解郁开心丹对抑郁模型大鼠海马及缰核中BDNF表达的影响

周庆莹，刘宏岩

（长春中医药大学，长春 130117）

抑郁症这一重大心理生理精神疾病正在严重危害着人类的社会职业功能、身体健康和生活质量。但是对于抑郁症的发病机制和治疗方法到目前为止仍然没有明确的解说和很好的治疗方法。西医对于抑郁症的治疗，许多药物都只是针对抑郁症患者单个或者部分机制的异常进行干预以达到治疗的目的，但治疗效果并不理想同时还带来许多治疗后的不良反应。中医药治疗抑郁症具有一定优势[1]，近年来，中医药治疗抑郁症的疗效与机制研究取得了可喜的成就。关于解郁开心丹治疗抑郁症的现代机制的研究，其实验结果显示，与抑郁症的多种现代发病机制关系密切，其中对抑郁症大鼠海马及缰核中BDNF水平表达的影响与神经元损伤假说有关[2]。

脑源性神经营养因子（BDNF）属于NTF的一种。研究[3]表明，抑郁症会导致NTF的表达减少。NTF即神经营养因子可影响神经元的存活、分化和修复[4]。由于BDNF 在长时程增强（LTP） 中发挥重要的特性，故提示其细胞因子是神经元再生的关键因素[5]。海马是情绪整合和高级精神活动中枢[6]，是成年人神经发生的主要结构，其中海马齿状回的亚颗粒状区是新神经元生成的2个主要区域之一[7-8]。缰核为边缘前脑和脑干的重要枢纽之一[9]。实验证明，缰核和海马中BDNF表达水平在抑郁症大鼠中是降低的[10]。应激会对脑海马结构，成熟神经元有一定影响[11]。本文通过慢性应激方法造模，进一步研究解郁开心丹对抑郁症大鼠模型海马及缰核中BDNF表达水平的影响，进而探索解郁开心丹的抗抑郁机制。

1 材料与方法

1.1 材料 动物：SD大鼠60只，体质量（200±20） g，合格证号：SCXK（吉-2011-0004）。药品及试剂：中药解郁开心丹：柴胡、郁金、黄芩等。制成水煎剂浓缩至实验浓度。盐酸氟西汀20 mg，苏州中化药品有限公司，H20064844。抗BDNF免疫试剂盒，DAB显色试剂盒（北京中衫金桥生物技术有限公司）。仪器：冷冻离心机（sigma Corp3k15）；电子显微镜（莱卡）；宝特ELX-808，酶标仪；TKY-LA，冷冻切片机；GHP-9270，隔水式培养箱；BS-1100，型分析天平。

1.2 方法

1.2.1 分组 SD大鼠60只，适应性喂养1周。使用Open-Field方法：淘汰得分≤20分、得分≥130分的大鼠，将得分在20～130分大鼠，随机分为正常组、模型组、西药组、中药高、中、低剂量组，每组10只。

1.2.2 海马及缰核中BDNF表达的测定 将抑郁症模型大鼠的脑组织，置于新配制4%多聚甲醛液中，固定1 h，修块， 80%、90%、95%、100%乙醇梯度，脱水，二甲苯透明，石蜡包埋；切片，常规脱腊至水，3%H2O2孵育5 min，目的消除内源性过氧化氢酶活性；将切片进行预处理：用0.01 mol/L枸橼酸缓冲液（pH 6.0），微波修复，DH2O冲洗，将一抗孵育，4 ℃过夜。PBS冲洗，3次/2 min，滴加二抗进行孵育，室温20 min，PBS冲洗，3次/2 min，应用DAB显色，光镜下观察，DH2O冲洗阻断显色反应，苏木素复染2 min。逐级乙醇脱水（80%～100% 2 min/次），二甲苯透明，中性树脂封片。实验结果，使用医学图像分析系统分析，利用显微摄影系统分别在200、400倍镜下分别取5个视野，计算阳性细胞灰度值，再求平均值，进行统计。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件，使用均数±标准差（）表示，多组均数之间比较，使用单因素方差分析，每2组均数之间比较，使用t检验。P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 6组大鼠海马中BDNF表达水平比较 见表1。

