当归苦参丸方药5种提取方法的成分比较

王芳 孙秀梅 张兆旺

摘 要：目的 优选当归苦参丸（参归丸）方药的较佳提取工艺。方法 以苦参碱、苦参总碱、阿魏酸、总多糖、干浸膏为指标，对方药的半仿生提取液（SBE）法、半仿生提取醇沉法（SBAE）、水提法（WE）、水提醇沉法（WAE）、醇提液法（EE）分别进行进行比较研究，采用高效液相法测定阿魏酸和苦参碱，酸碱滴定法测定苦参总碱，紫外分光光度法测定总多糖，重量法测定干浸膏。结果 5种方法提取液中成分综合评价值YSBE液>YSBAE液>YWE液>YEE液>YWAE液。结论 当归苦参丸方药以半仿生法提取最佳。

关键词：当归苦参丸方药 提取方法 综合评价

中图分类号：TQ461 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2018）01（b）-0208-03

现在临床使用的当归苦参丸是源于《古今医鉴》的参归丸，当归苦参丸功主清热活血，祛风燥湿，杀虫止痒，临床主要用来治疗湿热蕴结，熏蒸于上所致的头面生疮，湿疹刺痒，酒糟鼻赤以及粉刺疙瘩等[1]。临床使用广泛，本文针对当归苦参丸方药5种提取工艺，从化學成分的角度，以苦参碱、苦参总碱、阿魏酸、总多糖、干浸膏为指标成分，并对测定结果进行加权综合评判，比较5种方法（SBE法[2]、SBAE法、WE法、WAE法、EE法）优劣，进而确定参归丸方药的较佳提取工艺。

1 仪器与材料

药材经作者鉴定，实验用的当归为伞形科植物Angelica sinensis（Oliv.） Diels的干燥根；实验用的苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait的干燥根。

阿魏酸对照品（批号：110773-201012），苦参碱对照品（批号：110805-200508）均购自山东省药品检验所，实验所用甲醇为色谱纯，其余均为分析纯试剂。

2 实验部分

2.1 样品液的制备

SBE液的制备：精密方中25g含挥发性及脂肪油的当归用SFE-CO2萃取后的药渣与处方比例量25g的苦参，混合后加水回流提取3次，每次用水量分别为药材重量的10、6、6倍，三煎水的pH依次为2.00、7.00、8.00，提取时间依次为：2h、0.5h、0.5h。提取液合并，离心，减压浓缩并定容至500mL。

SBAE液的制备：精密量取250mLSBE液，浓缩至50mL，加入计算量的乙醇使醇度达到60%，混匀，密闭，2～10℃放置24h，离心，取上清液，回收乙醇，浓缩液再定容至250mL。

WE液的制备：精密方中25g含挥发性及脂肪油的当归用SFE-CO2萃取后的药渣与处方比例量25g的苦参2种药材，采用煎煮法加热回流提取3次，用水量分别为药材重量的10、6、6倍，3次提取时间依次为2h、0.5h、0.5h，3次提取液合并后离心，取离心液减压浓缩定容至500mL。

WAE液的制备：精密量取250mLWE液，浓缩至50mL，加入计算量的乙醇使醇度达到60%，混匀，密闭，2～10℃放置24h，离心，取上清液，回收乙醇，浓缩液再定容至250mL。

EE液的制备：精密方中25g含挥发性及脂肪油的当归用SFE-CO2萃取后的药渣与处方比例量25g的苦参2种药材，加60%乙醇回流3次，每次用醇量分别为药材重量的10、6、6倍，回流时间分别为2h、0.5h、0.5h，回流液离心，合并，浓缩并定容至500mL。

2.2 供试液的制备

精密量取2.1项下样品液各2mL，水浴蒸至近干，称取硅藻土3g与之混合均匀后，置于真空干燥箱中烘干，以乙酸乙酯：甲酸（19：1）100mL，索氏提取2h，回收溶剂，残渣以甲醇定容至10mL，得到阿魏酸供试液（每1mL供试液相当于原处方药材0.1g）[3]。

取2.1项下样品液各20mL，以浓氨水调节pH值至8.00，置于蒸发皿中蒸至近干，称取硅藻土3g与之混合均匀后，置于真空干燥箱中烘干，研细，精确量取氯仿100mL进行索氏提取2h后，回收溶剂，残渣以氯仿定容100mL，得苦参碱供试液（每1mL供试液相当于原处方药材0.1g）[4]。

取2.1项下样品液各10mL，精密加入95%乙醇17mL，混匀后置于冰箱中4℃静置24h，离心后将沉淀用水溶解，定容至50mL容量瓶，即得当归多糖供试液（每1mL相当于原饮片0.1g），供测定总多糖含量[3]。

