湖州市妇女感染人乳头瘤病毒及基因亚型分析

杨胜 王莉丽 朱玉蓉 刘春玲 刘鹏 沈国松

313000湖州市妇幼保健院检验科(杨胜、朱玉蓉、刘春玲、刘鹏、沈国松)；313000湖州市大浙北专业体检中心(王莉丽)

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种主要存在于人皮肤、黏膜及女性宫颈上皮细胞交界区的微小共价双股环状DNA病毒,无包膜,至今已发现200余种,超过35种可感染人类生殖系统[1]。2012年,子宫颈癌居全球女性最常见恶性肿瘤第4位,新发病例为528 000例[2]。目前已公认,HPV长期和持续感染是宫颈癌的主要诱因,某些高危型HPV反复感染是宫颈癌发生的必要条件。HPV检测已成为宫颈癌筛查和预防的关键问题之一,且HPV亚型分布有年龄、种族和地域性差异[3]。进行HPV流行病学研究,建立地区性HPV感染流行度及主要型别数据库,对HPV疫苗开发研究及应用选择有重要指导作用,对预防HPV感染和防治宫颈癌提供科学依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象选择2016年12月份至2017年11月份在湖州妇幼保健院体检中心参加妇科检查且自愿参加HPV筛查的女性2 830例,平均年龄(41.8±10.4)岁。其中2 631例为单位体检,199例为个人体检。因本次研究对象≤25岁组仅45例,故不单独分组。按年龄分成8组,并计算HPV感染率：≤30岁409例、＜30～≤35岁555例、＜35～≤40岁444例、＜40～≤45岁387例、＜45～≤50岁425例、＜50～≤55岁335例、＜55～≤60岁132例、＞60岁143例。

1.2 研究方法

1.2.1 标本处理及保存：无菌一次性宫颈采样器由江苏健友医疗科技有限公司提供；采用窥阴器或阴道扩张器充分暴露宫颈,用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去,将宫颈采样器伸入宫颈鳞柱上皮交界处,单方向旋转3～5圈采集宫颈脱落细胞,存入装有细胞保存液的洗脱管,密闭,贴条码送检,检验科接受女性宫颈脱落细胞标本后存入-20℃冰箱保存待测。

1.2.2 人乳头病毒分型检测：HPV病毒DNA提取及分型检测均由江苏硕世生物科技有限公司提供,采用罗氏荧光定量PCR仪Cobas z480型进行PCR扩增及检测分析。本试剂盒以人乳头瘤病毒组L1区为靶区域,设计21个亚型特异性引物和探针用以检测21 种 HPV 亚型(HPV16、18、31、59、66、53、33、58、45、56、52、35、68、51、39、82、26、73 及 6,11 和81)。所有操作按试剂及仪器说明书。

1.3 统计学方法数据分析采用SPSS17.0统计学软件处理,感染率等计数资料数据采用百分率(%)表示,两组间及多组间比较采用χ2检验,以P＜0.05作为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV感染率2830例体检标本,HPV阳性269例,HPV总体感染率9.51%；以单一基因感染为主,感染率为8.27%(234/2 830),占所有HPV感染的86.99%(234/269)；双重感染感染率为1.13%(32/2 830,),占 HPV感染的11.9%(32/269)；三重感染和四重感染分别发现2例和1例。具体数据见表1。单一感染高危型HPV亚型前5位依次为58、16、52、53、66；多重感染高危型亚型前五位依次为 52、16、66、39、58；单一感染与多重感染低危型HPV亚型均以81为主。其中在多重感染中未检出HPV亚型33、37。详细数据见图1。

2.2 HPV不同基因亚型分布本次研究试剂盒检测21种亚型中,检测出19种基因亚型,未检出HPV28和HPV82两种亚型。因检测标本存在单一基因和多重基因感染,故2 830例实际检出HPV基因308例次,高危亚型感染率9.11%(258/2 830),占HPV基因总检出数的83.77%(258/308),以58、16、52为主,阳性率分别为 1.48%(42/2 830),1.31%(37/2 830),1.10%(31/2 830)。低危亚型感染率1.77%(50/2 830),占HPV基因总检出数的16.23%(50/308),以81型为主,阳性感染率为1.27%(36/2 830)。具体数据见表2。

表1 2 830例体检女性HPV感染情况Tab.1 HPV infection in 2 830 women who underwent physical examination

