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毛鸡骨草种子检验规程研究

2018-06-11董青松谭伟东钟一雄朱艳霞李琴何俊兵柯芳

安徽农业科学 2018年35期
关键词:发芽试验

董青松 谭伟东 钟一雄 朱艳霞 李琴 何俊兵 柯芳

摘要 [目的]为规范中药材种子市场,保证种子的质量,研究制定毛鸡骨草种子检验规程。[方法]参照现有种子质量检验的成果,研究毛鸡骨草种子的检验方法,内容包括扦样、净度分析、发芽试验、真实性鉴定、水分测定、四唑测定、重量测定等。[结果]确定其室内检验的标准检验方法,制定了毛鸡骨草种子检验规程。[结论]制定的毛鸡骨草种子检验规程经多批次种子质量检验实践,是可行的。

关键词 毛鸡骨草;种子检验规程;发芽试验;水分测定;四唑测定

中图分类号 S567文献标识码 A文章编号 0517-6611(2018)35-0177-03

毛鸡骨草为广西特产、大宗栽培药材,来源于豆科相思子属植物毛相思子(Abrus mollis Hance),药用全株,具有清热解毒、舒肝止痛的功效,主治黄疸、胁肋不舒、胃脘胀痛、急慢性肝炎、乳腺炎[1],是广西玉林制药集团有限责任公司拳头产品鸡骨草胶囊、复方鸡骨草胶囊等保肝护肝中成药的主要原料,长期的使用使野生资源已不能满足市场需求。从1989年起,经应用企业与科研单位共同攻关,成功实现了毛鸡骨草的野生变家种,并在广西玉林、北流、陆川、贵港、灵山、百色、凌云、临桂等地推广种植。在生产上,毛鸡骨草用种子进行繁殖,由于缺乏种子质量检验技术、标准和有效的管理,劣种坑农的事件时有发生,给药农带来很大损失,也使药材生产得不到保障。笔者通过对其种子扦样、种子质量检验和鉴定方法的研究,获得其种子检验规程,为种子的科研、生产、经营、质量管理提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试种子。

来源于广西玉林制药集团有限责任公司毛鸡骨草种植基地。

1.1.2 仪器及试剂。

各试验所需仪器及试剂见表1[2-5]。

1.2 方法

1.2.1 扦样[2-4,6]。

通过分析多年调查结果,依据毛鸡骨草种子的市场流通情况和单个种植基地的需种量,从多年多批次样品的质量分析结果综合考虑,提出划分种子批的方法,确定其种子批的最大重量和样品最小重量,同时确定初次样品、混合样品、送验样品、试验样品的获取方法。

1.2.2 净度分析。

参照GB/T 3543.2—1995 农作物种子检验规程 净度分析[7]的方法,参考文献[2-4]进行毛鸡骨草种子的净度分析。

1.2.3 发芽试验。

设计了不同的种子预处理(破除硬实、抑菌处理)、发芽温度、发芽床、光照条件各项试验,观察其幼苗发芽规律,总结其幼苗鉴定及试验持续时间[8]。

1.2.4 种子真实性鉴定[2-4]。

采用种子外观形态法。人工或机械随机数取种子100粒4个重复,通过对种子形态、大小、颜色等特征的鉴定检验种子真实性,结果以真实种子的平均值表示,保留一位小数。

1.2.5 水分测定[2-3,9]。

试验方法见表2,试验程序同文献[9]。

1.2.6 生活力的生化测定——四唑测定(TTC)[2-4,10]。

设计了预湿方法和时间、染色前的准备、不同染色液浓度、染色温度及染色时间、染色结果与发芽试验的结果对比、染色图谱的鉴定各项试验。

1.2.7 重量测定。

参照文献[11]的百粒法、千粒法、全量法,各进行4次重复,对各方法取得的种子实测千粒重进行比较分析,确定最适宜方法[2-5]。

2 结果与分析

2.1 扦样

毛鸡骨草种子的扦样,规定其种子批最大重量为1 000 kg,送验样品最小重量为500 g,净度分析试样最小重量为50 g,其他植物种子计数试样最小重量为500 g,水分测定试样最小重量为100 g。

