医用可吸收合成缝合线细菌回复突变试验

孙明波 李勇 余洋 于滢 辽宁省医疗器械检验检测院 （辽宁 沈阳 110179）

随着医用可生物降解聚合物材料研究的不断发展，脂肪族聚酯以其独特的生物降解性、生物相容性和生物可吸收性广泛应用于医用生物降解材料领域。其优异的生物降解性来源于聚合物分子链中的酯键，在自然环境和生物体内均易受到进攻而发生断链，进而降解。目前，在此领域研究的最多，应用最广泛的是聚左旋乳酸（PLA）、聚乙交酯（PGA）、聚己内酯（PCL）等。同样为脂肪族聚酯的聚对二氧环己酮（poly（p-dioxanone），PPDO）也具有非常优异的生物相容性、生物可吸收性和生物降解性；此外，由于其分子链中具有独特的醚键，所以具有良好的柔韧性，是理想的手术缝合材料，同时还可以用于制造骨板和组织修复材料，具有广泛的应用前景[1]。本试验通过医用可吸收合成缝合线对鼠伤寒沙门氏TA系列菌株体外染毒，进行遗传毒性测定。

1.资料与方法

1.1 一般资料

仪器：多用生化培养箱（沈阳市伟明医疗设备厂）；立式灭菌器（山东新华医疗器械股份有限公司）；电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；双功能水浴恒温振荡器（江苏金坛亿通电子有限公司）。

试验材料：营养肉汤培养基、琼脂粉（北京索莱宝生物科技有限公司）；碳酸氢钠铵、柠檬酸、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠（国药集团化学试剂有限公司）；磷酸氢二钾、葡萄糖、氯化钾、氯化镁（天津大茂化学试剂厂）；硫酸镁（天津博迪化工股份有限公司）；萄糖-6-磷酸钠盐、辅酶-Ⅱ（氧化型）（SIGMA-ALDRICH公司）；2-氨基芴（2-AF，Dr.Mao公司）；甲基磺酸甲酯（MMS，Dr.Ehrenstorfer GmbH公司）、敌克松（Dr.Ehrenstorfer GmbH公司）；医用可吸收合成缝合线（材质：聚对二氧环己酮）由企业提供。

试验菌株：TA97，TA98，TA100，TA102（美国Moltox公司）来源于上海宝录生物科技有限公司。

1.2 方法[2-5]

1.2.1 试验菌液制备

取营养肉汤培养基5mL，加入无菌试管中，接种TA97、98、100、102，在（37±2）˚C、（115～125r/min）振荡培养18h至对数生长期，活菌数不少于1×109个/mL。试管用黑纸包裹，以防光线照射细菌。

1.2.2 供试液制备

取可吸收合成缝合线按6cm2/mL比例浸提，浸提介质为无菌生理盐水，37˚C浸提24h。

1.2.3 平板掺入法

①融化顶层培养基分装于无菌小试管，每管2mL，在45˚C水浴中保温。②在保温的顶层培养基中依次加入每种试验菌株新鲜菌液0.1mL，混匀；试验样品组分别加0.1mL试验材料浸提液，活化组再加10%S9混合液0.5mL，无活化组加0.2mol/L磷酸盐缓冲液0.5mL，每组3管，再混匀，迅速将每管溶液分别倾入底层培养基上，转动平皿使顶层培养基均匀分布在底层上，平放固化。③阴性对照组分别加入0.1mL浸提介质，活化组再加10%S9混合液0.5mL，无活化组加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲液0.5mL。阳性对照组分别加阳性诱变剂0.1mL，活化组再加10%S9混合液0.5mL，无活化组加0.2mol/L磷酸盐缓冲液0.5mL，其他步骤同“②”。④全部平皿倒置于37˚C培养箱中培养48～72h，观察结果。重复试验1次。

2.结果

表1、表2结果显示，在+S9与-S92种测试系统下，阳性诱变剂诱发回变菌落数均明显增加，样品组回变菌落数与阴性对照相比无明显差异。

3.讨论

在试验中，医用可吸收合成缝合线浸提液制作的方法上参考了GB/T 16886.12-2005所规定的浸提液制备方法，采用了Ames试验方法中的平板掺入法，试验结果为阴性，说明材料无明显的致突变性。但由于存在菌株变异等原因，尚需进行染色体畸变试验、DNA损伤试验等相关的试验，才能对其致突变性作出较全面的预测。

表1.医用可吸收合成缝合线细菌回复突变试验第一次试验(±s)

表1.医用可吸收合成缝合线细菌回复突变试验第一次试验(±s)

组别 TA97 TA98 TA100 TA102-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9空白对照 148.7±17.6 155.0±5.4 52.7±3.8 44.7±1.2 143.3±5.8 149.7±2.4 197.3±6.2 204.3±7.4溶剂对照 140.3±10.8 166.7±8.8 49.0±2.2 50.7±3.1 145.0±2.2 151.7±6.2 205.3±9.0 193.3±5.8样品组 (0.6cm2/皿 ) 146.3±8.6 155.0±6.7 51.0±1.6 49.3±3.8 136.3±7.8 153.7±8.8 195.3±6.7 199.3±6.1 2-AF(10μg/皿) —— —— —— —— —— 578.7±27.0 —— ——敌克松(100μg/皿) 455.0±16.9 636.3±31.4 751.3±29.5 739.7±44.7 679.3±30.7 —— —— ——MMS(10μg/皿) —— —— —— —— —— —— 678.7±26.4 759.7±36.5

表2.医用可吸收合成缝合线细菌回复突变试验第二次试验(±s)

表2.医用可吸收合成缝合线细菌回复突变试验第二次试验(±s)

组别 TA97 TA98 TA100 TA102-S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9 -S9 +S9空白对照 155.3±5.8 150.3±10.5 34.7±1.9 36.0±3.7 179.7±11.1 170.3±7.7 214.0±7.2 218.0±10.2溶剂对照 169.0±2.2 159.7±12.6 38.7±2.0 42.0±1.6 159.3±9.0 167.3±9.0 218.7±15.6 223.3±12.8样品组 (0.6cm2/皿 ) 163.3±7.9 163.3±9.5 43.7±1.2 41±1.6 155.3±10.5 161.0±2.9 215.3±14.8 215.7±11.1 2-AF(10μg/皿) —— —— —— —— —— 721.7±15.9 —— ——敌克松(100μg/皿) 518.7±12.2 728.3±24.2 676.3±28.8 763.7±14.7 703.7±16.3 —— —— ——MMS(10μg/皿) —— —— —— —— —— —— 690.3±11.1 684.0±16.1

[1]徐向奎,冯亚凯,薛燕.对二氧环己酮及其聚合物的研究进展[J].化学工业与工程,2008,25(3):259-263.

[2]GB/T16886.3-2008《医疗器械生物学评价第3部分:遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验》[S].2008.

[3]YY/T0870.1-2013《医疗器械遗传毒性试验第1部分:细菌回复突变试验》[S].2014.

[4]谭玉婷,刘如练,蒙亚江,等.黄芩苷胶囊细菌回复突变试验[J].西北药学杂志,2009,24(5),380-381.

[5]胡燕平,宋捷,马锐,等.骨水泥的遗传毒性研究[J].中国医疗器械杂志,2011,35(6):425-427.