药

1.1 实验材料 獐牙菜苦苷对照品及木犀草素对照品是由中国药品与生物检验所购买。(批号：0985-200403 ；11620-200402)。肋柱花由锡林浩特西乌珠穆沁旗蒙医医院提供。蒙药肋柱花为龙胆科植肋柱花Lomatogonium carinthiacum(Wulf)Reichb.的干燥全草。全草由内蒙古民族大学蒙医药学院布和巴特尔教授鉴定为肋柱花全草(批号：20150711.20150823.20150814)。薄层色谱硅胶G，硅胶GF254均由青岛海洋化学试剂公司提供。其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器 BS210S型(max210g d=0.1mg)电子天平(日本岛津)；ZF-1型紫外灯(上海)；HHS21-4型恒温水浴锅(上海)；KQ-100型双频超声波清洗器(昆山市)。高效液相色谱仪LC-20AT型(日本岛津)；SPD-M10AVP紫外分光光度计(上海)。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 肋柱花中獐牙菜苦苷的薄层色谱鉴别 样品溶液的制备：取肋柱花粗粉1.0g，置于锥形瓶中加25mL甲醇，加盖，称重，超声50min，置于室温放凉，称重，加甲醇补足减失的重量，过滤，滤液备用。

獐牙菜苦苷对照品溶液的制备：精密称取獐牙菜苦苷对照品5.0mg，置于10mL量瓶中加甲醇至刻度，混匀，再从溶液中吸取1mL液体，置于试管中加3mL甲醇，即得对照品溶液。

样品溶液(3份)和獐牙菜苦苷对照品溶液分别吸取3μl，按《中华人民共和国药典》(2015版 第四部0502)薄层色谱法[4-5]，分别点于同一羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF245薄层板上，以乙醚-乙酸乙酯-甲醇(1:5:2)为展开剂，展开10cm，晾干，在紫外灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。(图1)；再于硅胶GF254薄层色谱板上以乙酸乙酯-甲醇(10:2)，二氯甲烷-甲醇(17:3)作为展开剂，展开验证时得到同样的结果。(图2～3)。

2.1.2 肋柱花中木犀草素的薄层色谱鉴别 样品溶液的制备：称取肋柱花粗粉1.0g置于锥形瓶中加25mL盐酸-甲醇(2.5mol/L)溶液，加盖，称重，30min回流提取。置于室温，称重，加盐酸-甲醇溶液补足减失的部分，过滤，滤液备用。

木犀草素对照品溶液的制备：从木犀草素对照品中称取5.2mg，加5mL甲醇，配成1.04mg/mL溶液，备用。

样品溶液(3份)和木犀草素对照品溶液各吸取6μL和2μL，按《中华人民共和国药典》(2015版 第四部0502)薄层色谱法[4-5]，分别点于同一羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以环乙烷-乙酸乙酯-甲酸(10:10:2)作为展开剂，展开10cm，晾干，喷三氯铝乙醇溶液，110℃加热，在紫外灯(365nm)下检视，，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色斑点。(图4)；再于硅胶G薄层色谱板上以环己烷-乙酸乙酯-甲醇(10:8:2)和二氯甲烷-甲醇-甲酸(7:2:0.5)作为展开剂，展开验证时得到同样的结果。(图5～6)。

2 定量测定研究[6-9]

2.1 色谱条件 色谱柱：Diam onsil C18 (250mm×4.6mm，5μm)；獐牙菜苦苷对照品的流动相为：甲醇-水(25:75)，检测波长：237nm，柱温：50℃，流速：1.0mL/min。

2.2 供试品溶液的制备 样品溶液的制备：称取肋柱花粗粉1.0g，加入锥形瓶中加25mL甲醇，加盖，称重，超声处理50min，室温晾干，称重，加甲醇补足减失的重量，过滤，滤液吸取1mL置25mL量瓶中加甲醇至刻度，混匀，备用。(1mL溶液内1.6mg生药)

獐牙菜苦苷对照品溶液的制备：精密称取獐牙菜苦苷对照品10mg，置10mL量瓶中加甲醇至刻度，混匀。从溶液中精密抽取0.25mL置2mL量瓶中加甲醇至刻度，备用。

2.3 线性关系及其工作范围的考察 按照“2.2”法制备的对照品溶液中分别精密吸取2.5μL，5μL，7.5μL，10μL，12.5μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积(A)并以峰面积(Y)对对照品的进样量(X)进行线性回归，得回归方程：Y=9943898X-11915，r=0.999 9。结果表明，獐牙菜苦苷对照品进样量在0.313μg ～1.563μg范围内，与峰面积具有良好的线性关系，相关性显著。结果见表1。

表1 线性关系检测结果

2.4 精密度实验 从2.2样品溶液，以及獐牙菜苦苷溶液和木犀草素溶液各精密吸取10μL，分别用HPLC测量峰面积，同样方法各进样5次。结果显示精密度良好。结果显示样品溶液獐牙菜苦苷RSD=0.36%和獐牙菜苦苷对照品RSD=0.16%。结果见表2。

表2 精密度实验结果

2.5 稳定性试验 按照“2.2”法制备的对照品溶液，各精密吸取10μL，每隔4h用HPLC测量峰面积，结果16h内稳定性良好，獐牙菜苦苷RSD=0.63%。结果见表3。

表3 稳定性检测结果

2.6 重复性实验 同一批号肋柱花样品精密称取1.0g，共称取5份。照上述方法制得供试品溶液5份，按含量测定方法，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定其峰面积，并计算含量，结果见表4。结果表明，该含量测定方法具有良好的重复性。獐牙菜苦苷RSD=0.97%。

表4 重复性实验结果

2.7 回收率实验 从样品中称取0.10g，6份。分别加獐牙菜苦苷对照品及木犀草素对照品，照上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，并按下列公式计算回收率结果，獐牙菜苦苷平均回收率为99.50%；RSD=0.92%。结果见表5。

回收率(%)=[测得量(mg)—样品中含量(mg)/加入对照品量(mg)] ×100%

表5 回收率实验结果

3 肋柱花中獐牙菜苦苷的含量测定

按照“2.2”法制备的样品溶液，精密吸取10μL，按上述色谱条件下记录峰面积，计算其含量，结果见表6。

表6 含量测定结果

4 结论

用3种不同展开系统进行肋柱花中獐芽菜苦苷和木犀草素的薄层鉴别结果，在本试验条件下，均能检出清晰的薄层斑点。用HPLC法测定肋柱花中獐芽菜苦苷和木犀草素的含量，结果本实验条件下，獐芽菜苦苷平均含量为7.64～7.69mg/g。本研究方法操作简便、可行可靠，重现性好，专属性强，可用于肋柱花的质量控制。

本研究对蒙药材肋柱花进行系统的质量标准控制，为临床安全有效用药及制定质量标准体系提供参考依据。

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