在扦样过程中,划分种子批的方法为:扦样前了解所扦取种子的品种、产地、数量、采收时间、脱粒及干燥、贮藏方法、贮藏条件、贮藏时间和贮藏期间发生的情况、处理方法等。按照同一品种、同一来源、同一年度、同一时期收获和质量基本一致、在规定数量之内划分种子批。

初次样品的扦取、混合样品的配制、送验样品及试验样品的分取按GB/T 3543.2—1995 农作物种子检验规程 扦样[6]执行。

为最大程度地保证样品在检验前后的一致,尽量做到收到样品就开始检验,如耽搁,须将样品保存在凉爽和通风良好的室内。用于复验的样品放在4~8 ℃条件下保存一年。

2.2 净度分析

在研究过程中发现,毛鸡骨草种子中的成分包含饱满种子、瘪种子、小石粒、小泥块、小泥粒、毛鸡骨草植株和果实残片、谷粒等。根据其种子样品实际,参照文献[7],毛鸡骨草的净种子除了完整种子,还包括大于原来大小一半、附着种皮的破碎种子;除了净种子,均为杂质,其中重型杂质指重量大于种子10倍以上的杂质。其他植物种子按净种子的原则选出。

净度分析的结果计算和表示按GB/T 3543.3—1995 农作物种子检验规程 净度分析执行。

2.3 发芽试验

综合种子预处理、发芽温度、发芽床、光照条件、幼苗鉴定、试验持续时间等各项发芽试验研究结果[3,8],毛鸡骨草种子的发芽技术规定:从经充分混合的净种子中,用数种设备或手工随机数取400粒,分为4個重复,每个重复100粒。发芽试验的发芽床为纸上(TP),发芽温度为25 ℃或30 ℃,幼苗的初次计数时间为5 d,末次计数时间为10 d。置床前,破除硬实用95%~98%浓硫酸腐蚀8~9 min或JMNJ-3型精白机磨2 min/400粒,种子消毒用强氯精500倍液浸泡2 h或0.5% KMnO4水溶液浸泡1 h。结果计算和表示按GB/T 3543.4—1995农作物种子检验规程 发芽试验[12]的规定执行。

2.4 种子真实性鉴定

毛鸡骨草种子真实性的鉴别依据:种子卵形或矩圆形,扁平,长3.5~6.0 mm,宽2.3~4.5 mm,厚1.2~2.8 mm。暗褐色、棕色或黑色,表面光亮,常有棕黑相间的花斑。种脐凹陷,线形,种阜小,环状。子叶肥大,黄绿色或白色;胚根白色,短小[3]。

2.5 水分测定

种子的水分测定是除去种子中全部的自由水和束缚水,同时尽最大可能减少氧化、分解或其他挥发性物质的损失[2,13]。由图1可见,整粒样品不断失去水分,并无规律可循,因此用整粒种子进行毛鸡骨草种子的水分测定是不可行的。粗磨样品在试验过程中,先有一个快速的失水期,然后到一个较长时间较缓慢失水的时期,可以将这个快速失水期看作失去自由水及部分束缚水,缓慢期看作失去束缚水但未达到种子物质的氧化、分解。从烘干时间上与GB/T 3543.6—1995规定的“高恒温法样品烘干时间为1 h、低恒温烘干法样品烘干时间为8 h”较吻合[3-4,14]。因此,通过对样品处理、烘干温度、烘干时间的结果比较,以快速、简便为原则,毛鸡骨草种子不需预先烘干的水分测定技术规定:用高恒温烘箱法进行,样品处理为粗磨,铝盒直径5.5 cm,样品量为4~5 g,烘干温度为130~133 ℃,干燥时间为2 h。结果计算和表示按GB/T 3543.6—1995农作物种子检验规程 水分测定[9]执行。