2.3 对照液的制备

精密称取阿魏酸对照品9.856mg，置50mL棕色量瓶中，加70%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得阿魏酸对照液（每1ml含阿魏酸197.1μg）。

精密称取苦参碱对照品1.31mg，分别加乙腈-无水乙醇（80：20）溶解至25mL容量瓶中并定容，即得苦参碱对照液（每1ml含苦参碱52.4μg）。

精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品25.36g定容至100mL作为对照品储备液。分别精密吸取对照品储备液各1、2、3、4、5、6mL定容至25mL得对照液[3]。

2.4 阿魏酸的含量测定

精取2.2项下阿魏酸供试液，按色谱柱：Shim-pack CLC-ODS柱；流动相：甲醇-含1%醋酸的水（30：70）；检测波长：322nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；定量阀：20μL的色谱条件测定其含量[3]，结果见表2。

2.5 苦参碱的含量测定

色谱条件与系统适用性试验：以氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液（80：10：10）为流动相；检测波长为220nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；定量阀：20μL的色谱条件测定其含量[4]。结果见表2。

2.6 苦参总碱的含量测定

取2.2项下苦参碱供试液各5mL水浴蒸干，残渣以无水乙醇5mL溶解，水浴蒸干，残渣以乙醚5mL溶解后，加0.01mol/L硫酸10mL，摇匀，水浴挥净乙醚后冷却，加新沸过的冷蒸馏水10mL，甲基红2滴，以0.01318mol/L氢氧化钠滴定至黄色，以无水乙醇5mL和硫酸液（0.01mol·L-1）10mL为空白对照，苦参总碱含量以苦参碱计，苦参总碱的含量测定结果[4]，见表2。

苦参总碱的含量=248×C（X0-X）/5

C：氢氧化钠的浓度

X0：空白对照消耗的氢氧化钠的mL数

X：供试液消耗的氢氧化钠的mL数

248：苦参碱的分子量

2.7 总多糖的测定

以蒸馏水2.0mL加0.12%的硫酸蒽酮溶液4.0mL作为随行空白，精密量取2.3项下葡萄糖对照液品溶液各2.0mL加0.12%的硫酸蒽酮溶液4.0mL，水浴加热10min后，冰水浴冷却10min，紫外-可见分光光度法测定吸光度（检测波长为625nm）。以对照品浓度（mg/mL）为横坐标X轴，吸收度值为纵坐标Y轴，得标准曲线：y=16.602x-0.1579，线性关系良好，测定样品含量[3]。结果见表2。

2.8 干浸膏得率的测定

取2.1项下样品液各5mL置于已恒重的蒸发皿中，以水浴蒸至近干，105℃烘至恒重，称重计算干浸膏得率[3]。结果见表2。

3 数据处理

將5个指标的数据按公式=进行标准化处理。Xi，j为样品液i中成分j的含量，为7个水平样品液i中成分j的平均值，Sj为成分j的标准偏差，即，Xi，j为标准化后的值，加权后求和即得综合评价Y值[3]，见表3。Y值大小顺序是：YSBE液>YSBAE液>YWE液>YEE液>YWAE液。

4 小结与讨论

根据各指标综合评价结果，Y值大小顺序是YSBE液>YSBAE液>WE液Y>YEE液>YWAE液。以SBE液各成分综合评价值最大，Y值大为优，因而，五种提取法比较，以SBE法提取成分最多，成份溶出最彻底。

在5种提取方法中，半仿生提取优于水提取，半仿生提取醇沉法优于水提取醇沉法。结果说明半仿生提取法能从方药中提取更多的成分，提取更完全，体现了半仿生提取法的优越性。

阿魏酸中有羧基和酚羟基，理化性质不稳定，需要现配现测定。苦参碱则相对稳定，实验表明采用半仿生提取法可以提取的更加完全，应与半仿生提取法中酸碱使用有关的缘故。

半仿生提取法是模拟人体胃肠道对中药提取的方法，对于有效成分的提取和吸收都是十分有益的。

参考文献

[1] 张兆旺，孙秀梅.“半仿生提取法”的特点与应用[J].世界科学技术-中药现代化，2000，2（1）：35-38.

[2] 张兆旺，王英姿.当归苦参丸2种方法提取液的成分比较[J].中国中药杂志，1999，24（12）：734-736.

[3] 王芳，孙秀梅，张兆旺.当归两种方法提取液成分比较[J].山东中医杂志，2009，28（4）：261-262.

[4] 王芳，孙秀梅，张兆旺.苦参两种提取方法的比较[J].中成药，2008，30（9）：1369-1370.