桂枝甘草汤对运动性贫血大鼠血浆总超氧化物歧化酶和血清铁的影响

傅梦薇，韩宜臻，彭 煜，张乐怡 ，赵宇晗，胡秀华

（1.北京中医药大学第一临床医学院，北京 100029；2.北京中医药大学生命科学学院，北京 100029）

运动性贫血是由于运动引起的红细胞计数和血红蛋白浓度下降的一种血液疾病[1]。近年来全球运动性贫血检出率平均为10%～20%，女运动员检出率更高[2]。中医认为，运动性贫血可归为“心阳虚”“血虚”“萎黄”等范畴，治疗本病的方剂中以补气和滋阴养血药物出现频次最高。桂枝甘草汤首次出现在《伤寒论》第64条“发汗过多，其人叉手自冒心，心下悸，欲得按者，桂枝甘草汤主之”。现代药理研究[3]发现，桂枝甘草汤有抗血栓、抗心肌缺血、抗心律失常、抗突变等作用，提示桂枝甘草汤可能与机体抗氧化酶活性有关。因此，本实验采用动物造模、灌胃给药以及SOD酶活性和血清铁离子检测等，探讨桂枝甘草汤改善大鼠运动性贫血的情况，及其对运动性贫血大鼠血浆总超氧化物歧化酶（SOD）活性和血清铁浓度的影响，为桂枝甘草汤临床治疗运动性贫血的应用提供实验依据。

1 材料

1.1 动物 SPF级SD雄性大鼠30只，体质量200 g，3～4周龄，由北京斯贝福科技有限公司提供，合格批号：SCXK（京）2016-0002。

1.2 药物配剂 桂枝甘草汤组成：桂枝12 g，炙甘草6 g。原药材由同仁堂药房提供，均符合2015年版《中华人民共和国药典》药材标准。称取桂枝12 g，炙甘草6 g进行水煎，煎煮至0.018 g/mL，分成3等份，1份备用，取其中2份浓缩至0.036 g/mL，分装后与生理盐水一同置于冰箱4 ℃中保存备用。

1.3 试剂与仪器 乙酰苯肼（Aladdin）、总超氧化物歧化酶检测试剂盒（上海源叶生物科技有限公司），血清铁检测试剂盒（上海源叶生物科技有限公司），生理盐水、一次性20 μL采血管、12号灌胃针、10 mL肝素钠抗凝管（北京欧北生物科技），全自动血细胞分析仪（MEK-6400），Thermo 酶标仪（Bio-Tek美国），TDL-80-2B低速台式离心机（飞鸽牌）。

2 方法

2.1 分组 取25只SPF级SD雄性大鼠，适应性喂养1 周后随机分为空白对照组（Control组）、乙酰苯肼组（APH组）、运动性贫血组（APH+S组）、桂枝甘草汤1和2组（APH+S+GGD 1和2组），每组5只。观察大鼠健康状态，称量体质量。

2.2 模型制备及给药 除Control组注射生理盐水外，按照100 mg/kg对其余组大鼠进行腹腔注射2%乙酰苯肼。然后将APH+S、APH+S+GGD 1组及APH+S+GGD 2组大鼠均进行2周30 min力竭游泳运动（若不能游完30 min，则将大鼠沉入水底10 s后视为力竭，可捞出）[4-5]。用12号大鼠灌胃器对运动性贫血组（APH+S）每日灌胃生理盐水，对APH+S+GGD 1组及2组大鼠每日分别灌胃0.018、0.036 g/mL浓度的桂枝甘草汤药液。药液浓度计算方法：按人体每50 kg体质量每日需要18 g桂枝甘草（12 g桂枝与6 g炙甘草）计算，即0.36 g/kg按质量等比换算后，200 g大鼠每日需用0.072 g桂枝甘草，该体质量大鼠胃容量为5 mL，故综合考虑以3 mL的药液灌胃为宜，药液浓度应为0.018 g/mL，加倍浓度则为0.036 g/mL。

2.3 检测指标 1）大鼠红细胞参数：将眼后静脉丛采血法取到的大鼠静脉血送检，采用全自动血液分析仪测定血液中红细胞等相关参数。2）总超氧化物歧化酶活性：按总SOD检测试剂盒（NBT核黄素比色法，R21667，上海源叶生物科技有限公司）说明书进行。3）血清铁：参考铁检测试剂盒（亚铁嗪微板法，R21668，上海源叶生物科技有限公司）说明书进行。

