无菌检查法在医疗器械领域的应用

栾庆玲 张文世 高雅松 隋馨 孙长春 吉林省医疗器械检验所 生物性能检验室 人事财务科 （吉林 长春 130000）

无菌检查法是用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法，若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发生微生物污染[1]。该方法是通过设置阳性对照、阴性对照，与待测样品通过直接接种法或者薄膜过滤法进行无菌检查，通过培养管中菌生长情况即可检查出待测样品是否无菌的一种方法。该种方法对环境要求极高，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控[1]。无菌室操作台或净化工作台局部应符合洁净度100级单向流空气区域要求[2]。而正是因为该方法对环境严格要求，使得该方法成为一种可靠的无菌检测方法。医疗器械是在对人体检查、治疗或者手术过程中直接与人身体接触的仪器或者器具。尤其是在手术或人体检查过程中所使用到的医疗器械，如缝合针、注射针、医用纱布、手套等医疗器械更是会在手术或人体检查过程中与人体体内接触。因此该类医疗器械需经过严格灭菌处理，以防在使用过程中因器械所携带的细菌或病毒造成患者感染，甚至加重病情。因此，医疗器械灭菌是否合格的检测方法选择极其重要。本文采用无菌检查法分别对已灭菌处理和未灭菌处理的医疗器械进行检测，将应用在医疗器械中的检测效果报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 仪器

①立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；②电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；③电子天平（常熟市双杰测试仪器厂）；④ISOLOTOR SYSTEMS隔离系统（浙江泰林生物技术股份有限公司）；⑤净化工作台（苏州安泰空气技术有限公司）；⑥生物安全柜（美国Baker）；⑦恒温恒湿箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；⑧霉菌培养基（韶关市泰宏医疗器械有限公司）。

1.1.2 材料

材料1：培养基：①硫乙醇酸盐流体培养基（北京三药科技开发公司）；②胰酪大豆胨液体培养基（北京三药科技开发公司）；③营养琼脂培养基（北京三药科技开发公司）。

材料2：浸提介质：0.9%氯化钠溶液（辰欣药业股份有限公司）。

材料3：待检医疗器械样品：①灭菌组：医用缝合针（21个）、注射针（21个）、医用纱布片（10包）、外科手套（10

副）。②非灭菌组：取上述同一生产厂家、同规格、同数量、同种类医疗器械，通过标准菌株人工污染所得样品。

材料4：采用对照用菌株信息见表1。

1.2 方法

1.2.1 培养基与浸提介质无菌检验

在对两组医疗器械检测前，对所用培养基以及浸提介质进行无菌检查，取浸提介质，以每管1mL的加样量将其分别加入至硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基进行培养。同时将两种空白培养基及加入浸提介质组培养基并分别放置在30～35˚C以及20～25˚C培养箱中培养72h。72h后观察培养基中菌生长情况，若无菌生长则表明培养基与浸提介质无菌检验合格。

1.2.2 阳性对照菌液制备

取金黄色葡萄球菌，用无菌0.9%氯化钠溶液稀释至小于100cfu/mL。

1.2.3 医疗器械无菌检测

①取灭菌组医用缝合针共21个，浸入11管需-厌氧培养管（1管为阳性对照）与10管真菌-需氧培养管，培养管为30mL。未灭菌组重复上述过程。②取灭菌组注射针共21个，浸入11管需-厌氧培养管（1管为阳性对照）与10管真菌-需氧培养管，培养管为30mL。未灭菌组重复上述过程。③将灭菌组医用纱布片，分别剪取代表部位1cm×3cm共21条，浸入11管需-厌氧培养管（1管为阳性对照）与10管真菌-需氧培养管，培养管为30mL。未灭菌组重复上述过程。④将灭菌组外科手套，分别剪取代表部位1cm×3cm共21条，浸入11管需-厌氧培养管（1管为阳性对照）与10管真菌-需氧培养管，培养管为30mL。未灭菌组重复上述过程。

上述操作结束后，将所有需-厌氧培养管在35˚C下培养14d，所有霉菌培养管在25˚C下培养14d。

表1.对照用菌株信息

表2.灭菌组无菌检查结果

表3.未灭菌组无菌检查结果

2.结果

两组医疗器械无菌检查结果：培养完毕后，阳性对照管在经过培养后有菌生长且生长状况良好，阴性对照管培养14d后仍无菌生长。灭菌组所有器械均无菌生长，未灭菌组器械均有菌生长且生长状况良好。具体结果见表2与表3。

3.讨论

无菌检查法目前广泛应用于各个领域，其严格的操作环境与无菌操作要求使得结果具有较高的可靠性[3]。而在医疗器械领域中，由于仪器设备或者器件直接与人体甚至体内接触，更要严格要求对医疗器械的无菌处理。尤其是在手术过程中所用到的缝合针、注射器具、纱布、手套等医疗器械，如果未做灭菌处理就直接应用于人体手术，将会给患者生命健康带来极大的威胁，甚至让患者感染病毒死亡[4,5]。

本文选用了在手术过程中最常用到的手术器械如缝合针、注射针、纱布、手套为医疗器械的代表，通过利用无菌检查法中的直接接种法来对已灭菌处理和未灭菌处理的器械进行无菌检查对比。在整个过程中选用了金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌种。通过将缝合针、注射针直接浸泡、将纱布、手套直接剪取代表部位等方法对两组医疗器械表面进行采样，并接种至相应培养基。通过培养基培养一定时间后的结果显示，阳性对照组有菌生长且生长状况良好，而阴性对照组无菌生长，对于已灭菌组医疗器械而言，检测结果均为阴性无菌生长，表明灭菌处理合格；对于未灭菌组医疗器械而言，检测结果均为阳性有菌生长，表明器械表面有菌。通过对两组结果的对比，可以发现无菌组医疗器械表面较未灭菌组医疗器械表面显著无菌。

综上所述，无菌检查法应用在医疗器械领域中可以有效地对各类医疗器械进行无菌检查，在为保障人民用械安全上应用意义广泛。

[1]国家药典委员会,编.中华人民共和国药典:2015年版 四部[M].北京:中国医药科技出版社,2015-06.

[2]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.中华人民共和国国家标准 GB/T 14233.2-2005《医用输液、输血、注射器具检验方法 第2部分:生物学试验方法》[S].北京:中国标准出版社,2005.

[3]陈丽萍,杨晓莉,李辉.伊曲康唑注射液无菌检查法的建立及方法优化研究[J].药物生物技术,2016,23(1):62-64.

[4]安海芹,孙金秀.再生医疗器械不同清洗方法的对比研究[J].中华医院感染学杂志,2012,22(11):2359-2360.

[5]张宁风,项秀芹,简丽娟,等.不同方法清洗医疗器械与消毒的效果对比[J].中华医院感染学杂志,2016,26(16):3830-3837.