瓜蒌皮注射液去热原工艺改进和质量控制

周建华 吴阿萍 刘怡婷

摘 要 目的：降低瓜蒌皮注射液在生产过程中出现细菌内毒素二次污染的风险。方法：使用钛合金过滤器替代板框过滤器，对去热原过程中的脱炭步骤进行工艺优化。结果：工艺优化后所得药液中细菌内毒素的含量较工艺优化前下降超过80%，且其它各项质量指标均符合规定。结论：使用钛合金过滤器代替板框过滤器可以显著降低在脱炭过程中造成细菌内毒素二次污染的风险，且对产品质量不存在负面影响。

关键词 瓜蒌皮注射液 板框过滤 钛合金过滤器 去热原 二次污染

中图分类号：R927.12； TQ460.64 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2018）09-0070-03

Improvement of the process for the depyrogenation of Gualoupi injection and its quality control

ZHOU Jianhua*， WU Aping， LIU Yiting

（SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 200240， China）

ABSTRACT Objective： To reduce the risk of secondary contamination of endotoxin in the manufacturing process for Gualoupi injection. Methods： The process at the decarbonization step for depyrogenation was optimized by using a titanium filter instead of a plate and frame filter used in the original process. Results： The content of endotoxin was reduced by more than 80% and all other quality indicators were in compliance after process optimization. Conclusion： Substitution of a titanium filter for a plate and frame filter can significantly reduce the risk of a secondary contamination of endotoxin at the decarbonization step and there is no negative effect on the quality of Gualoupi injection.

KEy WORDS Gualoupi injection； plate and frame filter； titanium filter； depyrogenation； secondary contamination

瓜蒌皮注射液是由瓜蒌皮作为药材，经过浓缩、提取等多步工艺所制成的中药注射剂。其可有效控制心绞痛、冠心病的发作，改善心肌缺血[1]。在药理机制上的研究表明该注射剂具有多种保护心肌缺血的活性成分，其保护作用呈多途径多靶点[2]。近年来在临床上的应用日益广泛，对心、脑、肺等多脏器的多种疾病的治疗都有显著疗效[3]。

瓜蒌皮注射液以中药材瓜蒌皮作为原料，经过多次的煎煮、乙醇沉淀、树脂交换、浓缩制成浓缩液，再经过热处理和过滤制成提取液，最后通过制剂工艺制成最终成品[4]。

由于瓜蒌皮注射液的原材料为瓜蒌皮中药材，生产工艺步骤繁杂，因此热原是其最重要的质量控制指标之一，在生产过程中，必须考虑热原的有效去除，以保证最终产品质量[5]。

在所注册的瓜蒌皮注射液生产工艺中，采用中药注射剂中常用的活性炭吸附法去除热原[6]，在加入活性炭并進行热处理后，使用板框过滤进行脱炭，脱炭前后药液中的细菌内毒素含量采用定量法测定。我们发现脱炭后细菌内毒素含量有升高的趋势，虽仍处于质量标准范围之内，但存在二次污染的可能。为了进一步提高产品质量，降低二次污染的风险，本研究对脱炭步骤进行了工艺优化。

1 资料和方法

1.1 样品与试剂

瓜蒌皮浓缩液（中间体，批号：20170842、20170843、20170844）由本公司生产；活性炭（药用辅料，批号：1751202）购自上海活性炭厂有限公司；其他试剂均为市售商品。

1.2 仪器与设备

CXAS176-200板框过滤器（上海合懋环保设备有限公司）；1 mm钛合金过滤器（上海格氏流体设备科技有限公司）；WRY-2015微机热原测温仪（上海辽卓科贸有限公司）；BET-48G细菌内毒素定量测定仪（天津市天大天发科技有限公司）；Seven Compact S210 pH计（梅特勒托利多仪器上海有限公司）；UV-2700紫外可见光分光光度计（岛津苏州仪器有限公司）；1200高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 脱炭工艺优化

原工艺在加入活性炭并完成热处理后，采用由澄清板组成的板框过滤器进行脱炭，但由于澄清板无法进行高温灭菌，且没有相关方法对澄清板进行质量控制，使用该方法有可能引入二次污染。优化后的工艺采用钛合金过滤器进行脱炭（图1），由于钛合金过滤器可在121 ℃、30 min的条件下进行湿热灭菌，可有效控制二次污染的风险。

