HPLC法同时测定阿奇霉素滴眼液中阿奇霉素及苯扎氯铵的含量

程红

摘 要：本文采用高校液相测定了阿奇霉素滴眼液中苯扎氯铵和阿奇霉素的含量，固定相为：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18液相色谱柱，以乙腈-磷酸盐缓冲液（取0.05 mol·L-1磷酸氢二钾溶液，用磷酸调节pH至8.2）（60∶40）为流动相，检测波长为210nm；阿奇霉素在0.8～4.0mg·mL-1范圍内呈良好的线性关系；苯扎氯铵在4.0～6.0mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。阿奇霉素和苯扎氯铵的平均回收率分别为99.5%、99.4%，RSD为0.83%（n=6）、0.73%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于阿奇霉素滴眼液中阿奇霉素和苯扎氯铵的含量测定。

关键词：阿奇霉素滴眼液；阿奇霉素；苯扎氯铵

阿奇霉素是在红霉素结构上修饰后得到的一种广谱抗生素。苯扎氯铵（Benzalkonium chloride）化学名称为氯化二甲基苄基烃铵，白色蜡状固体或黄色胶状体。苯扎氯铵重要的阳离子季铵盐表面活性剂，属非氧化性杀菌剂，具有广谱、高效的杀菌灭藻能力，广泛用于皮肤和手术器械的消毒，也广泛用于杀菌、消毒、防腐、去垢、增溶等方面。阿奇霉素滴眼液适用于治疗由棒状杆菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、缓症链球菌组、肺炎链球菌的敏感株所引起的细菌性结膜炎。本文采用高校液相测定了阿奇霉素滴眼液中苯扎氯铵和阿奇霉素的含量。

1仪器与试药

LC-100高效液相色谱系统（西安禾普生物科技有限公司）；ZYYLFS-5000L/D验室废水处理、医疗实验室废水处理（四川卓越水处理设备有限公司）；PH-660高精度实验室酸度计（上海禾工科学仪器有限公司）；HWP-5实验室蒸馏水器（郑州泽铭科技有限公司）；上海721G可见光分光光度计（上海圣科仪器设备有限公司）；HAD-KQ-300GVDV三频恒温数控超声波清洗器（北京恒奥德仪器仪表有限公司）；PH-660高精度实验室酸度计（上海禾工科学仪器有限公司）。阿奇霉素和苯扎氯铵对照品由中国药品生物制品检定所提供。磷酸二氢钠（武汉强松精细化学品有限公司）、磷酸（武汉强松精细化学品有限公司）、磷酸二氢铵（武汉强松精细化学品有限公司）、甲酸（武汉强松精细化学品有限公司）、乙腈（武汉强松精细化学品有限公司）、三乙胺（天津市顺隆达科技有限公司）、甲醇（武汉强松精细化学品有限公司）。

2含量测定

2.1色谱条件：确定色谱条件如下[1-5]。Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18液相色谱柱；以乙腈-磷酸盐缓冲液（取0.05 mol·L-1磷酸氢二钾溶液，用磷酸调节pH至8.2）（60∶40）为流动相，检测波长为210nm；流速0.8mL·min-1。

2.2供试品溶液的制备

取阿奇霉素滴眼，精密量取，置10毫升容量瓶内，用流动相定容，摇匀，滤过，即得。

2.3对照品溶液的制备

分别精密称取苯扎氯铵和阿奇霉素对照品20mg、50mg，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4标准曲线的制备

制备浓度为0.8毫克每毫升、1.2毫克每毫升、1.6毫克每毫升、2.0毫克每毫升、2.4毫克每毫升、2.8毫克每毫升、3.2毫克每毫升、3.6毫克每毫升、4.0毫克每毫升的阿奇霉素对照品溶液，制备浓度为4.0毫克每毫升、4.4毫克每毫升、4.8毫克每毫升、5.2毫克每毫升、5.6毫克每毫升、6.0毫克每毫升的苯扎氯铵对照品溶液。分别按阿奇霉素、苯扎氯铵的测定参数继续测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，阿奇霉素在0.8～4.0毫克每毫升范围内呈良好的线性关系；苯扎氯铵在4.0～6.0毫克每毫升范围内呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

取阿奇霉素和苯扎氯铵对照品溶液，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD分别为0.82%和0.83%。结果表明，本实验精密度良好。

2.6重现性试验

分别称取同批阿奇霉素滴眼液样品6份，测定含量并计算样品的RSD值，RSD值为0.89%，0.79%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.7稳定性试验

取样品溶液，分别在0，2，4小时进样测定，供试品阿奇霉素和苯扎氯铵峰面积的RSD分别为0.80%和0.72%。结果表明阿奇霉素和苯扎氯铵至少在4小时内稳定。

2.8回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的阿奇霉素和苯扎氯铵对照品，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.5%和99.4%，RSD分别为0.83%和0.73%。

2.9样品含量测定

依照上述含量测定方法，三批样品的阿奇霉素和苯扎氯铵的含量分别为100.1%、99.8%、101.1%；100.3%、100.8%、101.1%。

3讨论

分别考察0.01mol·L-1磷酸二氢钾溶液（用氢氧化钠调节p H值至6.1）-乙腈（55∶45）；乙腈一水一冰醋酸（15：85：0.1）；乙腈-0.1%甲酸溶液（13∶87）；乙腈-0.05%磷酸二氢钠-三乙胺-磷酸（50：50：0.01：0.01），甲醇-乙腈-0.1%磷酸（75∶10∶15），乙腈-磷酸盐缓冲液（取0.05 mol·L-1磷酸氢二钾溶液，用磷酸调节pH至8.2）（60∶40），甲醇-0.08%磷酸溶液（25：75），甲醇-0.1%磷酸（70∶30），乙腈-磷酸盐缓冲液（取0.05 mol·L-1磷酸氢二钾溶液，用磷酸调节pH至8.2）70∶30），水-甲醇-磷酸（10：90：0.01）为流动相，结果以乙腈-磷酸盐缓冲液（取0.05 mol·L-1磷酸氢二钾溶液，用磷酸调节pH至8.2）（60∶40）为流动相，供试品各峰分离效果最好。

参考文献：

[1]洪博，郭允，李明铭，李丹，曲龙妹，张月秋，赵春杰.阿奇霉素干混悬剂的人体药动学及生物等效性研究[J].中国药房. 2009（08）

[2]姜建国，张西茹，杨梁，吴如金.高效液相色谱法分离测定阿奇霉素及其相关物质[J].中国现代应用药学.2003（05）

[3]刘葆林.微生物法和高效液相色谱法测定注射用阿奇霉素含量的比较[J].安徽医科大学学报.2000（05）

[4]刘红梅，李欣，方光娟.反相高效液相色谱法测定乳糖酸阿齐霉素注射剂的含量[J].哈尔滨医科大学学报.2000（03）

[5]潘强，张宁苏，易大为，王巍，赵晓东.复方阿奇霉素葡萄糖注射液中阿奇霉素的HPLC测定[J].中国医药工业杂志.2005（02）