麻黄定喘汤和鹿茸大补汤的急性毒性研究

2018-06-25李聪郑明昱许妍姬延边大学医学院预防医学教研室吉林延吉3300延边大学中医学院中医临床教研室吉林延吉3300

中医药学报 2018年3期

李聪，郑明昱，许妍姬*(.延边大学医学院预防医学教研室，吉林延吉 3300;.延边大学中医学院中医临床教研室，吉林延吉 3300)

随着经济的高速发展，人们生活的环境也随之受到了破坏，空气污染严重，导致哮喘病发病率上升。在临床治疗中，通常采用西药糖皮质激素治疗，但是药物副作用明显。朝医学根据辨象论治，出自《东医寿世保元》中麻黄定喘汤和鹿茸大补汤这两药方来治疗，所以麻黄定喘汤和鹿茸大补汤的卫生毒理学安全也受到了重视。

麻黄定喘汤，具有补肺润肺，化痰平喘之功效[1]。配方根据中药配伍理论和临床经验，通过药理研究科学配制[2]。麻黄定喘汤由麻黄15 g，杏仁7.5 g，黄芩5 g，莱菔子5 g，桑白皮5 g，桔梗5 g，麦冬5 g，款冬花5 g，白果20枚九味中药组成。

鹿茸大补汤，具有补肺益精血，健肺止咳之功效[3]。配方根据中药配伍理论和临床经验，通过药理研究科学配制[4]。鹿茸大补汤由鹿茸15 g，麦冬7.5 g，薏苡仁7.5 g，山药5 g，天冬5 g，五味子5 g，杏仁5 g，麻黄5 g八味中药组成。

此次实验采用安慰剂对照实验方法，探讨麻黄定喘汤和鹿茸大补汤的急性毒性。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物

健康适龄SPF级昆明种小鼠50只，雌、雄各半，体质量18～22 g，购于延边大学动物科学实验中心。饲养环境：延边大学医学院动物房,温度22～25℃，相对湿度40%～70%，普通饲料由延边大学动物科学实验中心提供。

1.1.2 药物

麻黄定喘汤与鹿茸大补汤，延边大学医学院，配制方法：按照药剂配方，由延边大学药学院制备成冻干粉的形式，转交于延边大学医学院，麻黄定喘汤冻干粉的转换率为27.79%，鹿茸大补汤冻干粉的转换率为25.83%。

1.1.3 试剂

谷丙转氨酶(ALT/GPT)测试盒(C009-2，微板法，生产批号20161120)；谷草转氨酶(AST/GOT)测试盒(C010-2，微板法，生产批号20161116)，以上试剂均购于南京建成生物工程研究所。

1.1.4 实验仪器

恒温水浴锅、37℃恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、移液器、酶标仪、电子天平、微量振荡器、高速冷冻离心机、制冰机、组织研磨器等均由延边大学医学院预防医学实验中心提供。

1.2 方法

1.2.1 预实验

根据《毒理学基础实验指导》(科学出版社2010年版)，进行毒性试验预实验，预测药物的半数致死量(LD50)[5]。取体质量18～22 g昆明鼠种8只，随机分为4组，用苦味酸进行标记，雌、雄各半，动物适应性饲养3 d，禁水食12 h。第一组给麻黄定喘汤浓度1.2 g·mL-1，按照小鼠体质量10 mL·kg-1的剂量给药(相当于成人临床用药的50倍)；第二组给麻黄定喘汤浓度2.3 g·mL-1，按照小鼠灌胃最大承受体积(40 mL·kg-1)的剂量给药(相当于成人临床用药的200倍)；第三组给鹿茸大补汤浓度1.3 g·mL-1，按照小鼠体质量10 mL·kg-1的剂量给药(相当于成人临床用药的50倍)；第四组给鹿茸大补汤浓度2.6 g·mL-1，小鼠灌胃最大承受体积(40 mL·kg-1)，一次性灌胃给药(相当于成人临床用药的200倍)[6]，给药后自由进食和饮水，连续观察3 d。期间每天对小鼠进行观察体态、体征、饮水量、摄食量等[7]。