1.3.2 熱原、细菌内毒素、色泽、pH、总固体及含量测定

在《中国药典》（2015年版）中，对于热原的检验方法是使用家兔法[7]，完成单次检验的时间需要至少2 h，且无法提供定量的结果。因此，本研究还采用细菌内毒素浊度法定量测定热原物质[8]。采用两种方法测定可为制剂的整体质量控制和风险降低提供更好的参考依据。

由于使用活性炭去除热原，可能导致主药含量的下降[9]。因此，需对工艺优化前后瓜蒌皮提取液的色泽、pH、总固体及含量等内容进行分析和比较[10]。

1.3.3 指纹图谱测定

使用高效液相色谱法，对瓜蒌皮提取液在工艺优化前后的指纹图谱及其相似度进行考察[11]。

2 结果

2.1 各检测指标比较

工艺优化前后各3批瓜蒌皮提取液中的热原、细菌内毒素、色泽、pH、总固体及含量的比较见表1。

结果表明，工艺优化前后各批样品的热原均合格，但工艺优化后3批瓜蒌皮提取液中细菌内毒素的含量明显下降，说明使用由澄清板组成的板框过滤会带入少量的细菌内毒素，产生二次污染，而使用钛合金过滤器能够有效避免引入二次污染。

工艺优化前后各3批瓜蒌皮提取液的色泽、pH、总固体和含量指标无明显差异。

2.2 瓜蒌皮提取液指纹图谱

工艺优化前后各3批瓜蒌皮提取液的指纹图谱见图2。工艺优化前3批样品的相似度分别为0.92、0.94、0.94；工艺优化后分别为0.94、0.95、0.95，均符合要求，表明工艺优化不会对产品的成分造成影响，也不会引入新的杂质。

3 讨论

此次工艺优化使用钛合金过滤器代替原工艺中使用的由澄清板组成的板框过滤器，降低了由于澄清板无法灭菌所带来的二次污染风险。通过验证表明，工艺优化前的板框过滤的确会引入少量的细菌内毒素而导致二次污染；优化后的钛合金过滤器则由于可进行高温灭菌，并且在一定条件下能够将细菌内毒素灭活[12]，因此能有效避免细菌内毒素的二次污染。

通过对工艺优化前后的瓜蒌皮提取液进行检验，结果表明总固体和含量均能保持在同一水平。且相比于板框过滤器，在保证过滤效果的同时，还能略微减少主药含量的损失。

工艺优化前，过滤每100 kg药液所需的时间约为20 min，工艺优化后约为10 min。因此，在过滤效果不降低的前提下，能够使过滤效率提升一倍。

工艺优化前的板框过滤所使用的澄清板均为一次性耗材，优化后所使用的钛合金过滤器则可以多次重复使用，从而能够降低生产成本，且更环保。

此外，板框过滤器主要由木浆、棉浆和硅藻土等制成，其在工艺过程中除了有细菌内毒素引入之外，可能还会引入其他杂质。因此，其对产品质量的影响还需进一步深入研究。

参考文献

[1] 郑文祥. 瓜蒌皮注射液治疗心绞痛的临床观察[J]. 临床误诊误治， 2008， 21（1）： 37-38.

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[7] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（2015年版）四部[M]. 北京： 中国医药科技出版社， 2015： 153-157.

[8] 孙燕， 吴激， 韩文斌， 等. 动态浊度法定量检测大蒜注射液中细菌内毒素[J]. 中国医院药学杂志， 2002， 22（2）： 87-89.

[9] 范能全. 活性炭去除注射液中热原的工艺条件考察[J]. 中国药师， 2012， 15（9）： 1301-1303.

[10] 瓜蒌皮注射液标准[EB/OL]. [2018-01-02]. http：//www. yaopinnet.com/biaozhun/85/122885f8.htm.

[11] 史国玉， 刘伟， 耿岩玲， 等. 瓜蒌皮药材的HPLC指纹图谱[J]. 中国实验方剂学杂志， 2014， 20（1）： 73-76.

[12] Britt KA， Galvin J， Gammell P， et al. Endotoxin inactivation via steam-heat treatment in dilute simethicone emulsions used in biopharmaceutical processes[J]. Biotechnol Prog， 2014， 30（5）： 1145-1160.