2.4 统计学方法 所有统计分析均通过SPSS 11.5 统计软件完成。正态分布的资料应用t检验和χ2分析比较差异。数据均值以均数±标准差（）表示。P＜0.05为差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 对运动性贫血大鼠一般体征的影响 与空白对照组大鼠相比，APH、APH+S组大鼠表现出倦怠、倦卧少动、拱背、睑结膜苍白、唇色淡白、体质量略减轻、食欲下降，而APH+S+GGD 1组和APH+S+GGD 2组大鼠上述症状都有显著改善，较APH、APH+S组大鼠好动、拱背减轻，每日需要更多维持饲料。

3.2 对运动性贫血大鼠的主要红细胞参数的影响 见表1。

表1 对运动性贫血大鼠主要红细胞参数的影响（ ，n = 5）

表1 对运动性贫血大鼠主要红细胞参数的影响（ ，n = 5）

注：与Control组比较，# P＜0.05；与APH组比较，△P＜0.05； 与APH+S 组比较，▲P＜0.05

组 别 RBC/（个/L） Hb/（g/L） MCV/fl MCH/pg MCHC/（g/L）Control组 7.82±0.56 174.00±7.13 62.20±3.11 359.00±4.69 22.32±1.06 APH 组 6.46±0.13# 161.00±1.00# 69.95±1.25# 356.50±1.50# 24.95±0.35#APH+S组 6.79±0.06#△ 170.00±3.74#△ 70.14±2.81# 357.40±6.77# 25.04±0.69#APH+S+GGD 1 组 6.88±0.40# 168.80±8.89# 68.76±1.37# 357.40±3.88# 24.56±0.33#APH+S+GGD 2组 7.21±0.19△▲ 169.20±6.68# 66.66±1.95# 352.00±4.43△▲ 23.46±0.75#▲

3.3 对运动性贫血大鼠血浆总SOD活性和血清铁浓度的影响 见表2。

表2 对运动性贫血大鼠血浆总SOD活性和血清铁浓度的影响（ ，n = 5）

表2 对运动性贫血大鼠血浆总SOD活性和血清铁浓度的影响（ ，n = 5）

注：与Control组比较，# P＜0.05；与APH组比较，△P＜0.05； 与APH+S 组比较，▲P＜0.05

组 别总SOD活性/（U/L）血清铁浓度/ （μmol/L）Control组 11.179 7±3.241 1 20.986 3±3.674 2 APH 组 6.294 7±4.682 1# 29.276 0±7.307 7 APH+S组 3.208 9±1.796 4# 38.966 6±9.538 9#APH+S+GGD 1组 12.462 7±4.555 6△▲ 18.175 8±4.193 2△▲APH+S+GGD 2组 9.947 9±4.651 4▲ 19.436 2±4.202 0▲

4 讨论

对于运动性贫血[6-7]，须要遵循温通心阳的治则，桂枝甘草汤方中桂枝作为君药，可充分发挥其温通心阳的作用。炙甘草补益心阳，益气生血[8]，两药合用，共奏温通心阳、益气生血之功。本实验结果显示，从主要红细胞参数来看，APH+S+GGD 1组和APH+S+GGD 2组红细胞、血红蛋白较APH、APH+S组均明显提高，说明桂枝甘草汤可以明显改善运动性贫血所致的红细胞减少，起到抗运动性贫血的作用。血浆总SOD是临床上观察生物体内清除氧自由基的首要物质，研究发现能损伤所有的生物化学复合物，与贫血时红细胞破坏有关，血浆SOD的功能在于歧化O2-为H2O2，H2O2在过氧化氢酶的作用下分解为H2O和O2，起保护红细胞作用[9]。早期贫血时机体为抵抗贫血，血浆总SOD活性会代偿性增高。实验结果显示，APH+S+GGD 1组和APH+S+GGD 2组大鼠与APH和APH+S组相比，血浆总SOD活性明显降低，说明桂枝甘草汤具有缓解血浆总SOD代偿性增高的作用，间接反映出其具有与SOD类似的对红细胞的抗氧化保护作用。血清铁主要与运铁蛋白结合成血红素铁，参与血红蛋白的携氧功能。运动性贫血时血红蛋白破坏过多，血清铁浓度升高，携氧功能下降。实验结果显示，与APH+S组大鼠血清铁浓度比较，APH+S+GGD 1组和APH+S+GGD 2组血清铁浓度回升，甚至超过空白对照组，说明桂枝甘草汤可减少血中游离铁，增加含铁血红素，进一步增强血红蛋白携氧的能力[10-11]。

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