2.3 各年龄组人群HPV感染分布情况本研究8年龄组中,以56～60岁组女性HPV感染率最高(13.64%,18/132),31～35岁组女性HPV感染率最低(7.75%,43/555),两组比较差异有统计学意义(χ2=4.57,P=0.033)；单一基因感染率同样以56～60岁组最高(12.12%,16/132),31～35岁组女性HPV感染率最低(6.31%,435/555),两组间比较差异有统计学意义(χ2=5.25,P=0.022)。总感染率和单一基因感染率均以31～35岁年龄段最低,56～60岁年龄段最高；以31～35岁开始随年龄增长而增高,在56～60岁达峰值,然后开始下降,见图2。本研究还显示HPV总感染率不同年龄组间差异无统计学意义(P＞0.05),但HPV高危亚型感染率不同年龄组间差异具有统计学意义(χ2=23.66,P=0.001),详细数据见表3。

表2 269例体检女性HPV亚型分布情况Tab.2 HPV subtypes’ distribution of 269 women who underwent physical examination

3 讨论

图1 单一感染及多重感染HPV亚型分布Fig.1 Distribution of HPV subtypes of single infection and multiple infection

图2 各年龄组HPV感染率Fig.2 Infection rate of HPV in different age groups

德国医学科学家、病毒学家Harald zur Hausen从1970年起致力于研究HPV与宫颈癌之间的关系,结果证明某些类型的HPV就是宫颈癌的病原体,并以此于2008年获得诺贝尔生理及医学奖。高危型HPV最早被发现与女性宫颈癌发病关系密切,是女性宫颈癌的独立危险因素[4],华东地区宫颈鳞状细胞癌组织HPV感染率为90.1%[5],HPV早期筛查、早期干预对宫颈癌的预防和治疗有着积极的意义；近年来研究表明,HPV感染与女性乳腺癌发病同样具有较强的关联性[6],HPV感染致病性广泛。

表3 HPV不同年龄组的感染情况Tab.3 Infection with HPV in different age groups

研究报道显示,中国女性宫颈上皮脱落细胞HPV感染率为13.5% ～45.6%,不同地区感染率有差异[7]。湖州地区女性HPV总感染率为9.51%,以单一基因型感染为主,占86.99%,多重感染以二重感染为主。湖州地区HPV总感染率低于南京地区HPV的26.8%及温州地区的18.66%[8-9],两地均以单一基因型感染为主与本地区相同。可能原因为湖州地区过去数10年坚持1年两次下乡妇女病普查,提高全社会关注女性健康、防治女性疾病的意识提高女性健康水平和生活质量。不同地域HPV感染率差异与地域经济条件、标本采集、人群分布、生活习惯及人口流动等因素密切相关。另一原因为本次研究对象≤25岁组人数较少,文献报道≤25岁是女性HPV感染的高峰期。

湖州地区妇女常见HPV高危亚型为58、16、52型,单一基因感染由高到低依次为 52、16、66、39、58型；文献报道上海市妇女常见的HPV高危亚型为52、58、16、53、51 和 55 型[10],广州地区妇女常见的HPV亚型为52、16、58[11]。HPV亚型分布地域差异,因此HPV分型检测的推广意义重大,快速准确检测HPV病毒及基因型联合女性宫颈癌细胞学筛查的二级防御仍然是宫颈癌预防工作的主要策略。

HPV流行率具有年龄分布特点,Smith[12]报道≤25岁是女性HPV感染的高峰期,随年龄增长感染率下降；35～50岁妇女感染率有地域性差异；60岁以上妇女感染率存在不同趋势。适应性免疫应答缺乏以及性生活活跃对HPV感染敏感是导致30岁以下感染率较高的主要原因,但因年轻妇女机体免疫功能强,大多数感染呈一过性可自愈,35岁后随年龄增长逐渐转为持续性感染,导致感染率呈逐渐上升趋势；56～60岁组感染率达最高峰可能原因为绝经期后女性内分泌激素水平变化较大引起的生理和免疫调节紊乱。高危型感染率不同年龄组差异有统计学意义,高危型HPV持续性感染与宫颈上皮瘤变(CIN)和宫颈癌的发生、发展关系密切,且有地域差异,因此,研究本地区高危型HPV亚型年龄分布特点对宫颈癌预防及治疗有重要的临床指导价值。

HPV疫苗的临床应用是人类首次尝试通过疫苗的接种消灭一种癌症,具有时代意义。中国食品药品监督管理总局(CFDA)2016、2017年分别批准2价和4价HPV疫苗上市,中国香港9价HPV疫苗也已上市,宫颈癌的一级预防成为事实,对预防、控制HPV感染,降低宫颈癌发病率及死亡率有着重大作用。建立地区HPV感染流行度及主要型别数据库可指导临床疫苗选择应用,为研发适合本地区人群的HPV疫苗提供科学依据。

利益冲突无