2.6 生活力的生化测定——四唑测定(TTC)

综合预湿方法和时间、染色前的准备、不同染色液浓度、染色温度及染色时间、染色结果与发芽试验的结果对比、染色图谱的鉴定等试验结果[10],毛鸡骨草种子四唑测定的技术规定:破除硬实方法同发芽试验,预湿方式为纸间或水中,预湿时间为30 ℃恒温水浸种5~6 h或纸间12 h,染色前的准备为剥去种皮,染色液浓度为1%,染色温度为30 ℃,染色时间为5~6 h,鉴定时观察表面染色情况,全染成红色或呈略淡的红色为有生活力种子。

2.7 重量测定

重量测定试验中,毛鸡骨草种子的实测千粒重结果,百粒法平均为25.77 g,千粒法平均为25.48 g,全量法平均为25.66 g,3种方法所得的结果在0.05和0.01的显著水平上没有显著差异。说明对于毛鸡骨草种子的重量测定,百粒法、千粒法和全量法均适用。从标准化和国际化的角度出发,选择百粒法作为毛鸡骨草种子的重量测定方法。

3 结论

综合以上研究结果,得到毛鸡骨草种子检验规程,包括扦样、净度分析、发芽试验、真实性鉴定、水分测定、四唑测定(TTC)、重量测定。

近年来,研究小组使用此规程对不同产地和不同年份的43批毛鸡骨草种子的质量进行了检验,也请广西药用植物种子质量检验站的工作人员按此方法进行复检,检验结果经过对比分析发现其结果差异在允许的范围内,说明其方法稳定可靠。证明了此毛鸡骨草种子检验规程适用于毛鸡骨草种子的生产、经营、管理和使用过程的质量检验。

参考文献

[1] 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准[S].南宁:广西科学技术出版社,1990.

[2] 支巨振.《农作物种子检验规程》实施指南:GB/T 3543.1~3543.7—1995[S].北京:中国标准出版社,2004.

[3] 董青松.广州相思子和毛相思子种子标准研究[D].北京:中国协和医科大学,2007.

[4] 董青松,何俊兵,蒙爱东,等.广州相思子种子检验规程研究[J].种子,2012,31(5):123-125.

[5] 闫志刚,马小军,董青松,等.青蒿种子检验规程研究[J].中国种业,2011(1):37-40.

[6] 支巨振,毕辛华,杜克敏,等.农作物种子检验规程 扦样:GB/T 3543.2—1995[S].北京:中国标准出版社,1995.

[7] 支巨振,毕辛华,杜克敏,等.农作物种子检验规程 净度分析:GB/T 3543.3—1995[S].北京:中国标准出版社,1995.

[8] 董青松,陈章源,何俊兵,等.毛相思子种子发芽试验研究[J].种子,2010,29(4):12-15.

[9] 支巨振,毕辛华,杜克敏,等.农作物种子检验规程 水分测定:GB/T 3543.6—1995[S].北京:中国标准出版社,1995.

[10] 韩春艳,孙卫邦,董青松,等.广州相思子和毛相思子种子活力TTC测定方法研究[J].种子,2011,30(7):13-16.

[11] 支巨振,毕辛华,杜克敏,等.农作物种子检验规程 其他项目检验:GB/T 3543.7—1995[S].北京:中国标准出版社,1995.

[12] 支巨振,毕辛华,杜克敏,等.農作物种子检验规程 发芽试验:GB/T 3543.4—1995[S].北京:中国标准出版社,1995.

[13] 胡晋,李永平,颜启传,等.种子水分测定的原理和方法[M].北京:中国农业出版社,2008.

[14] 董青松,孙卫邦,韩春艳,等.广州相思子种子水分测定的研究[J].中国种业,2011(4):48-49.

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