轻型复发性阿弗他溃疡患者机体总氧化/抗氧化状态的研究

张子川 王鸿雁 陈光 吴仲寅 方会清

[摘要] 目的 比较轻型复发性阿弗他溃疡患者与健康人群的机体总氧化状态（TOS）和抗氧化状态（TAS）的血清含量，探讨TOS和TAS与复发性阿弗他溃疡发病机制间是否存在相关性。 方法 选取2015年3月～2016年12月在白求恩国际和平医院（以下简称“我院”）口腔科确诊的97例轻型复发性阿弗他溃疡（MiRAU）患者（观察组）和同期来我院的102名无MiRAU的健康体检者（对照组）为研究对象。采用色度法检测两组受试者TOS、TAS、丙二醛（MDA）和尿酸（UA）的血清含量，并对两组受试者的氧化应激指数（OSI）进行比较。 结果 观察组TOS和MDA的血清含量以及OSI值均高于对照组，仅TAS的血清含量低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。两组受试者UA血清含量比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 机体的氧化应激状态可能与RAU的发病机制有关。

[关键词] 复发性阿弗他溃疡；总氧化状态；总抗氧化状态；色度法

[中图分类号] R781.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）04（c）-0110-04

A study of the total serum oxidant/antioxidant status in patients with minor recurrent aphthous ulcer

ZHANG Zichuan1 WANG Hongyan2 CHEN Guang1 WU Zhongyin1 FANG Huiqing1

1.Department of Stomatology， Bethune International Peace Hospital， Hebei Province， Shijiazhuang 050082， China； 2.Hebei Provincial Institute of Medical Information， Hebei Province， Shijiazhuang 050000， China

[Abstract] Objective To investigate the serum content of total oxidant status （TOS） and total antioxidant status （TAS） in patients with minor recurrent aphthous ulcer （MiRAU） and compare them versus healthy individuals， and then to analyze that whether there is a possible relationship between TOS/TAS and the pathogenesis of RAU. Methods Ninety-seven patients having been diagnosed with minor recurrent aphthous ulcer （MiRAU） who presented in the Department of Stomatology of Bethune International Peace Hospital （"our hospital" for short） from March 2015 to December 2016 and 102 healthy persons being taken normal medical examination in our hospital were selected as observation group and control group respectively. The serum content of TOS， TAS， malondialdehyde （MDA） and uric acid （UA） were measured by the colorimetric measurement method， and then the oxidative stress index （OSI） being calculated were compared. Results The serum content of TOS and MDA and the value of OSI in the observation group were all higher than those in the control group， while the serum content of TAS was lower than that of the control group， with statistically significant difference （P < 0.05）. No statistically significant differences were found between the two groups in the serum content of the UA （P > 0.05）. Conclusion The oxidative stress status seems to have certain correlation with the pathogenesis of recurrent aphthous ulcer.

[Key words] Recurrent aphthous ulcer； Total oxidant status； Total antioxidant status； Colorimetric measurement method

复发性阿弗他溃疡（recurrent aphthous ulcer，RAU）是一种常见的病因不明的口腔黏膜疾病，以周期性发作和烧灼性疼痛为其典型的临床特点[1-2]。早在1972年，Stanley等依据溃疡的大小、深浅及数目不同，将其分为轻型、重型和疱疹型[3]。其中，轻型复发性阿弗他溃疡（minor recurrent aphthous ulcer，MiRAU）最為常见，约占RAU的80%[3-4]。本课题组前期的研究结果已证明，MiRAU患者发病时机体的抗氧化酶类和非酶类分子发生了变化，但是这并不能够反映出患者机体的氧化应激状态[5-6]。因此，本研究通过比较健康人群和MiRAU患者发病期时机体总氧化状态（total oxidant status，TOS）、总抗氧化状态（total antioxidant status，TAS）以及丙二醛（malondialdehyde，MDA）和尿酸（uric acid，UA）的血清含量，探讨其与RAU发病机制间是否存在着某种关联性，为预防和治疗RAU提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年3月～2016年12月在白求恩国际和平医院（以下简称“我院”）口腔科确诊为MiRAU的患者97例（男42例，女55例）为观察组，平均年龄（31.38±6.22）岁，所有患者均由同一名口腔黏膜病专业的主任医师确诊。以同期我院的健康体检者102名（男50名，女52名）为对照组，平均年龄为（29.83±5.79）岁。两组受试者一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