1.2.2 一般急性毒性实验

将42只18～22 g昆明小鼠取回后，按性别放入清洁培养箱中，适应环境饲养3 d，经笼旁观察动物的精神、活动、饮食、大小便等生理活动[8]。按性别随机分为生理盐水对照组、麻黄定喘汤给药组和鹿茸大补汤给药组，每组各14只，雌、雄各半，分笼饲养[9]。实验前，禁水食12 h，生理盐水对照组；0.9%NaCl溶液，按照小鼠体质量10 mL·kg-1的剂量给药；麻黄定喘汤给药组：给予药物浓度2.3 g·mL-1，按照小鼠体质量10 mL·kg-1的剂量给药(相当于成人临床用药的100倍)；鹿茸大补汤给药组：给予药物浓度2.6 g·mL-1，按照小鼠体质量10 mL·kg-1的剂量给药(相当于成人临床用药的100倍)。一次性灌胃给药，自由进水食，连续观察7 d，详细记录小鼠每日摄食量、体质量、神情状态及死亡情况等[10]。7 d后，用颈椎脱臼法将小鼠处死，解剖观察，取脑、肝、脾、肺、肾脏器称重，计算脏器系数[11]。对小鼠组织进行生化检查，测得谷草转氨酶活力(U/gprot)和谷丙转氨酶活力(U/gprot)。

1.2.3 统计分析

2 结果

2.1 预实验测定结果

小鼠灌胃后，立即观察到，麻黄定喘汤给药组和鹿茸大补汤给药组的小鼠活动均减少，高剂量组小鼠部分出现胃痉挛和心跳过速等现象，0.5 h后恢复正常，观察3 d，毛色光滑正常，大小便正常，眼、鼻、口腔未见异常分泌物，无运动失调，呼吸、进食、饮水均正常，无死亡现象。处死后，观察各脏器均无明显异常。未见死亡现象，无法测得半数致死量(LD50)。

2.2 小鼠急性毒性实验

2.2.1 一般情况

以23 000 mg·kg-1麻黄定喘汤和26 000 mg·kg-1鹿茸大补汤分别给药(相当于成人临床用药的100倍)，灌胃处理后，小鼠生长情况良好，体质量增长正常，无中毒死亡症状。观察7 d后，将小鼠解剖观察，各脏器均无明显异常。通过经口急性毒性实验，根据我国《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)的评价标准，属无毒级。见表1。

2.2.2 各组实验小鼠体质量的变化

通过每日称量小鼠体质量，麻黄定喘汤组和鹿茸大补汤组实验小鼠的体质量分别与生理盐水对照组的比较，无明显差异，无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.2.3 各组实验小鼠摄食量的变化

通过每日称量小鼠摄食量，麻黄定喘汤组和鹿茸大补汤组实验小鼠的摄食量分别与生理盐水对照组比较，无明显差异，无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表1 各给药组急性毒性实验结果

表2 各给药组实验小鼠体质量的变化

表3 各给药组实验小鼠摄食量的变化

2.2.4 各组实验小鼠的总食物利用率

通过每组实验小鼠的总增重量和总进食量，计算总食物利用率(总食物利用率=总增重量/总进食量×100%)。麻黄定喘汤组和鹿茸大补汤组实验小鼠的总食物利用率分别与生理盐水对照组比较，无明显差异，无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 各组实验小鼠的总食物利用率

2.2.5 各组实验小鼠脏器重量的变化

观察结束后，解剖小鼠，取脑、肝脏、脾脏、肺及肾脏，称重并进行统计处理。麻黄定喘汤组和鹿茸大补汤组实验小鼠的各脏器重量分别与生理盐水对照组比较，无明显差异，无统计学意义(P>0.05)。见表5。

2.2.6 各组实验小鼠脏器系数比较

通过称量实验小鼠各脏器的重量和体质量，计算各脏器系数(脏器系数=脏器重量/体质量)。麻黄定喘汤组和鹿茸大补汤组实验小鼠的脏器系数分别与生理盐水对照组比较，无明显差异，无统计学意义(P>0.05)。见表6。

2.2.7 各组实验小鼠生化指标结果

通过谷草转氨酶(AST/GOT)测试盒和谷丙转氨酶(ALT/GPT)测试盒，对小鼠组织进行测量，测得谷草转氨酶活力(U/gprot)和谷丙转氨酶活力(U/gprot)。麻黄定喘汤组和鹿茸大补汤组实验小鼠的酶活力分别与生理盐水对照组比较，无明显差异，无统计学意义(P>0.05)。见表7。