表1 6组大鼠海马中BDNF表达水平比较（ ，n = 10）

表1 6组大鼠海马中BDNF表达水平比较（ ，n = 10）

注：与空白组比较，# P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05

组 别 海马中BDNF空白组 125.050 0±7.148 61模型组 146.750 0±7.224 77#西药组 141.900 0±4.315 21 △中药高剂量组 140.250 0±7.992 60 △中药中剂量组 156.900 0±6.676 55 △中药低剂量组 141.633 3±5.674 50

2.2 6组大鼠缰核中BDNF表达水平比较 见表2。

表2 6组大鼠缰核中BDNF表达水平比较（ ，n = 10）

表2 6组大鼠缰核中BDNF表达水平比较（ ，n = 10）

注：与空白组比较，# P＜0.05；与模型组比较，△P＜0.05

组 别 缰核中BDNF空白组 72.900 0±11.665 96模型组 111.950 0±6.621 14 #西药组 141.900 0±4.315 21 △中药高剂量组 42.700 0±5.831 85 △中药中剂量组 45.900 0±8.213 60 △中药低剂量组 62.850 0±6.072 15

3 讨论

研究[12]表明，慢性应激刺激可以降低海马中BDNF的水平。长期抗抑郁治疗可以使BDNF的表达水平升高[13]。实验结果证明，解郁开心丹对抑郁症大鼠海马及缰核中BDNF的表达水平的调节作用与西药氟西汀相同。由此推断解郁开心丹的抗抑郁作用机制可能与调节海马及缰核中BDNF水平的表达有关，与之前报道吻合[14-15]。可以得出解郁开心丹的抗抑郁机制不是针对抑郁症患者某个异常的机制进行干预与治疗，而很可能是通过多种机制，作用于多系统，而达到抗抑郁的作用。即中医整体观的思想，中医认为，人体是一个整体，上下内外表里均是相互联系与沟通的。气血阴阳上下交通，出入于表里内外，无时无刻都在运动和气化过程中，其中一部分机制发生异常势必会影响其他机制的正常交通与运化。这也与抑郁症的发病机制是由多种机制异常综合作用所致的结论不谋而合。所以治疗抑郁症的切入点不应该是对人体某个异常机制的改善，而是从整体出发，综合调治才能达到理想的治疗效果。中医药治疗抑郁症的方法很多，但通过多年的研究结果表明，以中药复方治疗抑郁症的疗效最为突出，本实验也印证了这一点。

解郁开心丹是在“填精益气养血法”的指导下拟定，由十几味中药配伍而成。具有滋养五脏阴阳之虚、顾护五脏之神，填精益气养血之功效。抑郁症属于中医的情志疾病，而情志疾病属于中医“神”的病变范畴。中医认为，广义的神包括神、魂、魄、意、志等，分别由心、肝、肺、脾、肾所藏，又称为“五神脏”。人体正常的情志、精神活动，靠五神共同协作维持，五神的正常活动则靠五脏气血濡养。若五脏虚损，则难舍五神：心虚神失所养，肝虚无以敛魂，脾虚意则难存，肺虚魄失藏舍，肾虚志气不藏[16]。同时神志的波动又会引起气血运化的异常，气血运化异常亦会影响五脏。如抑郁症会对人的消化、免疫、神经系统等机能产生影响甚至造成损伤[17]。故中医认为，抑郁症患者情志异常，日久则影响五脏气血的运化，相反，五脏气血运化异常，则神失所养，进一步影响神志的恢复。此复方通过多味中药的配伍应用，不单独针对某个脏腑，而是从整体出发补充人体之气血，调和人体之阴阳，通过调和人体五脏整体的气血阴阳进而濡养五神，使身体恢复常态进而达到抗抑郁的作用。笔者认为，随着解郁开心丹对抑郁的缓解和消除，现代研究所发现的各种抑郁状态下异常的系统或指标，解郁开心丹都将对其产生积极有效的调节作用。

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