中药加味理肠饮对腹泻型肠易激综合征大鼠SP、VIP、CORT含量的影响

梁峻尉，白文筠*，迟莉丽，闫华,孙大娟,赵继亭，王帅，叶倩男(.山东中医药大学附属医院，山东 济南 500;.山东中医药大学,山东 济南 500)

肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)是一种没有器质性疾病或生化异常可以解释的腹部不适或疼痛同时伴有排便紊乱的疾病，是消化内科门诊常见的一种功能性疾病，据统计IBS病人约占消化内科门诊量的31%[1]，我国以腹泻型IBS多见[2]。IBS虽然不会危及患者的生命，但由于症状反复发作严重影响患者的生活质量，占用了大量的医疗资源[3]。

IBS的发病机制尚未完全明确，目前认为是以神经元调节胃肠道功能紊乱为特点的严重疾病[4]。我们在前期的临床及实验研究基础上，课题组进一步选取P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)、皮质酮(CORT)作为主要测定指标，观察加味理肠饮对IBS-D大鼠的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

出生后42 d SPF级SD雄性大鼠70只，体质量(200±10)g，购自济南朋悦实验动物繁育有限公司,动物合格证号：SCXK(鲁)20140007。

1.2 药品

加味理肠饮(炒白术30 g,茯苓24 g,党参12 g,炒白芍15 g,柴胡12 g,香附9 g,陈皮12 g,防风9 g,高良姜6 g,桂枝9 g,炙甘草6 g等)由山东中医药大学附属医院中药制剂室提供，配制成含生药浓度分别为0.5 g/mL、1 g/mL、2 g/mL的溶液。匹维溴铵片(得舒特,法国，批号：611243)；谷参肠安胶囊(复方谷氨酰胺肠溶胶囊,国药准字：H51023598,生产厂家：成都地奥集团天府药业公司)。

1.3 实验主要试剂及仪器

试剂盒为 SP、VIP、CORT物质ELISA 试剂盒，购自济南博诺生物科技有限公司。可调高速匀浆器FSH-2型，金坛市恒丰仪器厂；酶标仪:ELX808,BioTek美国伯腾仪器有限公司；高速低温离心机MICROMAX RF，Thermo IEC(美国)。

1.4 实验方法

1.4.1 实验分组

将SD大鼠按随机区组法分为7组：空白对照A组；模型对照B组；得舒特组；谷参肠安D组；加味理肠饮低剂量E组；加味理肠饮中剂量F组；加味理肠饮高剂量G组。(以下简称空白组、模型组、得舒特组、谷参肠安组、中药低剂量、中药中剂量和中药高剂量组)，每组10只，各组大鼠体质量统计学比较无显著性差异(P>0.05)。

1.4.2 造模方法

将SD大鼠适应性喂养7 d后,予避水应激+夹尾刺激+番泻叶灌胃方法，以上刺激共持续10 d。为消除生物节律的影响，造模于每天9:00～11:00进行。

1.4.3 给药方法

得舒特组给予得舒特15 mg/(kg·d)灌胃，谷参肠安组给予谷参肠安0.2 g/(kg·d)灌胃,加味理肠饮组分别给予低剂量1.5 g/(kg·d)、中剂量3 g/(kg·d)、高剂量6 g/(kg·d)中药灌胃10 mL/(kg·d)，空白组和模型组分别给予等容积生理盐水灌胃，1次/d。共28 d。以1 mL/100 g剂量灌胃。

1.5 AWR评分

参考文献方法，用自制球囊扩张大鼠结直肠，并对扩张引起的腹部回缩反射(AWR)进行评分。

1.6 酶联免疫法Elisa法检测大鼠SP、VIP、CORT

连续用药28 d后处死大鼠，于腹主动脉取血,每只大鼠取5 mL，置于抗凝管中，备用；截取结肠组织，取大鼠结肠段，距肛门口5 cm左右的肠组织，将清洗好的肠管立即置于4%的多聚甲醛溶液中固定，脱水处理后石蜡包埋。-80℃冰箱保存。按照试剂盒说明，检测SP、VIP、CORT水平。

1.7 组织病理学变化

对结肠组织进行苏木素-伊红(haematoxylin-eosin，H-E)染色，在光学显微镜下观察其病理组织学形态变化。

1.8 统计学分析

采用SPSS17.0软件进行分析、统计，数据以平均数±方差表示。各组之间的比较采用单因素方差分析，两两比较时，如方差齐采用LSD检验，方差不齐选Dunnett T3检验。P<0.05被认为差异具有统计学意义，P<0.01被认为具有显著的统计学差异。

2 实验结果

2.1 AWR评分

AWR评分结果发现：与模型组相比，各药物实验组在压力为20、40、60 mmHg时的行为学评分均降低(P<0.05)(除20 mmHg中药低剂量组外)。各个组间在压力为80 mmHg时评分未见差异(P>0.05)。见表1。

表1 试验后各压力值(mmHg)下的AWR评分

注：与模型组对比，*P<0.05,**P<0.01；与中剂量组对比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