表5 各组实验小鼠脏器重量的变化

表6 各组实验小鼠脏器系数比较

表7 各组实验小鼠生化指标结果

3 讨论

朝医药是我国传统文化智慧的结晶，具有独特的哲学思想及理论体系[12]。朝医药和中医药都是在中国古代哲学和经验总结基础上发展而成的完整的医药学体系，有着紧密不可分的联系[13]。随着现代朝医药事业的高速发展,朝医药在世界范围内防病与治病的有效性[14]得到了更为广泛的认可，配方的毒性安全性日益受到了人们的重视。哮喘病发病率上升，朝医学通常用补肺润肺，益精血之药物来辨象论治此病[15]。麻黄定喘汤和鹿茸大补汤均出自《东医寿世保元》，都为治太阴人,喘气困难而设,补小泻大，用于太阴人哮喘效果颇佳[16]，所以比较研究其毒性。由于这两服药在临床的有效性和特殊性明显，安全性评价就尤为重要。

本实验通过急性毒性实验，研究麻黄定喘汤和鹿茸大补汤对小鼠的急性毒性作用。由于预实验无法测得半数致死量，采用临床成人药量100倍作为实验剂量，来评价其安全性。通过对小鼠一般情况进行比较(实验前体质量和终止实验时体质量比较)，各组之间无统计学差异(P>0.05)。研究小鼠每日体质量变化和每日摄食量变化，与生理盐水对照组比较，无统计学意义(P>0.05)。分析小鼠总食物利用率，各组数值之间大致一致，通过统计分析，无统计学差异(P>0.05)。将小鼠解剖后，取其各脏器进行比较，计算其脏器系数，无统计学意义(P>0.05)。通过谷草转氨酶(AST/GOT)测试盒和谷丙转氨酶(ALT/GPT)测试盒测定，计算各组谷草转氨酶(AST/GOT)活力和谷丙转氨酶(ALT/GPT)活力，无统计学差异(P>0.05)。通过急性实验，对小鼠进行观察，通过记录体质量、摄食量，并观察其脏器的病理变化和脏器系数，对其生化指标进行测定，从各个方面与对照组进行对比研究，均无统计学差异(P>0.05)，可以得出结论，其临床成人用药量100倍剂量对小鼠无明显急性毒性，通过急性毒性原理，麻黄定喘汤和鹿茸大补汤安全性较高，临床中可以适量使用。但是由于两方在临床用药中的有效性和特殊性，日后仍需通过实验研究评价其慢性毒性，综合评价其安全毒性。

[1] 张梦婷,张嘉丽,任阳阳.麻黄的研究进展[J].世界中医药,2016,11(9):1917-1921.

[2] 谭晓梅,郭阳,余林中.麻黄-杏仁药对配伍及不同配比对急性毒性及平喘作用的影响[J].中药药理与临床,2013,29(1):82-84.

[3] 赵岩,妙志岩,郜玉钢.人参茸芝胶囊的急性毒性实验研究[J].食品安全质量检测学报,2015,6(2):614-618.

[4] 隋海霞,高芃,耿桂英.鹿茸人参制剂的毒理学安全性评价[J].现代预防医学,2007,34(23):4448-4449.

[5] 肖经纬,李斌,张星.急性经口毒性评价试验方法的研究进展[J].国外医学(卫生学分册),2007,34(2):84-88.

[6] 林伊莉,陈丹,曾华平.百花含片的急性毒性试验[J].福建中医药,2016,47(1):24-25.

[7] 朱智德,蒋林,罗宇东.六味葛蓝降脂片对小鼠急性经口毒性及遗传毒性的试验研究[J].中国当代医药,2016,23(12):4-7.

[8] 于葆华,丁晓云,盛国荣.退银汤急性毒性试验[J].中医药导报,2016,22(1):43-45.

[9] 古丽娜·巴克,李海英.松萝酸对小鼠急性毒性试验研究[J].饲料研究,2016,39(7):51-53.

[10] 杜正彩,郝二伟,黄庆.复方绞股蓝益智颗粒急性毒性与慢性毒性实验研究[J].当代医学,2012,18(19):1-3.

[11] 杨旭,王琦越,付知勤.外用制剂芎桃二乌止痛酊急性毒性实验研究[J].辽宁中医药大学学报,2017,19(1):58-60.

[12] 张秀梅,袁海鹰,李桂华.中药与中医的关系以及中药在现代医学中的地位[J].求医问药,2013,11(2):328-329.