纳入标准：①MiRAU患者无明显原因的口腔溃疡每年发病至少3次；②所有受试者的血常规、血凝、血沉、血糖、血脂、肝肾功能、促甲状腺激素、电解质、C反应蛋白、球蛋白、白蛋白、叶酸、维生素，以及钠、钾、钙、铁、磷等检测结果均在正常范围内；③3个月内未服用维生素类、甾类化合物、免疫调节类等药物；④无吸毒、吸烟、酗酒等不良嗜好。⑤女性受试者均未在月经期、怀孕期和哺乳期。排除标准：①患有糖尿病、风湿性关节炎、冠心病、白塞病、周期性中性粒细胞减少症等全身系统性疾病的患者；②患有白斑、红斑、单纯疱疹病毒感染、疱疹性咽峡炎、扁平苔癣、红斑狼疮、天疱疮等口腔黏膜疾病的患者；③口内余留牙有锐角锐边，或存在活动性牙龈炎以及牙周炎的患者。本研究获得我院临床研究医学伦理委员会批准（批准号：2014-12-8号），所有受试者均签署了临床科研知情同意书。

1.2 研究方法

所有受试者禁食10～12 h后，抽取清晨空腹靜脉血5 mL，置于无任何抗凝血剂的真空管中，在4℃环境下以3000 r/min的速率离心5 min，离心半径15 cm，取上层血清液置于-80℃冰箱中保存。以采用分光光度计（Alpha-1106，上海谱元仪器有限公司）对受试者机体的TOS、TAS、MDA和UA血清含量进行检测，并计算氧化应激指标（oxidative stress index，OSI）。

依据商品化MDA和UA检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）中的使用说明书测定受试者体内MDA和UA的血清含量，其中MDA的计量单位为nmol/mL，UA的计量单位为mg/L。测定机体TOS血清含量的原理[7]：血清样本中所含有的氧化剂能够将亚铁离子（Fe2+）氧化成为铁离子（Fe3+）。酸性环境下，Fe3+能与二甲苯酚橙发生化学反应形成有颜色的复合物。采用分光光度计测量色彩的强度值，据此计算样本中该复合物的浓度和氧化剂的含量。TOS的计量单位为μmol H2O2 Eq/L。测定机体TAS血清含量的原理是基于样本中的抗氧化剂能够漂白有颜色的2，2'氨基-二（3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6）铵盐（ABTS），根据色彩强度的变化推算抗氧化剂的含量[8]。TAS的计量单位为mmol Trolox Eq/L。OSI是反映机体氧化应激状态的重要指标，其计算公式如下[9]：

OSI=TOS（μmol H2O2 Eq/L）/TAS（mmol Trolox Eq/L）。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

观察组TOS和MDA的血清含量以及OSI值均显著高于对照组，TAS的血清含量显著低于对照组（P < 0.05）。两组受试者UA的血清含量比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

3 讨论

RAU是一种常见的周期性发作的炎症性口腔黏膜疾病，具有自限性，好发于唇、颊、舌、口底等部位[1-4]。该病通常始发于儿童、青少年或30岁以下的年轻人，其中儿童发病率可高达39%，随着年龄的增长该病发病率及严重程度呈减小趋势[10]。临床上最常见的是MiRAU，因此本研究中观察组受试者均为已确诊的MiRAU患者。

多年来，国内外研究人员进行了大量的实验，以期能够发现RAU的发病机制与致病因素。尽管研究结果显示，局部创伤、吸烟、营养缺乏、病毒或细菌感染、心理应激、激素失调、遗传因素、食物或药物过敏、免疫因素、各种系统性疾病等均可导致RAU[11-12]，但确切病因至今仍不明确。氧化应激（oxidative stress，OS）是指当机体受到多种因素刺激后，体内活性氧（reactive oxygen species，ROS）的含量增多，超过正常的生理范围，从而破坏了氧化剂与抗氧化剂间正常的动态平衡，导致细胞和细胞外生物大分子（蛋白质、脂质、核酸等）的结构被修改，继而其功能受损，最终致使机体进入一种严重的、易受损的应激状态[5-6]。已有研究表明，过量的ROS可能与多种疾病的发生发展密切相关，诸如糖尿病、炎症、癌症、心血管疾病、牙周炎、白塞病、红斑狼疮、系统性硬化症等[13-19]。

为了预防过量自由基导致的氧化损伤，机体存在两类抗氧化防御系统，一类是抗氧化物酶，比如：超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等；另一类是非酶类抗氧化分子，比如谷胱甘肽，褪黑激素，尿酸，维生素A、B12、C、E等[5-6]。目前，各种自由基和抗氧化物血清含量的测试方法及所需试剂盒均已商品化，但是单独测量某种或者某几种物质的血清含量，仅能证明所测物的水平，无法反映机体整体的氧化、抗氧化状态。已有研究报道，血液或组织样本中多种抗氧化物酶或抗氧化分子的作用具有累加效果，而检测TAS的血清含量能够准确的反映机体总的抗氧化状态[8]。同理，TOS也反映了机体各种氧化物（过氧化氢、脂质过氧化氢、活性氧、活性氮等）累积的氧化效果[7]。因此，本研究采用色度法测定MiRAU患者溃疡发作时TAS和TOS的血清含量，并将其与健康人群的TAS和TOS含量进行比较，从而整体观察两组受试人群的氧化应激状态。