2.2 加味理肠饮对IBS-D大鼠血浆及结肠组织SP的影响

与模型组对比，各药物组SP水平均下调(P<0.05)。见表2。

表2 各组大鼠SP表达水平的对比

注：与模型组对比，*P<0.05,**P<0.01；与中剂量组对比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

2.3 加味理肠饮对IBS-D大鼠血浆及结肠组织VIP的影响

与模型组对比，各药物组VIP水平均下调(P<0.05)(除中药低剂量组血浆VIP外)。见表3。

2.4 加味理肠饮对IBS-D大鼠血浆CORT的影响

与模型组对比，除中药低剂量组外，各药物组CORT水平均上调(P<0.05)。见表4。

2.5 加味理肠饮对IBS-D大鼠结肠组织病理学变化

HE染色结果显示，各实验组大鼠的结肠组织均未见明显的形态学改变：结肠黏膜上皮完整、腺体排列整齐，各层结构清晰，未见明显的炎症细胞浸润和间质水肿。实验组间的病理结构表现未见明显差异。说明应激未造成大鼠结肠明显病理损害，这与临床上IBS患者的表现相似。见图1。

表3 各组大鼠VIP表达水平的对比

注：与模型组对比，*P<0.05,**P<0.01；与中剂量组对比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

表4 各组大鼠CORT表达水平的对比

注：与模型组对比，*P<0.05,**P<0.01；与中剂量组对比，▲P<0.05，▲▲P<0.01

图1 结肠组织病理学变化(×100)注：A空白组;B模型组;C得舒特组;D谷参肠安组;E中药低剂量组;F中药中剂量组;G中药高剂量组

3 讨论

IBS的肠神经系统产生异常主要表现在内脏感觉过敏和肠道动力两方面。最近几年有关IBS-D病理机制的研究逐渐深入，脑肠轴异常成为本病的一个重要机制及研究方向。SP是第一个被发现的脑肠肽，可使胃肠蠕动增加、消化道平滑肌收缩增强，并具有刺激小肠、结肠黏膜分泌水和电解质的作用[5]。异常升高的SP可使肠道平滑肌强烈收缩、增强结肠集团运动、刺激肠黏膜分泌水和电解质的作用，这与IBS-D腹痛和腹泻的症状密切相关。VIP血管活性肠肽在胃肠神经系统中是一种抑制性神经递质[6]，有研究表明[7]，IBS患者腹泻时，血中VIP较正常人空腹时有明显升高，VIP与IBS患者的腹痛、腹泻等症状密切相关。近几年关于下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)[8]的研究增多，学者发现其调节网络的失控可能为IBS发病的关键，应激刺激能影响HPA轴，促使下丘脑、垂体、肾上腺分泌神经递质，如皮质酮(CORT)等，导致IBS的发生。有研究表明，妇女IBS患者血浆中皮质酮的含量比健康成人血浆中皮质酮含量高。因此本研究选取SP、VIP、CORT作为内容。

目前为止治疗IBS主要以对症、抗焦虑或者抑郁以及心理辅导等为主，没有从病理生理学的角度来解决问题，因此疗效相当有限，而有一些设计严格的临床试验[9]或系统评价[10]证明中医药对IBS有一定疗效。前期临床研究显示，应用加味理肠饮治疗IBS-D，临床效果显著[11]，全方由柴胡、桂枝、炒白芍、党参、炒白术、茯苓、半夏、防风、陈皮、黄芩、香附、乌药、炙甘草组成，是由“柴胡桂枝汤”“痛泻要方”“四君子汤”三方加减变化而来，柴胡桂枝汤在《金匮要略》中主治心腹卒中痛者，隗继武老师通过对经典的深研和反复的临床实践，应用本方治疗IBS，临床效果显著[11]；痛泻要方一直以来被广大医者看做是治疗IBS的基础方之一，疗效确切；四君子汤历来被认为是“健脾补气第一方”。纵观全方健脾为主佐以疏肝，行气散寒又佐以解郁清热，切合病机。清补结合，寒热并用，营卫同调，兼顾心肝脾是本方的四大特点。

本研究发现：加味理肠饮可以明显降低IBS-D大鼠的AWR评分和内脏痛觉阈值，说明加味理肠饮对慢性应激导致的内脏高敏感和肠道动力异常具有显著的调节作用。同时，本实验还发现加味理肠饮可以降低IBS-D大鼠血浆及结肠组织中SP、VIP的含量，下调血浆CORT水平，尤以中剂量组效果最明显，说明加味理肠饮可能通过调节相关脑肠肽含量从而影响脑-肠轴以及HPA轴,因而调节了胃肠道的运动、感觉和分泌功能。以上这些结果说明了中医学中的情志异常-肝郁-脾虚等导致机体的一系列病理生理改变，可能与IBS病因病机学中的神经-内分泌-免疫学说有着某种密切的联系。

本研究只是选取了脑肠轴和HPA轴的相关递质，尚缺乏以某一个通路为主的系统研究，将来的研究将以此为方向进行探讨。

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