凯氏定氮法对几种胶原类产品中蛋白质含量测定结果分析

2018-06-07冯芷媚袁秦黄敏菊李继彦国家食品药品监督管理总局广州医疗器械质量监督检验中心广东广州510663

中国医疗器械信息 2018年9期

冯芷媚袁秦黄敏菊李继彦国家食品药品监督管理总局广州医疗器械质量监督检验中心（广东广州 510663）

胶原蛋白是一种白色、不透明、无支链的纤维蛋白质。已经有研究证实，胶原蛋白作为细胞外间质的主要成分，在皮肤损伤后的修复过程中发挥着重要的作用。胶原蛋白具有引导上皮细胞迁入缺损区的能力，还可诱导产生趋化因子，如血小板生长因子和纤维连接蛋白等，从而对细胞的生长有趋化作用，提示胶原蛋白可能与皮肤损伤的修复密切相关[1]。胶原蛋白广泛应用于医药卫生领域，代表性的医疗器械产品包括：胶原贴敷料、胶原蛋白海绵、胶原凝胶、胶原缝合线、胶原骨修复材料等。

1.凯氏定氮法测定

胶原贴敷料属于Ⅱ类医疗器械产品，是国家食品药品监督管理部门最早批准的，对于痤疮、皮炎及美容后修复护理有良好作用，能有效地改善皮肤微循环，有利于清洁皮肤角质层、污垢和粉刺黑头等，并对烧烫伤有良好的修复治疗作用。

胶原凝胶主要由胶原、医用级防腐剂、医用级增稠剂等辅料组成。胶原凝胶具有独特的生物相容性和表面活性，加速伤口愈合速度，预防和减少疤痕，提高愈合及修复质量。对干燥、难愈性慢性创面、烧烫伤创面等具有良好的营养修复作用。

胶原蛋白海绵主要以活性医用胶原为组分，在无菌环境中冻干制成的海绵状产品，属于Ⅲ类医疗器械产品，适用于手术残腔充填，创面止血，促进创面愈合。能够起到暂时保护伤口、防止污染、促进愈合的医用材料。有一定的机械强度，柔软，不产生变形；透气，透水汽，保湿，生物相容性好[2]。

凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法，是测定试样中总有机氮最准确和最简单的方法之一。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。

故本文以该法为基础，对不同的胶原类产品中蛋白质的含量进行检测。根据常规的检测方法，在检测过程中发现，不同产品中由于辅料的不同，非蛋白质氮含量也有差异。经钨酸沉淀后可制备无蛋白质的滤液，测定供试品的总氮含量以及无蛋白质滤液中氮含量，可得出产品中的蛋白质含量。

2.结果

实验样品清单见表1。

取一定量的样品，按上文条件进行测定。其结果见表2。海绵、原料测定结果见表3。

3.讨论

根据以上实验过程及结果，可以初步得出以下推论：胶原贴敷料是由无纺布、胶原原液、水组成，在检测中，采用分别来自两家生产商的样品A-1、A-2，其检测标准值分别为1.0%、2.0%，总氮含量分别为79.8%、80.2%，而在经钨酸沉淀后制备的无蛋白质滤液中，氮含量分别为78.6%、77.6%，经计算，样品A-1与样品A-2的蛋白质含量分别为1.2%、2.4%，接近检测标准值。胶原凝胶主要由胶原、医用级防腐剂、医用级增稠剂等辅料组成，在检测中，采用分别来自两家生产商的样品B-1、B-2，其检测标准值均为1.0%，总氮含量分别为9.9%、10.0%，而在经钨酸沉淀后制备的无蛋白质滤液中，氮含量分别为8.9%、8.8%，经计算，样品B-1与样品B-2的蛋白质含量分别为1.0%、1.2%，接近检测标准值。

胶原蛋白海绵是以活性医用胶原为组分，在无菌环境中冻干制成的，不含其他基材及辅料。在检测中，采用分别来自两家生产商的样品C-1、C-2，其检测标准值分别为90%、95%，经计算，样品C-1与样品C-2的蛋白质含量分别为90.2%、96.0%。同时，也对两个厂家的胶原原液D-1、D-2进行检测，其检测标准值分别为95%、90%，蛋白质含量分别为96.1%、92.0%。样品C-1与样品C-2的蛋白质含量接近于胶原原液的蛋白质含量。