高效液相色谱法同时测定参芪扶正注射液中党参炔苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量Δ

2018-06-19邹小雅谭梅英廖丽锦苏高翔

中国医院用药评价与分析 2018年5期

邹小雅，谭梅英，廖丽锦，黄霞，苏高翔

(1.湛江市第二中医医院药剂科，广东湛江 524013； 2.广东省第二中医院/广东省中医药工程技术研究院药学部，广东广州 510095)

心力衰竭由各类心脏病变引起，主要表现为呼吸困难、乏力及液体潴留等[1]。而强心类西药用于心力衰竭患者，存在副作用大、易产生耐药性等问题[2]。参芪扶正注射液由党参、黄芪提取制备而成，具有益气扶正之功效,临床常用于治疗肺脾气虚引起的神疲乏力、少气懒言及自汗眩晕，和胃癌、肺癌的预后恢复等[3]。有研究结果显示，参芪扶正注射液联合常规西药治疗心力衰竭的疗效较好[4]。皂苷类成分是参芪扶正注射液发挥相关作用的物质基础，目前，有关党参、黄芪药理活性及化学成分的研究较多见[5]，但其含量测定及质量标准研究仍局限于单一成分或总皂苷[6]。本研究建立了多种活性成分同时测定的方法，进行参芪扶正注射液的质量控制。

1 材料

1.1 仪器

Agilent 1200高效液相色谱仪，DAD检测器(美国Agilent公司)；Mettler-Toledo电子天平(瑞士Mettler-Toledo公司)。

1.2 药品与试剂

参芪扶正注射液(丽珠集团利民制药厂，批准文号：国药准字Z19990065，批号：170341、170509、170540、170612、170641、170707、170711、170713、170715及170739)；乙腈、磷酸为色谱纯，购自德国Sigma-Alderich公司；党参炔苷(批号：111732—201206)和毛蕊异黄酮葡萄糖苷(批号：111920—201203)对照品购自中国食品药品检定研究院。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液：精密称取党参炔苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，置于25 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得上述对照品含量均为200 μg/ml的溶液。

2.1.2 供试品溶液：取参芪扶正注射液适量，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.2 色谱条件

色谱柱为Dikema C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以乙腈为流动相A，0.1%磷酸水溶液为流动相B，梯度洗脱(0～5 min，5%～5%A；5～20 min，5%～15%A；20～40 min，15%～25%A；40～59 min，25%～95%A；59～60 min，95%～5%A)；流速1.0 ml/min，柱温30 ℃，进样量10 μl，检测波长203 nm。高效液相色谱图见图1。

A.供试品溶液；B.对照品溶液(50 μg/ml)；1.毛蕊异黄酮葡萄糖苷；2.党参炔苷A.test solution B. reference solution (50 μg/ml); 1.calycosine glycosides; 2.dangshenol

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察：精密吸取混合对照品溶液适量，置于10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，分别制成含党参炔苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷均为500、200、100、50、20及10 μg/ml的溶液。取上述溶液，按照“2.2”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以浓度为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)，代入Excel中进行线性回归，得回归方程分别为，党参炔苷：Y=1.528X+10.690(R2=0.999 3)和毛蕊异黄酮葡萄糖苷Y=1.303X+5.386(R2=0.999 5)。结果表明，党参炔苷在10～500 μg/ml范围内线性关系良好，毛蕊异黄酮葡萄糖苷在10～500 μg/ml范围内线性关系良好。

2.3.2 准确度考察：精密吸取参芪扶正注射液(批号：170612)5 ml，置于10 ml容量瓶中，分别加入对照品溶液适量，加甲醇定容至刻度，即得含党参炔苷10、20及30 μg/ml和毛蕊异黄酮葡萄糖苷30、60及90 μg/ml的供试品溶液。取上述溶液，按照“2.2”项下色谱条件进样测定，每个浓度连续进样3次，记录峰面积，计算上述两种成分的含量，计算回收率。结果显示，党参炔苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的平均加样回收率分别为97.12%、101.42%，RSD分别为2.71%、3.10%，表明方法准确度良好。

2.3.3 精密度考察：精密吸取参芪扶正注射液(批号：170612)适量，按“2.1.2”项下方法制成供试品溶液，再按“2.2”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果显示，党参炔苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD分别为2.47%、1.95%，表明方法精密度良好。

2.3.4 重复性试验：取参芪扶正注射液(批号：170612)适量，按“2.1.2”项下方法制成供试品溶液，平行制备6份，再按“2.2”项下色谱条件进样分析，记录峰面积。结果显示，党参炔苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD分别为1.49%、2.53%，表明方法重复性良好。

2.3.5 稳定性试验：取参芪扶正注射液(批号：170612)适量，按“2.1.2”项下方法制成供试品溶液，置于自动进样器内，分别在室温(25 ℃)下放置0、1、2、4、6、8及12 h时进样，按“2.2”项下色谱条件进样分析，记录峰面积。结果显示，党参炔苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰面积的RSD分别为1.68%、2.98%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.4 含量测定

取10批参芪扶正注射液，按“2.1.2”项下方法制成供试品溶液，再按“2.2”项下色谱条件进样分析，记录峰面积，计算党参炔苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量。结果显示，各批参芪扶正注射液中，党参炔苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量均达到或超过文献报道的治疗心力衰竭所需量或质量标准所述总皂苷折算量，但各批之间差异显著，且10批样品RSD较大，见表1。

3 讨论

3.1 含量测定指标成分的选择

党参具有补中益气、健脾益肺之功效，黄芪则有益气固表、利水消肿的作用。现代药理学研究结果表明，党参皂苷

表1 10批参芪扶正注射液中党参炔苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量Tab 1 Content of dangshenol and calycosine glycosides in 10 batches of shenqifuzheng injection

具有抗氧化、抑制细胞凋亡及改善供血等作用[6-9]，其中党参炔苷作为指标性成分，具有较好的活性和较强的代表性。而黄芪中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷除具有相似功效外，还有较好的抗氧化活性[10-13]。选取上述2种成分作为参芪扶正注射液质量评价的指标性成分，能更好地反应该制剂在抗心力衰竭方面的功效，为基于功效主治的质量标准细分及优化奠定基础[14-15]。

3.2 指标性成分含量差异及其来源分析

对多批参芪扶正注射液进行含量测定，结果党参炔苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的RSD分别为19.859 6%、20.723 1%。同时，同一批样品，其中一种成分含量较低时，另一成分含量未必会发生相同变化。其原因可能与制备该批样品所用药材有关。由于目前中药材资源存在过度种植和以次充好等问题，质量均一性难以把控；即使是采用规范化生产的中药饮片，也较难妥善解决上述问题。为实现中药特别是中成药稳定、可靠的疗效，建议在各类中药制剂的制备中采用规范化精制，使用指标性成分含量及相关质量信息较为明确的中药材等。

本研究同时测定了参芪扶正注射液中党参炔苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量，方法快速、准确，为后续研究提供了依据。

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